谷 穎 劉春英 夏 允 夏運梅

遵義醫(yī)學(xué)院1(563003) 大連大學(xué)附屬中山醫(yī)院消化內(nèi)科2

胃食管反流病是指胃內(nèi)容物反流入食管引起不適癥狀和(或)并發(fā)癥的一種疾病，其中內(nèi)鏡下可見食管遠端黏膜破損者稱為糜爛性食管炎(erosive esophagitis, EE)。EE的臨床治療以抑酸藥物為主，亦可采取聯(lián)合用藥，如質(zhì)子泵抑制劑(PPI)聯(lián)合促動力藥，可加用磷酸鋁、蒙脫石等胃腸黏膜保護劑，關(guān)于食管黏膜保護劑及其在EE中應(yīng)用的研究報道甚少。尋求安全、有效的特異性食管黏膜保護劑是臨床實踐中需要解決的問題之一。本研究通過建立小鼠急性EE模型，并分別予食管灌注莪術(shù)油、磷酸鋁、蒙脫石三種黏膜保護劑，比較三者對EE的治療作用。

材料與方法

一、實驗動物和主要試劑

健康雄性昆明小鼠100只，8周齡，體質(zhì)量25～30 g ，購自大連醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心，許可證號SCXK(遼)2008-0002。0.9% NaCl注射液、5%葡萄糖注射液(青島華仁藥業(yè)股份有限公司)，0.35%稀鹽酸(山東臨沂永安試劑化驗室)，磷酸鋁凝膠(韓國保寧制藥株式會社，注冊證號H20130422)，蒙脫石散[博福-益普生(天津)制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H20000690]，莪術(shù)油注射液(蘇州長征-欣凱制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字H20057098)。

二、方法

1. EE模型建立和分組[1-2]：小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)5 d，隨機選取20只作為正常對照組，予食管灌注0.9% NaCl溶液 0.1 mL/10 g，其余80只予食管灌注0.35%稀鹽酸0.1 mL/10 g，均為每3 d一次，共3次。造模結(jié)束后隨機選取正常對照組2只、造模組8只小鼠處死，肉眼觀察食管大體標(biāo)本。 正常對照組食管呈淡紅色，彈性好；造模組食管黏膜充血，可見點狀、條狀充血紅腫，食管胃連接處可見白色糜爛(見圖1)，提示以低濃度稀鹽酸反復(fù)灌注食管黏膜制備急性EE模型獲得成功。

將剩余72只造模組小鼠隨機分為模型組和磷酸鋁組、蒙脫石組、莪術(shù)油組三組治療組，每組18只，于相同條件下飼養(yǎng)。造模成功3 d后，正常對照組和模型組小鼠予食管灌注0.9% NaCl溶液0.1 mL/10 g，三組治療組分別予食管灌注磷酸鋁(磷酸鋁凝膠20 g+0.9% NaCl溶液30 mL) 0.1 mL/10 g、蒙脫石(蒙脫石散3 g+0.9% NaCl溶液50 mL) 0.1 mL/10 g、莪術(shù)油(莪術(shù)油注射液1 mL+5%葡萄糖溶液10 mL)0.1 mL/10 g，均為1次/d，連續(xù)14 d。治療結(jié)束后處死動物，行后續(xù)檢查。

A：正常對照組；B：造模組

2. 食管黏膜大體標(biāo)本觀察和組織病理學(xué)檢查：自咽喉部切取食管，縱行剖開，0.9% NaCl溶液沖洗，肉眼觀察食管黏膜大體表現(xiàn)。食管標(biāo)本4%甲醛溶液固定，石蠟包埋，切片，HE染色，光學(xué)顯微鏡下觀察食管黏膜組織學(xué)表現(xiàn)。大體和組織學(xué)分級參考2003年中華醫(yī)學(xué)會消化內(nèi)鏡學(xué)分會制訂的反流性食管炎診斷及治療指南[3]。大體分級：正常，0級；充血，點狀或條狀糜爛，無融合，Ⅰ級；點狀或條狀糜爛，局限性融合，Ⅱ級；病變廣泛，糜爛融合成片，Ⅲ級。組織學(xué)分級：鱗狀上皮增生，少量炎性細胞浸潤，輕度；黏膜層和黏膜下層炎性細胞浸潤，黏膜下層毛細血管擴張，黏膜輕度糜爛，中度；黏膜層和黏膜下層大量炎性細胞浸潤，黏膜下大片出血，黏膜糜爛明顯，未侵及食管肌層，重度。大體分級0、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級和組織學(xué)分級正常、輕度、中度、重度分別記0、1、2、3分，每組均分為該組大體和組織學(xué)評分。

三、統(tǒng)計學(xué)分析

結(jié) 果

一、一般情況

正常對照組小鼠均存活，小鼠活潑，無厭食現(xiàn)象，排便正常。造模組小鼠造模后出現(xiàn)精神萎靡、動作遲緩、飲食減少、體質(zhì)量下降等表現(xiàn)。模型組4只小鼠死亡，存活率為77.8%；三組治療組死亡動物均有所減少，磷酸鋁組、蒙脫石組各有2只小鼠死亡，存活率為88.9%，莪術(shù)油組1只小鼠死亡，存活率為94.4%，死因分別為嚴(yán)重反流所致的窒息和腸穿孔、出血，其中3只死亡小鼠解剖見腸壁變薄，腸脹氣明顯。

