陳龍　王元生　畢江華等

摘要：在同期發(fā)情方案中，為更加科學(xué)合理地使用CUE-MATE陰道埋置栓，提高移植妊娠率，對(duì)同批次2組西門塔爾雜交受體牛分別埋植CUE-MATE和CIDR，使用相同同期發(fā)情方案，比較發(fā)情率，并對(duì)CUE-MATE方案中不同發(fā)情時(shí)間階段的牛群移植受胎率進(jìn)行對(duì)比分析。結(jié)果表明：埋植不同陰道栓的受體牛發(fā)情率均在90%以上，差異不顯著（90.38% vs 90.00%，P>0.05）；兩地埋植CUE-MATE不同發(fā)情時(shí)間的受體牛群，移植鮮胚妊娠率無差異（100% vs 100%，P>0.05；100% vs 80%，P>0.05），移植凍胚妊娠率差異不顯著（41.18% vs 28.57%，P>0.05；5769% vs 33.33%，P>0.05），提前發(fā)情組凍胚妊娠率下降趨勢(shì)明顯。使用CUE-MATE同期發(fā)情時(shí)，撤栓時(shí)間應(yīng)推遲10～12 h，使得胚胎移植時(shí)受體內(nèi)環(huán)境與胚胎發(fā)育階段相一致，保證鮮胚和凍胚均可獲得較理想的受胎率。

關(guān)鍵詞：同期發(fā)情；受體牛；妊娠率；CUE-MATE；CIDR；凍胚；鮮胚

中圖分類號(hào)： S823.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）07-0213-02

收稿日期：2013-10-14

基金項(xiàng)目：國家科技支撐計(jì)劃（編號(hào)：2011BAD19B01）；石家莊國際科技合作計(jì)劃（編號(hào)：12750066A）；國家農(nóng)業(yè)科技成果轉(zhuǎn)化資金（編號(hào)：2013GB2A200043）。

作者簡(jiǎn)介：陳龍（1982—），男，甘肅蘭州人，碩士，畜牧師，主要從事動(dòng)物繁殖生物技術(shù)研究。E-mail：chenlong42451@163.com。

通信作者：余文莉，博士，研究員，主要從事動(dòng)物繁殖生物技術(shù)研究。Tel：（010）84924137；E-mail：anboyuwenli@hotmail.com。為提高奶牛的繁殖率，縮短產(chǎn)犢間隔，在牧場(chǎng)繁育管理或者大規(guī)模胚胎移植操作中，有必要使用陰道埋植栓等設(shè)備進(jìn)行同期發(fā)情。市面上用于同期發(fā)情的陰道栓主要有2種：CUE-MATE與CIDR[1-2]，其主要藥物成分是孕酮，含量分別為1.56 g和1.38 g，附著載體為白色螺旋硅膠軟體（圖1）。作用原理是陰道栓埋植入陰道后，緩慢恒定低劑量釋放孕酮，經(jīng)陰道黏膜吸收直接到達(dá)靶器官，通過負(fù)反饋?zhàn)饔靡种拼贵w前葉促性腺激素及其他生長因子的產(chǎn)生，而外源孕激素作用期間不影響黃體的自然消退；維持一定時(shí)間后撤栓，體內(nèi)孕酮含量急劇下降，卵泡發(fā)育到成熟的抑制解除，使卵泡細(xì)胞發(fā)育成熟，同時(shí)在雌激素作用下，母牛在同一時(shí)間段內(nèi)表現(xiàn)發(fā)情狀況[3-4]。

在胚胎移植實(shí)踐中，對(duì)同批次受體牛分別埋植CUE-MATE和CIDR，使用成熟的21 d方案進(jìn)行受體牛同期發(fā)情，CUE-MATE處理組部分牛群集體提前發(fā)情。本試驗(yàn)對(duì)CUE-MATE方案中不同發(fā)情時(shí)間的牛群移植陰道栓，并對(duì)受胎率進(jìn)行對(duì)比分析，優(yōu)化適用于CUE-MATE的同期發(fā)情方案，以提高胚胎移植妊娠率。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1受體牛河北天和肉牛養(yǎng)殖有限公司和張北華田牧業(yè)提供的2胎以內(nèi)西門塔爾雜交受體牛：產(chǎn)后70 d以上，繁殖系統(tǒng)正常，卵巢有活性，膘情適中。

