鄒旭鳳 任一帆 趙瑞

穿孔素基因?qū)κ裳毎C合征患兒細胞因子影響與臨床分析

鄒旭鳳 任一帆 趙瑞

目的 探討穿孔素基因?qū)LH患兒血清IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ及新碟呤的影響。方法 應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測20例HLH患兒確診時、化療第1～2周、第2～3周、第3～4周、第5～7周及8～10周, 共6組的血清IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ及新碟呤水平變化,11例患兒穿孔素基因陰性, 5例患兒穿孔素基因陽性, 對穿孔素陰性組和陽性組的細胞因子水平進行比較。 結(jié)果 穿孔素陽性組的IL-10、IL-12、TNF-α水平明顯高于穿孔素陰性組, 兩組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。穿孔素陽性組的IL-18水平高于穿孔素陰性組, 兩組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。穿孔素陽性組與穿孔素陰性組相比新碟呤水平無差異, 兩組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。結(jié)論 穿孔素基因影響HLH患兒IL-10、IL-12、TNF-α及IL-18的表達。

穿孔素基因；噬血細胞綜合征；細胞因子；臨床分析

噬血細胞綜合征(HPS), 又稱噬血細胞性淋巴組織細胞增多癥(HLH), 該病病因病機錯綜復(fù)雜, 早期癥狀不典型, 診斷非常困難, 常因持續(xù)發(fā)熱而與感染性疾病等相混淆, 且病情進展迅速, 許多患兒因不能明確診斷和及時治療導(dǎo)致死亡。本研究對收治的16例HLH患兒血清細胞因子IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ及新碟呤進行檢測, 觀察其變化,探討穿孔素基因?qū)LH患兒細胞因子的影響, 現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 以2010年1月～2012年5月本科收治的20例HLH患兒為研究對象, 20例患兒中15例患兒穿孔素基因陰性, 5例穿孔素基因陽性。20名患兒中男12例, 女8例；年齡4個月～4.9歲。病例診斷均符合HLH-2004診斷標準,確診前無糖皮質(zhì)激素應(yīng)用史。收集20例患兒確診時、化療第1～2周之間、第2～3周之間、第3～4周之間、第5～7周之間及第8～10周之間的血清標本, 檢測IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ及新碟呤水平變化,令穿孔素基因陰性的15例患兒為穿孔素基因陰性組, 5例穿孔素基因陽性的患兒為穿孔素陽性組, 將穿孔素基因陰性患兒和陽性患兒的細胞因子水平進行比較。各組資料具有可比性。

1.2 試劑和儀器 ELISA試劑盒購自美國RB公司。酶標儀購自上海熱電儀器有限公司。高精度加樣器及槍頭購自德國BRAVD公司。恒溫水箱購自北京市醫(yī)療設(shè)備廠。離心機購自安徽中科中佳科學儀器有限公司。

1.3 細胞因子測定 抽取患兒空腹靜脈血2 ml, 3000轉(zhuǎn)離心10 min后分離血清, 按一次用量分裝, 凍存于-20°冰箱備用。檢測之前室溫下溶解標本, 并提前20 min取出試劑盒,平衡至室溫。嚴格按照ELISA試劑盒說明書步驟檢測IL-18、IL-10、IL-12、TNF-α、NF-Kβ及新碟呤水平。

2 結(jié)果

穿孔素陽性組的IL-10、IL-12、TNF-α水平明顯高于穿孔素陰性組, 兩組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.01)。穿孔素陽性組的IL-18水平高于穿孔素陰性組, 兩組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。穿孔素陽性組與穿孔素陰性組相比新碟呤水平無差異, 兩組相比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05), 結(jié)果見表1。5例穿孔素基因陽性的患兒死亡4例, 15例穿孔素基因陰性的患兒死亡3例。穿孔素陽性組5例患兒均出現(xiàn)多臟器功能損傷, 穿孔素陰性組15例患兒5例出現(xiàn)多臟器功能障礙。

表1 穿孔素基因陰性患兒與穿孔素基因陽性患兒IL-18、IL-10、IL-12、NF-Kβ、TNF-α及新碟呤水平比

表1 穿孔素基因陰性患兒與穿孔素基因陽性患兒IL-18、IL-10、IL-12、NF-Kβ、TNF-α及新碟呤水平比

組別nIL-18(pg/ml)IL-10(pg/ml)IL-12(pg/ml)NF-Kβ(pg/ml)TNF-α(pg/ml)新碟呤(nmol/liter)穿孔素陰性組15271.2±86.451.1±60.4108.8±73.49.6±3.75.4±2.819.1±16.4穿孔素陽性組5353.6±111.5213.5±133.5211.8±144.319.5±5.610.2±6.684.9±19.4 t -3.48-7.70-3.33-9.31-4.77-15.07 P＜0.05＜0.01＜0.01＜0.05＜0.01＞0.05

