摘 ? 要：將新鮮的薄荷葉用蒸餾水洗凈晾干、無菌搗碎、過濾等獲得薄荷葉提取液。配置不同濃度的提取液進行抑菌試驗，用貼片法測量抑菌圈的直徑，比較不同濃度的薄荷葉提取液對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和巨大芽孢桿菌的抑菌作用。試驗表明，不同濃度的薄荷葉提取液所產(chǎn)生的抑菌圈大小不同，薄荷葉提取液對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和巨大芽孢桿菌均有一定的抑制作用，在濃度為80%時的抑菌作用最強，濃度大于80% 和低于80% 抑菌作用都有所降低。

關鍵詞：薄荷葉提取液;抑制作用;大腸桿菌;枯草芽孢桿菌;巨大芽孢桿菌

中圖分類號：S567.23+5 文獻標識碼：A ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文章編號：1006-060X（2014）02-0023-02

Inhibition Effects of the Extracts from Peppermint Leaf on Three Kinds of Bacteria

ZHAI Xing-li

（College of Life Science， Shangqiu Normal University， Shangqiu 476000， PRC）

Abstract： The fresh peppermint leaves were washed with distilled water， and were dried， sterilely mashed， and filtered to obtain the exacts of peppermint leaf. Then the diameter of inhibition zone was measured with coating method in order to compare the inhibition effects of different concentrations of peppermint leaf extracts on bacteriostasis on Escherichia col， Bacillus subtilis and Bacillus megaterium. The results showed that the different concentrations of the peppermint extracts produced different sizes of inhibition zone， and the extracts of peppermint leaf had inhibition effect on Escherichia coli， Bacillus subtilis and Bacillus megaterium; the inhibition effect reached the maximum when concentration of peppermint extracts was 80%， and the inhibition effect was weakened when concentration of peppermint extracts was either higher than 80% or lower than 80%.

Key words： peppermint extract; inhibition effect; Escherichia coli; Bacillus subtilis; Bacillus megaterium

薄荷為唇形科植物薄荷（Methan haplocalyx .Briq.）的地上部分[1]。全株具有濃烈的清涼香味，是一種適應性強、分布廣泛的具有特殊芳香氣味的植物資源。薄荷為多年生直立草本，對環(huán)境的適應性很強，廣泛分布于北半球的溫帶地區(qū)，在我國廣泛分布于長江以北各省。野生與栽培薄荷可作藥用，且以栽培為主，目前栽培品種已超過500個，以江蘇產(chǎn)者質量最優(yōu)。我國栽培的薄荷品種多屬東亞及熱帶亞洲的薄荷種[2-3]。新鮮的薄荷葉提取液化學成分復雜，主要含有揮發(fā)油、非揮發(fā)性物質、氨基酸、黃酮類、有機酸等物質。其中，薄荷油是薄荷化學組分中研究較深入的一類成分，有良好的抗菌作用。薄荷作為中藥其味辛，性涼，歸肺、肝經(jīng)，具有寧心安神，利水清熱，利咽，疏肝行氣之功效，可用于風熱感冒，風溫初起，頭痛，心悸失眠，目赤腫痛，喉痹，目瘡，風疹，麻疹，胸肋脹悶[1]。除了入藥，民間常用薄荷制作美味佳肴，不但可作涼拌菜，而且可以調(diào)味、配酒、沖茶等。用薄荷做菜生吃或熟食，能祛邪氣、除勞氣、解勞乏，使人口氣清香[4]。近年來，薄荷已成為家喻戶曉的綠色食品和營養(yǎng)保健品。在工業(yè)方面，薄荷還可用作食品添加劑、煙草矯味劑和日化加香殺菌劑。隨著世界經(jīng)濟的發(fā)展，人們對薄荷的需求量日益劇增，薄荷產(chǎn)業(yè)有著很大的發(fā)展空間。試驗比較不同濃度的薄荷葉提取液對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和巨大芽孢桿菌的抑菌作用，旨在為薄荷資源的開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試材料和菌株 薄荷采于商丘市古宋鄉(xiāng)宋菜園村，為栽培品種;大腸桿菌（Escherichia coli）由商丘師范學院微生物實驗室提供;巨大芽孢桿菌（B. megaterium）由商丘師范學院微生物實驗室提供;枯草芽孢桿菌（B. subtilis）商丘師范學院微生物實驗室提供。