1.1.2藥品CUE-MATE孕酮栓，由新西蘭Bioniche Animal Health Pty公司生產(chǎn)，含孕酮1.56 g/支；CIDR孕酮栓，由美國輝瑞動(dòng)物保健品公司生產(chǎn)，含孕酮1.38 g/支；促卵泡素（FSH），由中科院動(dòng)物所生產(chǎn)，10 mg/瓶；氯前列烯醇（PG），由齊魯動(dòng)物保健品公司生產(chǎn)，0.322 mg/支；維生素ADE、高錳酸鉀、利多卡因等選用國產(chǎn)優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

1.2方法

1.2.1受體牛同期發(fā)情方案（CIDR/CUE-MATE+PG方法）在發(fā)情周期的任何一天08：00—10：00放置陰道栓（土霉素粉+CIDR或土霉素粉+CUE-MATE），同時(shí)肌注維生素ADE注射液5 mL/頭，當(dāng)日記為0 d；9 d時(shí)的08：00同時(shí)肌注PG 0.6 mg/頭和維生素ADE注射液5 mL/頭；12 d時(shí)的08：00撤栓；13～14 d全天觀察發(fā)情，準(zhǔn)確記錄；21 d進(jìn)行胚胎移植。

1.2.2受體牛發(fā)情鑒定13～14 d（撤栓后24 h）開始觀察發(fā)情并記錄，以站立穩(wěn)定、接收爬跨為標(biāo)準(zhǔn)。撤栓后24～36 h接受爬跨定義為提前發(fā)情，36～60 h為正常發(fā)情。

1.2.3受體牛胚胎移植直腸檢查受體牛黃體發(fā)育狀況及子宮健康狀況，結(jié)合發(fā)情記錄確定移植頭數(shù)，保定牛只，高錳酸鉀溫水清洗外陰，采用尾椎硬膜外注射5 mL利多卡因方法麻醉，待尾部松弛后進(jìn)行非手術(shù)法移植，胚胎移入黃體發(fā)育側(cè)的子宮角深部。

1.2.4妊娠檢查胚胎移植后50～60 d采用直腸把握法進(jìn)行妊娠檢查。

1.3試驗(yàn)數(shù)據(jù)分析

運(yùn)用卡方檢驗(yàn)（χ2）作顯著性分析。

2結(jié)果與分析

2.1埋植不同陰道栓的受體牛發(fā)情時(shí)間比較

選擇同批次受體牛分為2組，埋植CUE-MATE和CIDR陰道栓，實(shí)施相同的同期發(fā)情方案并撤栓后觀察發(fā)情。由表1可見，2組受體牛發(fā)情率均在90%以上，差異不顯著（9038% vs 90.00%，P>0.05）；CUE-MATE組撤栓后24～36 h有15頭發(fā)情，即提前發(fā)情，CIDR組撤栓后只有1頭提前發(fā)情，其他集中在36～60 h發(fā)情，兩者差異顯著（28.85% vs 250%，P<0.05）。

3討論與結(jié)論

同期發(fā)情的目的是能夠使受體牛在預(yù)期時(shí)間范圍內(nèi)集中發(fā)情、排卵。目前同期發(fā)情的方法已由單純一類激素制劑向陰道栓和激素制劑配合使用方向發(fā)展，如近年來發(fā)展起來的CIDR+PG、CUE-MATE+PG法等[5-7]。和占星等將CUE-MATE+PG法同期發(fā)情方案與2次PG法相比，前者同期化程度和可移植率更高，更適用于規(guī)?；翀?chǎng)集中應(yīng)用[5，8]。本試驗(yàn)中受體牛使用CIDR和CUE-MATE 2種陰道栓的同期發(fā)情率均高于90%，但是，組間受體牛發(fā)情時(shí)間出現(xiàn)了差異，CIDR組在撤栓后36 h左右開始正常發(fā)情，CUE-MATE組有近1/3牛在撤栓后24 h即出現(xiàn)發(fā)情現(xiàn)象，這可能是由于CUE-MATE中孕酮含量較高（1.56 g/支 vs 1.38 g/支），緩釋的孕酮在血漿中濃度也高于CIDR組[9]，對(duì)卵泡發(fā)育的負(fù)反饋抑制作用更強(qiáng)，撤栓后孕酮水平急劇下降更明顯，刺激促性腺激素釋放激素水平升高，促進(jìn)卵泡發(fā)育并成熟的速度更快，因而表現(xiàn)出發(fā)情提前的現(xiàn)象。endprint

