樸 瑛，柳云恩，謝曉冬＊

（1.沈陽軍區(qū)總醫(yī)院全軍腫瘤診治中心 腫瘤科，遼寧 沈陽110840；2.沈陽軍區(qū)總醫(yī)院 病理科，遼寧 沈陽110840）

據(jù)報道肥大細(xì)胞瘤可在人類和動物，諸如貓、馬、牛、豬、雪貂身上自然發(fā)生［1－3］。研究發(fā)現(xiàn)某些化學(xué)物或放射輻射可導(dǎo)致小鼠發(fā)生肥大細(xì)胞瘤［4，5］。研究發(fā)現(xiàn)，肥大細(xì)胞瘤與遺傳及環(huán)境因素密切相關(guān)。幽門螺桿菌是一種高致病能力的菌株，它在炎癥啟動及調(diào)節(jié)中發(fā)揮舉足輕重的作用［6］。肥大細(xì)胞是一種可以清除細(xì)菌炎癥細(xì)胞之一。研究發(fā)現(xiàn)幽門螺桿菌感染患者的粘膜肥大細(xì)胞數(shù)量明顯增加，該菌被根除后，肥大細(xì)胞密度明顯降低［7］。目前，關(guān)于蒙古沙土鼠幽門螺桿菌相關(guān)性肥大細(xì)胞瘤病例，尚未見報道。

1 材料與方法

40只，SPF級雄性蒙古沙土鼠購自杭州實驗動物中心。引入時5wk，觀察及適應(yīng)7d后用于試驗。20只動物經(jīng)灌胃針接種幽門螺桿菌（胃癌分離株）（1×108CFU/ml）1ml，20只僅給予同體積的生理鹽水作為平行對照，每天一次，連續(xù)3天。在GLP試驗體系下，動物飼養(yǎng)于懸吊式不銹鋼飼養(yǎng)籠內(nèi)，溫度20℃－25℃，濕度50%±20%，照明為12h明暗交替，噪音60dB以下。動物飼料為全營養(yǎng)飼料，經(jīng)60℃滅菌，由沈陽市于洪區(qū)前民動物飼養(yǎng)場提供。飲水經(jīng)HT－R0500型凈水系統(tǒng)制備，動物可自由攝食飲水。動物使用及試驗過程接受本中心動物管理委員會（IACUC）的監(jiān)督。

第73周，實驗組8只及對照組7只動物，經(jīng)乙醚麻醉后，進行腹主動脈采血，實驗組動物體重明顯降低，臨床觀察所有動物未見明顯異常。對動物進行詳細(xì)的解剖及觀察，實驗組2只動物脾臟和肝臟明顯增大，臟器表面布滿暗紅色斑點，肺臟表面可見散在的多個小的灰白色結(jié)節(jié)。前胃至十二指腸明顯擴張，幽門部粘膜明顯增厚。對照組所有動物未見明顯病變。

所有動物肝、脾臟、肺臟、心臟、腦、腎臟、小腸、胃、胰腺、腎上腺、胸腺、甲狀腺、淋巴結(jié)、骨髓、甲狀旁腺、唾液腺、睪丸、附睪、眼球經(jīng)福爾馬林固定，石蠟包埋，切成3－5μm薄片，分別行H＆E、AB/PAS、Giemsa和免疫組化染色。所需抗體有H.pylori－IgG（1∶100dilution；DAKO），keratin（1∶100dilution；Gene company），PCNA （1∶100dilution；Gene company）和syn（1∶100dilution；cell signal）。

2 結(jié)果

鏡下可見腫瘤細(xì)胞核圓形，胞質(zhì)界限不清，彌漫性分布在前胃至幽門部。這些細(xì)胞在粘膜下層和肌層呈片狀排列（圖1A），而在粘膜層則呈索狀。幾乎所有的腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)均含有豐富的嗜堿性顆粒。核內(nèi)染色質(zhì)呈團塊狀，核仁不明顯，核分裂象罕見。腫瘤細(xì)胞分散在上皮層，固有層，粘膜下層和肌層。這些腫瘤細(xì)胞與粘膜下層及肌層內(nèi)血管關(guān)系密切，形成類似“血管套”現(xiàn)象。血管中膜在腫瘤細(xì)胞影響下明顯增厚 （圖1B），腫瘤細(xì)胞間夾雜大量的淋巴細(xì)胞。

肝臟實質(zhì)內(nèi)或匯管區(qū)內(nèi)可見多個瘤結(jié)節(jié)，它們經(jīng)常包繞在血管和膽管周圍 （圖1C）。肺臟胸膜下或支氣管周圍常聚集多個瘤結(jié)節(jié)，這些瘤結(jié)節(jié)明顯壓迫肺泡腔（圖1D）。腎門周圍可見血管旁腫瘤細(xì)胞，腎臟皮質(zhì)，髓質(zhì)及腎盂可見大量的腫瘤細(xì)胞存在（圖1E）。腫瘤細(xì)胞夾雜淋巴細(xì)胞穿過血腦屏障，進入腦室，圍繞在脈絡(luò)叢血管周圍，形成奇特的景觀（圖1F）。此外，這些腫瘤細(xì)胞還累及脾臟、骨髓、十二指腸、空腸、胰腺、舌下腺、頜下腺、膽囊、腎上腺、甲狀腺、甲狀旁腺、腸系膜淋巴結(jié)、皮下組織及眼結(jié)膜等部位。