二、食管黏膜大體和組織病理學(xué)表現(xiàn)

肉眼觀察正常對照組食管黏膜光滑，彈性好，大體分級均為0級。模型組食管黏膜均可見充血、紅腫以及點狀或條狀糜爛，3只小鼠病變廣泛，融合成片；磷酸鋁組4只小鼠食管黏膜光滑，12只可見黏膜紅腫、點狀充血，其中5只病變局限性融合；蒙脫石組5只小鼠食管黏膜基本愈合，11只可見點狀或條狀充血、糜爛，其中6只病變有融合；莪術(shù)油組10只小鼠食管黏膜光滑，彈性好，7只可見點狀充血、紅腫，其中僅1只病變有融合。

光學(xué)顯微鏡下，正常對照組食管黏膜表面為非角化的復(fù)層鱗狀上皮(見圖2A)；模型組食管黏膜復(fù)層鱗狀上皮增生明顯，細胞核變圓、變大，黏膜糜爛，黏膜和黏膜下充血，大片出血，大量炎性細胞浸潤，未侵及食管肌層(見圖2B)；磷酸鋁組、蒙脫石組食管黏膜復(fù)層鱗狀上皮增生，固有層向上皮層延伸，黏膜下毛細血管擴張充血，有炎性細胞浸潤(見圖2C、2D)；莪術(shù)油組食管黏膜鱗狀上皮局限性輕度增生(見圖2E)，黏膜下有少量炎性細胞，偶有毛細血管擴張充血(見圖2F)。

表1 各組食管黏膜大體、組織學(xué)分級和評分比較

A：正常對照組；B：模型組；C：磷酸鋁組；D：蒙脫石組；E、F：莪術(shù)油組

5組間食管黏膜大體和組織學(xué)評分總體差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。進一步作兩兩比較，模型組與正常對照組間、磷酸鋁組、蒙脫石組與正常對照組、模型組間、莪術(shù)油組與模型組、磷酸鋁組、蒙脫石組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，莪術(shù)油組與正常對照組間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)(見表1)。

討 論

莪術(shù)油是從姜科植物蓬莪術(shù)、廣西莪術(shù)、溫郁金干燥根莖中提取的揮發(fā)油，具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗腫瘤等多種生物學(xué)效應(yīng)[4]。目前莪術(shù)油在臨床上廣泛應(yīng)用于宮頸糜爛的治療，其機制與莪術(shù)油抗感染、去腐生肌、促進損傷黏膜修復(fù)再生的作用有關(guān)，可使柱狀上皮脫落，鱗狀上皮再生、覆蓋病變區(qū)上皮缺損處，加速糜爛面愈合[5]。莪術(shù)油既然可用于促進宮頸鱗狀上皮再生、修復(fù)黏膜糜爛，推測對于同為鱗狀上皮的食管黏膜，莪術(shù)油亦可能發(fā)揮保護作用。為此， 本

研究以低濃度稀鹽酸反復(fù)灌注食管黏膜制備小鼠急性EE模型，觀察并比較了莪術(shù)油與兩種常用胃腸黏膜保護劑磷酸鋁、蒙脫石對食管黏膜的保護作用。

研究結(jié)果顯示，正常對照組小鼠食管黏膜大體和組織病理學(xué)表現(xiàn)均無異常，大體和組織學(xué)評分為0分；模型組小鼠食管黏膜損傷嚴(yán)重，大體和組織學(xué)評分達(2.21±0.43)分；而三組治療組小鼠的食管黏膜損傷均較模型組顯著減輕，部分小鼠黏膜基本愈合，以莪術(shù)油組愈合率最高，大體和組織學(xué)評分顯著低于模型組、磷酸鋁組和蒙脫石組，與正常對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義。上述結(jié)果表明莪術(shù)油用于治療急性EE效果良好，優(yōu)于磷酸鋁和蒙脫石。

綜上所述，本研究結(jié)果顯示莪術(shù)油對小鼠急性EE模型有明顯治療作用，效果優(yōu)于常用黏膜保護劑磷酸鋁和蒙脫石，在動物實驗水平證實莪術(shù)油是一種有效的食管黏膜保護劑，為臨床研發(fā)特異性食管黏膜保護劑提供了實驗依據(jù)。

1 劉春麗，賴克方，陳如沖，等. 鹽酸灌注豚鼠食管反流性疾病模型的建立[J]. 中國病理生理雜志, 2006, 22 (3): 620-621,624.

2 張瑞麗，單保恩，田子強，等. 食管灌注Lugol’s碘溶液對小鼠食管和胃黏膜的損傷作用[J]. 癌變·畸變·突變, 2006, 19 (2): 129-132.

3 中華醫(yī)學(xué)會消化內(nèi)鏡學(xué)分會. 反流性食管炎診斷及治療指南(2003年)[J]. 中華消化內(nèi)鏡雜志, 2004, 21 (4): 221-222.

4 吳海霞，孫志明，王勤. 莪術(shù)油的藥理學(xué)研究及臨床應(yīng)用研究進展概況[J]. 中國醫(yī)藥導(dǎo)刊, 2011, 13 (1): 79-83.

5 劉巖，李玲玲，孫虹，等. 三種婦科栓劑對大鼠宮頸糜爛模型的治療作用及抗菌活性的比較[J]. 中國比較醫(yī)學(xué)雜志, 2008, 18 (8): 18-20.