兩地牧場(chǎng)受體牛均埋植CUE-MATE，實(shí)施相同的21 d同期發(fā)情方案，都出現(xiàn)一定比例的提前發(fā)情牛。以撤栓后 36 h 為界，根據(jù)發(fā)情時(shí)間分組統(tǒng)計(jì)移植妊娠率，提前發(fā)情牛與正常發(fā)情牛的鮮胚和凍胚移植的妊娠率無差異，但是凍胚移植妊娠率前者降低12.61～24.36百分點(diǎn)。這主要是由于正常發(fā)情牛集中在撤栓后36～60 h發(fā)情，21 d移植正好是受體牛發(fā)情后7～7.5 d，保證了胚胎發(fā)育階段與受體生理狀況的一致性；而提前發(fā)情牛集中在撤栓后24～36 h發(fā)情，21 d移植時(shí)受體牛處于發(fā)情后8 d，一方面凍胚經(jīng)歷的凍融過程及冷凍保護(hù)劑毒性對(duì)胚胎細(xì)胞骨架、線粒體及透明帶超微結(jié)構(gòu)造成了一定程度不可逆的物理和化學(xué)損傷[10]，降低其與母體妊娠信號(hào)識(shí)別的能力[11]，另一方面冷凍胚胎解凍后復(fù)蘇需要一個(gè)過程，使其在子宮內(nèi)的發(fā)育滯后于鮮胚，這一滯后也使凍胚與提前發(fā)情的受體的同步差更大。因此，凍胚在發(fā)情后8 d移植會(huì)低于發(fā)情后7～7.5 d移植的妊娠率，也低于同時(shí)期發(fā)情的鮮胚移植妊娠率。

使用CUE-MATE栓處理受體牛群，建議受體牛撤栓時(shí)間較常規(guī)CIDR方案推遲10～12 h，其他保持一致，以使得胚胎移植時(shí)受體所處時(shí)間與胚胎發(fā)育階段相一致，保證鮮胚和凍胚均可獲得較理想的受胎率。另外，CUE-MATE與CIDR相比較，其栓槍設(shè)計(jì)直徑較粗，裝槍略顯復(fù)雜，埋植速度較慢，但是螺旋軟體與軟骨支架可以方便分離，便于清洗及重復(fù)使用，并且持栓率高，達(dá)到100%。在實(shí)際生產(chǎn)中，須考慮牛群規(guī)模、月齡、膘情和日程安排等因素，挑選適宜的陰道栓用于生產(chǎn)，同時(shí)結(jié)合發(fā)情觀察，提高繁殖率。

參考文獻(xiàn)：

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[11]畢江華，馮春濤，余文莉，等. 妊娠識(shí)別信號(hào)影響牛胚胎移植妊娠率的研究[J]. 中國奶牛，2012（15）：20-22.endprint

兩地牧場(chǎng)受體牛均埋植CUE-MATE，實(shí)施相同的21 d同期發(fā)情方案，都出現(xiàn)一定比例的提前發(fā)情牛。以撤栓后 36 h 為界，根據(jù)發(fā)情時(shí)間分組統(tǒng)計(jì)移植妊娠率，提前發(fā)情牛與正常發(fā)情牛的鮮胚和凍胚移植的妊娠率無差異，但是凍胚移植妊娠率前者降低12.61～24.36百分點(diǎn)。這主要是由于正常發(fā)情牛集中在撤栓后36～60 h發(fā)情，21 d移植正好是受體牛發(fā)情后7～7.5 d，保證了胚胎發(fā)育階段與受體生理狀況的一致性；而提前發(fā)情牛集中在撤栓后24～36 h發(fā)情，21 d移植時(shí)受體牛處于發(fā)情后8 d，一方面凍胚經(jīng)歷的凍融過程及冷凍保護(hù)劑毒性對(duì)胚胎細(xì)胞骨架、線粒體及透明帶超微結(jié)構(gòu)造成了一定程度不可逆的物理和化學(xué)損傷[10]，降低其與母體妊娠信號(hào)識(shí)別的能力[11]，另一方面冷凍胚胎解凍后復(fù)蘇需要一個(gè)過程，使其在子宮內(nèi)的發(fā)育滯后于鮮胚，這一滯后也使凍胚與提前發(fā)情的受體的同步差更大。因此，凍胚在發(fā)情后8 d移植會(huì)低于發(fā)情后7～7.5 d移植的妊娠率，也低于同時(shí)期發(fā)情的鮮胚移植妊娠率。