1.1.2 試驗試劑和器材 牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂、蒸餾水、生理鹽水（0.9%）;高壓蒸汽滅菌鍋、烘箱、超凈工作臺、MP200A型電子天平、打孔器（0.6 mm）、恒溫培養(yǎng)箱、移液槍、接種環(huán)、尺子、鑷子、研缽、涂布棒、濾紙、玻璃燒杯（500 mL）、試管、培養(yǎng)皿、三角瓶。

1.2 試驗方法

1.2.1 培養(yǎng)基的配制 配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基[5]：牛肉膏3 g/L，蛋白胨10 g/L，氯化鈉5 g/L，瓊脂粉16 g/L，加蒸餾水至1 000 mL，調(diào)pH 值為7.2，121 ℃滅菌30 min。

1.2.2 菌種的活化 從保存管中用接種環(huán)挑取大腸桿菌、巨大芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌3種菌種接種于已滅好菌的斜面培養(yǎng)基中，置恒溫培養(yǎng)箱中37 ℃培養(yǎng)72 h，活化備用[6]。

1.2.3 薄荷葉提取液的制備 將新鮮薄荷去莖，用無菌水洗凈薄荷葉，晾干，稱取250 g晾干的薄荷葉在研缽中充分研磨。用4層紗布過濾，得到150 mL薄荷葉提取液放入4℃冰箱保鮮備用。

1.2.4 配制不同濃度的薄荷葉提取液 用無菌生理鹽水將已配好薄荷葉提取液分別稀釋至濃度為100%、80%、60%、40%、20% 的系列薄荷葉提取液各15 mL，用于抑菌圈的測定。

1.2.5 菌懸液的配制 在無菌操作下，取已滅菌的EP管用移液槍加入1.5 mL無菌生理鹽水，用接種環(huán)將已活化好的菌種從試管斜面上刮取少量的菌體置于其中，振蕩混勻，使菌體散布均勻[7]，制成菌懸液備用。

1.2.6 薄荷葉提取液的抑菌試驗 在無菌室按照無菌操作，用已滅好菌的鑷子將直徑為6 mm的無菌濾紙片置于濃度分別為100%、80%、60%、40%、20% 的系列薄荷葉提取液和無菌水中浸泡一段時間，使提取液在濾紙上分布均勻。取制好的培養(yǎng)基平板，用移液槍從已制備好的菌懸液中吸取100 ?L，用涂布棒在固體培養(yǎng)基上涂布均勻，待室溫干燥后[8]，用無菌鑷子將浸過的不同濃度的薄荷葉提取液的濾紙片輕輕貼在平板表面，避免劃破平板表面影響實驗結果。每皿均勻放置4片，用無菌水浸過的濾紙片作為空白對照。然后將平板倒置于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h觀察測定抑菌圈直徑的大小，重復3次。

1.2.7 抑菌圈直徑大小的測定 用直尺測定每皿抑菌圈直徑的大小。根據(jù)抑菌圈直徑大小的不同，可分析不同濃度薄荷葉提取液的抑菌效果的差異。

2 結果與分析

由表可知，不同濃度的薄荷葉提取液對大腸桿菌、巨大芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌都有一定的抑制作用。從整體上來看，空白對照組沒有抑菌圈，大腸桿菌的抑菌圈較大，枯草芽孢桿菌次之，巨大芽孢桿菌的最小，說明薄荷汁對大腸桿菌的抑制作用最為明顯，枯草芽孢桿菌次之，巨大芽孢桿菌的最小。當薄荷葉提取液濃度的不同時，抑菌圈大小有所不同，說明對大腸桿菌、巨大芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌的抑制作用有所差異。總體上，在薄荷葉提取液濃度為80%時的抑菌作用最強，濃度大于80% 或低于80% 時抑菌作用都有所降低;這說明，薄荷葉提取液的抑菌作用與其濃度有關，只有在一定濃度下才能達到最好的抑菌效果。

