田嘉銘 袁 博 朱登祥 王書(shū)華 安 芳

(河北北方學(xué)院藥學(xué)系，河北 張家口 075000)

金蓮花是毛茛科植物金蓮花屬金蓮花的干燥花及花蕾，有清熱解毒，消腫明目功效，臨床上主要用于上呼吸道感染、扁桃體炎等。前期研究表明，金蓮花中葒草苷和牡荊苷具有對(duì)D半乳糖(D-gal)致衰老小鼠體內(nèi)及體外抗氧化作用，其抗氧化作用與維生素E作用相當(dāng)〔1～5〕。有關(guān)金蓮花中葒草苷和牡荊苷體內(nèi)動(dòng)態(tài)抗氧化作用尚未見(jiàn)報(bào)道，本研究擬通過(guò)比較葒草苷和牡荊苷對(duì)D-gal致衰老小鼠血清抗氧化酶活性動(dòng)態(tài)影響，尋找葒草苷和牡荊苷抗氧化作用的時(shí)效關(guān)系，為抗衰老藥物的研究提供新的動(dòng)力。

1 材料與方法

1.1藥品和試劑 野生金蓮花采自河北省張家口沽源，經(jīng)我院藥物研究所鑒定為短瓣金蓮花。葒草苷和牡荊苷(自制，經(jīng)1H- NMR和HPLC鑒定純度為98.9%)；D-gal，分析純，上海試一化學(xué)試劑有限公司；還原性谷胱甘肽，純度≥99%，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；生理鹽水，石家莊第四制藥廠；總抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱苷肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)測(cè)定試劑盒，均購(gòu)買(mǎi)自南京建成生物工程研究所，(批號(hào)分別為：20100610、20091210、20090915、20100823、20100920)。

1.2動(dòng)物 健康的昆明種小鼠390只(雌雄各半)，體重(20±2)g，河北北方學(xué)院動(dòng)物中心提供(許可證號(hào)：SCXK京2004-0001)，分籠飼養(yǎng)，室溫18℃～25℃。

1.3儀器 U-3900紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本)；ME235S十萬(wàn)分之一電子天平(日本)；DK-8型電熱恒溫水槽(上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司)；低溫高速離心機(jī)(賽多利斯公司)；HQ-60型旋渦混合器 (北方同正生物技術(shù)發(fā)展公司)。

1.4實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1造模方法 采用D-gal致亞急性衰老法〔6〕，將D-gal 10 000 mg溶于500 ml生理鹽水中，按劑量200 mg·kg-1·d-1(0.01 ml/g)給小鼠腹腔注射，正常組注射等體積生理鹽水，造模時(shí)間為8 w，每天稱(chēng)重1次，依據(jù)末次稱(chēng)重調(diào)整給藥劑量。

1.4.2模型驗(yàn)證 造模第6周和第8周分別選取正常組和模型組小鼠(備用) 10只，摘眼球取血，分離血清，檢測(cè)T-AOC、SOD和MDA，以驗(yàn)證小鼠衰老情況。第8周末，模型組小鼠指標(biāo)與正常組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，顯示模型復(fù)制成功。

1.4.3給藥與分組 葒草苷和牡荊苷溶液的配制：N，N-二甲基甲酰胺∶吐溫-80∶生理鹽水=1∶1∶20。造模成功后，實(shí)驗(yàn)分為正常組、模型組、葒草苷和牡荊苷高、中、低各3個(gè)劑量組(40、20、10 mg/kg)，各治療組從第9周開(kāi)始每日上午分別口服灌胃給藥，正常組和模型組給等體積的生理鹽水，1次/d。葒草苷和牡荊苷組給藥時(shí)間設(shè)定為2、4、6、8 w，正常組、模型組和維生素E組時(shí)間設(shè)定為8 w。

1.4.4小鼠血清中SOD、CAT、GSH-PX和T-AOC的測(cè)定 給藥2、4、6、8 w后，小鼠斷頭取血(每個(gè)時(shí)間點(diǎn)處死相應(yīng)組)，以4 000 r/min離心10 min，取血清，按試劑盒說(shuō)明操作，測(cè)定SOD、CAT、GSH-PX以及T-AOC的活性。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

葒草苷和牡荊苷對(duì)D-gal致衰老小鼠血清SOD、CAT、GSH-PX以及T-AOC抗氧化活性動(dòng)態(tài)影響，結(jié)果見(jiàn)表1。與正常組相比，模型組中小鼠血清SOD、CAT、GSH-PX和T-AOC活性明顯降低，具有顯著性差異(P<0.01)。與模型組相比，第2、4周，葒草苷和牡荊苷治療組能夠提高小鼠血清SOD、CAT、GSH-PX以及T-AOC的活性，但無(wú)顯著性差異。第6、8周，葒草苷和牡荊苷治療組使小鼠血清T-AOC、SOD、CAT、GSH-PX的活性上升明顯，且有顯著性差異(P<0.05，P<0.01)。與維生素E(VE)組相比，給藥8 w后，葒草苷和牡荊苷中、低劑量組提高小鼠血清T-AOC、SOD、CAT、GSH-PX的作用較弱，具有顯著性差異(P<0.05)，高劑量組與VE組相比無(wú)顯著性差異。葒草苷和牡荊苷相比，給藥2、4 w后，各劑量組在提高小鼠血清T-AOC、SOD、CAT、GSH-PX活性上無(wú)顯著性差異，給藥6 w后，葒草苷高、中、低劑量組在提高血清抗氧化酶活性上高于同等劑量的牡荊苷(P<0.05)。給藥8 w后，葒草苷中、低劑量組在提高血清抗氧化酶系活性上高于同等劑量牡荊苷(P<0.05)，高劑量組之間無(wú)顯著性差異(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表1 各組小鼠血清T-AOC、SOD、CAT、GSH-PX水平±s，n=10，U/ml)

表2 不同時(shí)點(diǎn)不同葒草苷、牡荊苷劑量組小鼠血清 T-AOC、SOD、CAT、GSH-PX水平±s，n=10，U/ml)

3 討 論

4 參考文獻(xiàn)

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10鄧 洋，許秀舉，于海平. 啤酒對(duì)大鼠血清的LDH和T-AOC的影響〔J〕. 食品科技，2009；34(5)：120-31.