使用CUE-MATE栓處理受體牛群，建議受體牛撤栓時(shí)間較常規(guī)CIDR方案推遲10～12 h，其他保持一致，以使得胚胎移植時(shí)受體所處時(shí)間與胚胎發(fā)育階段相一致，保證鮮胚和凍胚均可獲得較理想的受胎率。另外，CUE-MATE與CIDR相比較，其栓槍設(shè)計(jì)直徑較粗，裝槍略顯復(fù)雜，埋植速度較慢，但是螺旋軟體與軟骨支架可以方便分離，便于清洗及重復(fù)使用，并且持栓率高，達(dá)到100%。在實(shí)際生產(chǎn)中，須考慮牛群規(guī)模、月齡、膘情和日程安排等因素，挑選適宜的陰道栓用于生產(chǎn)，同時(shí)結(jié)合發(fā)情觀察，提高繁殖率。

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[10]張慧，蘇雷. 家畜胚胎冷凍與胚胎結(jié)構(gòu)損傷的研究[J]. 養(yǎng)殖技術(shù)顧問，2009（6）：144-146.

[11]畢江華，馮春濤，余文莉，等. 妊娠識(shí)別信號(hào)影響牛胚胎移植妊娠率的研究[J]. 中國奶牛，2012（15）：20-22.endprint

兩地牧場(chǎng)受體牛均埋植CUE-MATE，實(shí)施相同的21 d同期發(fā)情方案，都出現(xiàn)一定比例的提前發(fā)情牛。以撤栓后 36 h 為界，根據(jù)發(fā)情時(shí)間分組統(tǒng)計(jì)移植妊娠率，提前發(fā)情牛與正常發(fā)情牛的鮮胚和凍胚移植的妊娠率無差異，但是凍胚移植妊娠率前者降低12.61～24.36百分點(diǎn)。這主要是由于正常發(fā)情牛集中在撤栓后36～60 h發(fā)情，21 d移植正好是受體牛發(fā)情后7～7.5 d，保證了胚胎發(fā)育階段與受體生理狀況的一致性；而提前發(fā)情牛集中在撤栓后24～36 h發(fā)情，21 d移植時(shí)受體牛處于發(fā)情后8 d，一方面凍胚經(jīng)歷的凍融過程及冷凍保護(hù)劑毒性對(duì)胚胎細(xì)胞骨架、線粒體及透明帶超微結(jié)構(gòu)造成了一定程度不可逆的物理和化學(xué)損傷[10]，降低其與母體妊娠信號(hào)識(shí)別的能力[11]，另一方面冷凍胚胎解凍后復(fù)蘇需要一個(gè)過程，使其在子宮內(nèi)的發(fā)育滯后于鮮胚，這一滯后也使凍胚與提前發(fā)情的受體的同步差更大。因此，凍胚在發(fā)情后8 d移植會(huì)低于發(fā)情后7～7.5 d移植的妊娠率，也低于同時(shí)期發(fā)情的鮮胚移植妊娠率。

使用CUE-MATE栓處理受體牛群，建議受體牛撤栓時(shí)間較常規(guī)CIDR方案推遲10～12 h，其他保持一致，以使得胚胎移植時(shí)受體所處時(shí)間與胚胎發(fā)育階段相一致，保證鮮胚和凍胚均可獲得較理想的受胎率。另外，CUE-MATE與CIDR相比較，其栓槍設(shè)計(jì)直徑較粗，裝槍略顯復(fù)雜，埋植速度較慢，但是螺旋軟體與軟骨支架可以方便分離，便于清洗及重復(fù)使用，并且持栓率高，達(dá)到100%。在實(shí)際生產(chǎn)中，須考慮牛群規(guī)模、月齡、膘情和日程安排等因素，挑選適宜的陰道栓用于生產(chǎn)，同時(shí)結(jié)合發(fā)情觀察，提高繁殖率。

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