3 討 ?論

試驗表明：薄荷葉汁對3種桿菌都有抑制作用，且抑菌效果與薄荷葉汁的濃度明顯相關，濃度過高或者過低都達不到最強的抑菌效果。這為薄荷資源的開發(fā)利用提供了依據(jù)，有助于薄荷在生物藥物、食品保鮮等方面的推廣應用。新鮮的薄荷葉提取液化學成分復雜，主要有揮發(fā)油、非揮發(fā)性物質、氨基酸、黃酮類、有機酸和其他物質。其中的薄荷油具有祛痰、利膽、解痙、抗炎鎮(zhèn)痛、抗菌、抗病毒[11]、促滲透和抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)等多方面的藥理作用，但是大劑量應用亦會導致肝損傷等毒理作用[11]。對于薄荷葉提取液抑制細菌的機理國內(nèi)外相關研究較少，有待于進一步的研究，認為可能是幾種有效成分的協(xié)同作用的結果[12]。由于薄荷分布廣泛，生長的氣候環(huán)境條件差異較大，自然雜交現(xiàn)象普遍、繁殖方式不同，導致有些成分的種類和含量隨薄荷的品種、產(chǎn)地以及采集時間的不同而變化[12]，這都會影響薄荷葉提取液對細菌的抑制作用。試驗結果表明，薄荷葉提取液對3種桿菌有一定的抑菌作用，如果人們長期食用薄荷葉，可能會對人體腸道菌群造成一定的影響，因此應適量食用。

參考文獻：

[1] 國家藥典委員會. 中國藥典[S]. 北京：化學工業(yè)出版社，2010.

[2] 姜殿勤，姜 斌，張儉衛(wèi). 薄荷實用價值及人工栽培[J]. 特種經(jīng)濟動植物，2008，11（1）： 36- 37.

[3] 李錫文. 我國一些唇形科植物學名的更動[J]. 植物分類學報，1974，12（2）：214- 234.

[4] 陰 健. 中藥現(xiàn)代研究與臨床應用[M]. 北京：學苑出版社，1994. 681.

[5] 黃秀梨，夏立秋，辛明秀，等. 微生物實驗指導[M]. 北京：高等教育出版社，1996. 1- 2.

[6] 沈 萍，范秀容，李廣武. 微生物學實驗指導（第三版）[M]. 北京：高等教育出版社， 1999. 50-74.

[7] 翟興禮，王啟明，王立娟. 苦楝果實提取物對幾種芽孢桿菌的抑菌活性[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學，2006，34（9）：1908- 1909.

[8] 翟興禮. 大蒜水提物對蘇云金芽孢桿菌的抑制作用[J]. 長江蔬菜，2009，（6）：70-72.

[9] Schuhmacher A，Reichling J，Schnitzler P. Virucidal effect of peppermint oil on the enveloped viruses herpes simplex virus type 1 and 2 in vitro[J]. Phytomedicine，2003，10（6）： 504- 510.

[10] 梁呈元，李維林，張涵慶，等. 薄荷化學成分及其藥理作用研究進展[J]. 中國野生植物資源，2003，21（2）：59- 62.

[11] 房海靈，李維林，任如冰，等. 薄荷屬植物的化學成分及其藥理學研究進展[J]. 中國藥業(yè)，2010，19（10）：13- 16.

[12] 萬里江，范正達，唐風雷. 芳香類中藥揮發(fā)油抗菌作用研究進展[J]. 中華實用醫(yī)藥雜志， 2008，8（9）：795-798.

（責任編輯：高國賦）