Giemsa結(jié)果顯示胞質(zhì)中嗜堿性顆粒呈現(xiàn)兩種不同的形態(tài)特征，致密型和松散型 （圖2A）。這些顆粒阿辛蘭染色呈陽性，PAS染色則陰性。免疫組化結(jié)果表明僅少數(shù)細(xì)胞PCNA陽性，keratin和syn為陰性。此外，免疫組化及Giemsa染色均證實沙鼠胃粘液層內(nèi)存在大量的幽門螺桿菌，而少量細(xì)菌緊密粘附在胃粘膜表面上皮，提示幽門螺桿菌成功接種到蒙古沙土鼠胃內(nèi)。

根據(jù)以上結(jié)果，本病例診斷為肥大細(xì)胞瘤，該腫瘤的原發(fā)部位尚不清楚。

3 討論

有報道蒙古沙土鼠自發(fā)性肥大細(xì)胞瘤，發(fā)生率僅為0.26%（1/387）［8］。本研究發(fā)現(xiàn)蒙古沙土鼠接種幽門螺桿菌73周后，發(fā)生率為25%（2/8）。對照組未發(fā)現(xiàn)肥大細(xì)胞瘤的發(fā)生。研究發(fā)現(xiàn)幽門螺桿菌感染組肥大細(xì)胞密度明顯高于對照組，僅有20%蒙古沙土鼠肥大細(xì)胞中存在顆粒［9，10］。本研究中發(fā)現(xiàn)幾乎所有的肥大細(xì)胞都包含嗜堿性顆粒，這些顆粒存在兩種不同的形態(tài)特征，致密型和松散型。依據(jù)顆粒含量及生物學(xué)功能，人類和小鼠肥大細(xì)胞被劃分為許多亞型［11］。據(jù)報道蒙古沙土鼠肥大細(xì)胞亦存在不同的亞型，空腸肥大細(xì)胞糜蛋白酶及胰蛋白酶陽性，而在舌及皮膚兩者呈陰性表達［12］。研究發(fā)現(xiàn)幽門螺桿菌感染組糜蛋白酶陽性肥大細(xì)胞數(shù)量明顯高于正常胃粘膜［13］。因此，我們推測肥大細(xì)胞胞質(zhì)中不同形態(tài)特征的顆粒可能代表了不同的細(xì)胞亞型，需要下一步免疫組化證實。

圖1 A）腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)包含大量的嗜堿性顆粒，在幽門肌層呈片狀排列.B）腫瘤細(xì)胞分布在上皮層，固有層及粘膜下層，與血管關(guān)系密切.C）肝臟實質(zhì)及匯管區(qū)內(nèi)見大量瘤結(jié)節(jié)，腫瘤細(xì)胞位于血管及膽管周圍.D）腫瘤細(xì)胞分布在肺臟胸膜下或支氣管周圍.E）灶狀分布的腫瘤細(xì)胞分散在腎臟皮質(zhì)血管周圍.F）腦室內(nèi)充滿了腫瘤細(xì)胞，這些細(xì)胞間夾雜大量的淋巴細(xì)胞.（HE染色，400×）.

圖2 A）腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)的嗜堿性顆粒呈現(xiàn)兩種不同的形態(tài)特征，致密型和松散型.B）胃粘液內(nèi)存在大量的游離幽門螺桿菌，少量的細(xì)菌緊密粘附在胃粘膜表面.（Giemsa染色400×）.

肥大細(xì)胞分泌何種活性物質(zhì)與其所受的刺激信號有關(guān)，研究發(fā)現(xiàn)受幽門螺桿菌源性產(chǎn)物刺激后肥大細(xì)胞脫顆粒［14，15］。當(dāng)肥大細(xì)胞被幽門螺桿菌激活后釋放肝素、組胺、白三烯等物質(zhì)，這些物質(zhì)有的直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，刺激其增殖或遷徙［16］，這可能是本研究中肥大細(xì)胞圍繞的血管明顯增厚的原因。此外，肥大細(xì)胞釋放的化學(xué)趨化因子能吸引大量的淋巴細(xì)胞，導(dǎo)致肥大細(xì)胞間常夾雜大量的淋巴細(xì)胞。

據(jù)報道肥大細(xì)胞有伸展和移動的能力，能夠穿透基底膜進入上皮層［17］。因此，絕大多數(shù)的肥大細(xì)胞瘤是系統(tǒng)性的，它常侵襲肝臟、脾臟和肺臟等臟器，很難準(zhǔn)確找到其原發(fā)部位［18］。肥大細(xì)胞瘤的生物學(xué)行為取決于細(xì)胞形態(tài)和PCNA的表達水平。梭形和不典型的肥大細(xì)胞與臨床惡性結(jié)局密切相關(guān)［19］。本研究中肥大細(xì)胞相對均一，免疫組化證實未發(fā)現(xiàn)PCNA表達的陽性細(xì)胞，結(jié)果提示該腫瘤為良性肥大細(xì)胞瘤。

眾所周知，肥大細(xì)胞瘤發(fā)生與遺傳及環(huán)境因素密切相關(guān)，其中環(huán)境因素中病毒感染是其確定的致病因素之一。此外，某些化學(xué)品或放射照射可能也會導(dǎo)致肥大細(xì)胞瘤的發(fā)生。

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