3 討論

HLH分為原發(fā)性或遺傳性HLH和繼發(fā)性HLH兩類, 其中原發(fā)性HLH又分為家族性HLH和免疫缺陷病兩類, 家族性HLH分為FHL1～FHL5五型, 免疫缺陷病分為Chediak-Higashi 綜合征、格利塞里綜合征Ⅱ、X性聯(lián)淋巴增生綜合征1及X性聯(lián)淋巴增生綜合征2四型。原發(fā)性HLH患者多有噬血家族史或被證明有明確的基因突變, 多于1歲之內(nèi)發(fā)病,偶見青少年和成年患者［1］。目前尚不能對所有患兒進行與原發(fā)性HLH有關(guān)的基因的缺陷, 本院對疑似HLH的患兒常規(guī)進行穿孔素基因檢測。目前已知該基因編碼穿孔素蛋白,該蛋白同細胞毒細胞顆粒內(nèi)的顆粒酶B一起從細胞毒T淋巴細胞和NK細胞分泌結(jié)合在效應(yīng)器和靶細胞之間。鈣存在的條件下它能插入靶細胞膜(打孔), 并聚合形成誘導(dǎo)細胞死亡的孔, 孔的形成允許顆粒進入觸發(fā)凋亡而致靶細胞破壞［2］。PRF1基因突變可導(dǎo)致穿孔素表達下調(diào), 穩(wěn)定性下降,從而影響穿孔素傳遞顆粒酶進入靶細胞誘導(dǎo)其凋亡和滲透性溶解, 最終導(dǎo)致FHL2的發(fā)生［1］。本研究中穿孔素陽性組的5例患兒均出現(xiàn)多臟器功能損傷, 4例患兒死亡, 比例遠高于穿孔素陰性組, 提示穿孔素基因陽性的HLH患兒臨床表現(xiàn)較重, 可能預(yù)后較差。

家族性噬血細胞綜合征為常染色體隱性遺傳疾病, 常無家族史, 主要見于嬰幼兒, 發(fā)病率1/50000, 90%發(fā)生在2歲以下, 病死率極高。1999年Stepp等［3］首次證實定位于10q21的穿孔素基因與FHL-2有關(guān), 約20%的HLH患兒存在穿孔素基因突變。但是該病具體發(fā)病機制不明, 多數(shù)人認為該病是由多種致病因素引起的淋巴細胞和組織細胞過度增殖、活化, 產(chǎn)生大量炎癥因子, 從而引起的一種可危及生命的過度炎癥反應(yīng)［4,5］。有人認為隨著化療的進行及臨床癥狀的好轉(zhuǎn), 患兒的細胞因子會逐漸下降至正?；純核健楸苊饣煹牟煌A段細胞因子下降程度不同對本試驗的影響,本研究收集了HLH患兒化療前8周內(nèi)不同階段的血清標本, 檢測IL-18、IL-10、IL-12、NF-Kβ、TNF-α及新碟呤的活性, 以8周內(nèi)不同階段的因子總和為研究對象來探討穿孔素基因?qū)毎蜃拥挠绊憽Ｑ芯堪l(fā)現(xiàn)：穿孔素陽性組的IL-10、IL-12、TNF-α水平明顯高于穿孔素陰性組。穿孔素陽性組的IL-18水平輕度高于穿孔素陰性組, 提示穿孔素基因可能影響IL-10、IL-12、TNF-α及IL-18的表達,穿孔素基因陽性患兒細胞因子水平持續(xù)處于較高水平導(dǎo)致患兒預(yù)后較差。

［1］ Filipovich AH.Hemophagocytic lymphohistiocytosis(HLH) and related disorders.Hematology Am Soc Hematol Educ Program, 2009, 2009(1):127 -131.

［2］ 王學文.噬血細胞性淋巴組織細胞增生癥的診斷和治療策略.東南國防醫(yī)藥, 2009,11(1):40-44.

［3］ Dufourcq-Lagelouse R, Jabado N, Le Deist F,et al.Linkage of familial hemophagocytic lymphohistiocytosis to 10q21-22 and evidence for heterogeneity.The American Journal of Human Genetics, 1999, 64(1): 172-179.

［4］ 陳緯鳳.T細胞亞群及其細胞因子在噬血細胞性淋巴組織細胞增多癥中的作用.國際輸血及血液學雜志,2012,35(1):89-92.

［5］ Ohga S, Kudo K, Ishii E, et al.Hematopoietic stem cell transplantation for familial hemophagocytic lymphohistiocytosis and Epstein-Barr virus-associated hemophagocytic lymphohistiocytosis in Japan.Pediatr Blood Cancer, 2010,54(2):299-305.

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