黃曉芹 卿大雙 彭易蘭

成都中醫(yī)藥大學民族醫(yī)藥學院，四川 成都 611137

巴桑母酥油丸為藏醫(yī)傳統(tǒng)滋補方，由清熱的三果 (余甘子、訶子、毛訶子)藥酥和治療寒癥的五根 (天冬、黃精、西藏棱子芹、喜馬拉雅紫茉莉、蒺藜)藥酥合成[1]。因藥味較多，有效劑量大、油脂重，口味特殊，服用不便，如能精簡組方，將有助于其推廣運用。故對其服用后藥物吸收情況進行了初步探討，為進一步研究其組方中可能的主要成分提供基礎。

1 實驗材料

1.1 藥品和試劑 巴桑母酥油丸為青海帝瑪爾藏藥藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，批準文號:國藥準字 Z63020163，批號20120211。乙腈、甲醇、甲酸等均為色譜純。

1.2 實驗動物 8～10周齡雄性昆明種小鼠20只，體質(zhì)量22～28g，購于成都達碩實驗動物有限公司。

1.3 儀器設備 高效液相色譜儀 (安捷倫1200)，色譜柱(Kromasil Etemity-5 C18);離心機 (TDZ5-WS多管架自動平衡離心機);注射器;電子天平;小鼠灌胃針頭;移液管;燒杯;試管;抽濾瓶;量筒;0.45μm微孔濾膜。

2 實驗方法

2.1 色譜條件 色譜柱:十八烷基硅烷鍵合硅膠填充柱;流動相:乙腈 (A)-0.25%甲酸 (B)梯度洗脫 (0～20min，3% →12%A;20～40min，12% →16%A;40～60min，16%→22%A);流速:0.8ml/min;柱溫30℃;檢測波長297nm。

將乙腈 (流動相:A)和0.25%甲酸水 (流動相:B)分別經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾3次，將過濾好的流動相分別超聲30min。

2.2 巴桑母酥油丸溶液制備 石油醚脫脂后制成甲醇溶液:巴桑母酥油丸置于索式提取器中，石油醚回流提取除去脂溶性成分，藥渣揮發(fā)干燥。取1g藥渣用10ml甲醇超聲提取20min×2次，過濾，合并濾液，用甲醇將濾液定容到10ml，過0.45μm微孔濾膜，冷藏備用。

2.3 巴桑母酥油丸含藥血清制備 小鼠禁食一晚(自由飲水)后隨機分為空白血清提供組和含藥血清提供組，其中含藥血清提供組給予1.5g/kg巴桑母酥油丸灌胃，于灌胃30、60、120min后乙醚麻醉小鼠，去眼球取全血后處死小鼠。將采集的全血靜置30min后，在3000r/min條件下離心10min得到血清。取血清1ml加入4ml的甲醇，渦旋5min，再3000r/min條件下離心30min×2次。取上清液過0.45μm微孔濾膜。冷凍保存?zhèn)溆?。空白血清提供組小鼠除不給予灌胃外，血清分離保存同含藥血清組。

2.4 HPLC圖譜測定 分別取2.2，2.3中所得的巴桑母酥油丸甲醇溶液和含藥血清、空白血清20μl上樣，記錄分析巴桑母酥油丸甲醇溶液和含藥血清、空白血清含藥血清圖譜。

3 結(jié)果和討論

灌胃巴桑母酥油丸后不同時間分離的含藥血清HPLC圖譜與空白血清和巴桑母酥油丸體外HPLC圖譜的比較結(jié)果見圖1-3。

從圖中可以看出，灌胃后各個時間點，含藥血清的可見峰均顯著少于巴桑母酥油丸在體外的可見峰，但均顯著多于空白血清的可見峰，提示我們在實驗條件下，灌胃后巴桑母酥油丸中能被吸收的成分是有限的，灌胃后隨著時間的延長，含藥血清的可見峰逐漸增多，其吸收入血的成分在逐漸增加。在灌胃后60、120min含藥血清的指紋圖譜峰數(shù)和峰值沒有非常顯著的差異，提示灌胃后60～120min間，藥物的吸收較為平穩(wěn)。值得注意的是，灌胃后60min和120min的含藥血清，在進樣后30min時，均出現(xiàn)了一個較為明顯的空白血清和巴桑母酥油丸體外指紋圖譜中所沒有的峰，提示可能有新的成分在血清中出現(xiàn)。其來源是巴桑母酥油丸在體內(nèi)的代謝產(chǎn)物或是藥物作用下機體產(chǎn)生的新的成分，有待進一步研究。

[1]毛繼祖，卡洛，毛韶玲.藍琉璃 [M].上海:上海科學技術出版社，2012.