郭耀明

摘 要 由于禽流感毒株的不斷變異，為了有效防控禽流感疫情的發(fā)生，農(nóng)業(yè)部推廣使用重組禽流感病毒H 5亞型二價滅活（Re-4+Re-6）疫苗，為了保證該疫苗能夠安全有效的使用，福建省福安市溪潭鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站進行了小范圍應(yīng)用試驗。

關(guān)鍵詞 高致病性；禽流感；疫苗；免疫；應(yīng)用試驗

中圖分類號：S831.7 文獻標(biāo)志碼：A 文章編號：

高致病性禽流感是一種人畜共患病，在特定環(huán)境下，可感染人，當(dāng)人感染高致病性禽流感后，死亡率較高，并且嚴(yán)重危害公共安全衛(wèi)生，去年農(nóng)業(yè)部推出重組禽流感病毒H 5亞型二價滅活（Re-4+Re-6）疫苗，為了保證新疫苗的安全使用，動物疫病預(yù)防控制中心在新疫苗大批使用前先做小范圍試驗。

1 試驗材料

1.1 試驗動物

挑選一個1 000只蛋雞養(yǎng)殖戶進行免疫。

1.2 實驗疫苗

農(nóng)業(yè)部發(fā)放的重組禽流感病毒H 5亞型二價滅活 （Re-4+Re-6）疫苗（生產(chǎn)廠家：青島易邦生物工程有限公司批準(zhǔn)文號：獸藥生字（2012）150132192）。

2 免疫步驟

2.1 免疫前準(zhǔn)備

在實驗前，將所用注射器采用高壓鍋滅菌的方法進行消毒，（121℃，30min），準(zhǔn)備一次用針頭共計1 100只，75%酒精棉球，免疫時使用一次性手套、防護帽子和腳套。進入養(yǎng)殖場的車輛要進行徹底消毒。

2.2 免疫過程

2012年6月19日夜晚，在雞群都上架且雞群安靜的情況下，對雞群免疫注射了重組禽流感病毒H 5亞型二價滅活（Re-4+Re-6） 疫苗，按照免疫注射規(guī)程進行免疫注射，注射免疫完成后觀察雞群有無異常情況。

2.3 免疫時注意事項

①禽流感病毒疫苗感染雞或健康狀況異常的雞群切忌使用。

②在保存疫苗的過程中嚴(yán)禁凍結(jié)疫苗。

③疫苗若出現(xiàn)破損、異物或破乳等異?，F(xiàn)象切忌使用。

④使用前應(yīng)將疫苗恢復(fù)至常溫，使用時充分搖勻。

3 免疫抗體監(jiān)測

3.1 3-1采樣工作

免疫完成21 d后，按照10%的比例隨機抽取100只雞進行翅靜脈采樣，準(zhǔn)備好無菌一次性試管和2 mL無菌注射器，按照北京市動物采血規(guī)程進行采樣，在采樣過程中，將血液擺放成一個斜邊，這樣能有利于血清的析出，采樣完成后要將采血的試管用酒精燈進行封口，防止在運輸途中出現(xiàn)灑漏現(xiàn)象，影響抗體檢測的準(zhǔn)確性。

3.2 3-2抗體檢測

3.2.1 3-2-1抗體檢測的試驗地點

將采回的血樣送到動物疫病預(yù)防控制中心化驗室。

3.2.2 3-2-2抗體檢測試劑

試劑來源為：為中國農(nóng)科院哈爾濱獸醫(yī)研究所生產(chǎn)。AI-H5N1 Re-4批號是201001；陽性血清批號200601；AI-H5N1 Re-6批號是2012001；陽性血清批號2012001；稀釋液由有資質(zhì)的生產(chǎn)場家提供，并按試驗要求調(diào)好pH值。

3.3 3-3-3抗體檢測的方法

血凝試驗和血凝抑制試驗；嚴(yán)格按照國標(biāo)方法（GB/T18936-2003）進行檢測。

4 免疫抗體判定

①禽流感抗體檢測水平，血凝抑制（ HI）抗體水平大于或者等于4log2時，判定為免疫效力良好。

②血凝抑制（HI）抗體水平大于或者等于4log2的血樣占被檢測血樣數(shù)量≥70%，為雞群群體免疫合格。3-3-4抗體檢測結(jié)果如下。

表1 抗體結(jié)果分析（表1）

類型 ㏒1 ㏒2 ㏒3 ㏒4 ㏒5 ㏒6 ㏒7 ㏒8 ㏒9 ≥㏒10 合格率%

AI-H5N1 Re-4 1 7 15 14 10 3 100

AI-H5N1 Re-4 5 18 20 6 1 100

5 實驗結(jié)論

①免疫重組禽流感病毒H 5亞型二價滅活（Re-4+Re-6）疫苗后，試驗雞雞群精神狀態(tài)良好、采食、飲水正常、產(chǎn)蛋率等指標(biāo)未發(fā)生明顯的變化，且雞群無死亡現(xiàn)象。

②通過此次試驗和免疫抗體的監(jiān)測可以看出，重組禽流感病毒H 5亞型二價滅活（Re-4+Re-6）疫苗對禽流感Re-4、Re-6毒株有保護作用，免疫合格率可以達到100%。

（責(zé)任編輯：趙中正）