王大瑋+汪元超+李根前+李周岐

摘要：從杜仲常規(guī)育種、生物技術(shù)育種方面對(duì)杜仲遺傳育種研究現(xiàn)狀進(jìn)行總結(jié)，提出了今后杜仲育種的研究方向和發(fā)展趨勢，為我國杜仲生產(chǎn)和開發(fā)利用提供參考。

關(guān)鍵詞：杜仲；遺傳育種；研究進(jìn)展

中圖分類號(hào)：S567.1+90.3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1002-1302（2014）08-0007-04

杜仲（Eucommia ulmoides Oliv.）屬杜仲科植物，該科僅1屬、1種，為地質(zhì)史上第三紀(jì)冰川運(yùn)動(dòng)殘留下來的古生樹種^[1]，還是我國特有的名貴經(jīng)濟(jì)樹種^[2]。鑒于其起源古老，具有重要的研究價(jià)值及重要的藥用價(jià)值，已被列為國家二級(jí)保護(hù)植物^[3]。杜仲自古以皮入藥而著稱，具有抗疲勞、抗衰老、抗腫瘤、增強(qiáng)免疫力等藥效，特別是對(duì)血壓獨(dú)有的雙向調(diào)節(jié)作用對(duì)維持人體健康具有至關(guān)重要的作用^[4-5]。杜仲既是貴重藥材，又是提取天然橡膠的工業(yè)原料^[6]，此外還是很好的用材樹種、園林綠化及水土保持樹種。因此，杜仲是一種集經(jīng)濟(jì)效益、生態(tài)效益、社會(huì)效益于一身的植物，具有極高的開發(fā)利用價(jià)值^[7]。目前國內(nèi)外對(duì)杜仲的綜合開發(fā)利用涉及醫(yī)藥衛(wèi)生、能源化工以及園林綠化等多個(gè)領(lǐng)域，已形成一個(gè)利用多學(xué)科綜合研究開發(fā)的全新格局。為了更進(jìn)一步開發(fā)利用杜仲資源，本文綜述了杜仲的遺傳育種研究成果，以期為杜仲的大規(guī)模開發(fā)利用及生產(chǎn)提供參考。

1 國內(nèi)外杜仲研究概況

1.1 國外杜仲研究概況

由于杜仲具有較高經(jīng)濟(jì)價(jià)值，自1940年起前蘇聯(lián)、美國、日本、韓國、瑞典、西班牙、墨西哥、英國等國先后對(duì)杜仲進(jìn)行研究，相關(guān)研究主要集中在杜仲有效成分的提取及利用等方面。目前對(duì)杜仲的研究以日本最為領(lǐng)先，其次為中國^[8]。日本對(duì)杜仲的研究涉及種質(zhì)資源培植、成分分析、藥理試驗(yàn)、產(chǎn)品研制、市場開發(fā)等方面^[9]。近年來，英國、韓國也在杜仲愈傷組織誘導(dǎo)、血管緊張素化酶抑制劑等化學(xué)成分的提取和分析、藥理及保健功能的研究方面取得了一定成果^[10]。

1.2 我國杜仲研究概況

我國早在2 000多年前就開始對(duì)杜仲進(jìn)行栽培和藥理方面的研究，《草本神農(nóng)經(jīng)》《本草綱目》《本草備要》等古代著名藥書都有詳細(xì)記載。目前我國對(duì)杜仲的研究主要集中在遺傳育種^[11]、藥材用林營造與栽培^[12-13]、組培快繁^[14-15]、活性成分提取及分析^[16-17]、藥理及保健功能研究等方面^[18-19]。近年來隨著杜仲橡膠產(chǎn)業(yè)的蓬勃發(fā)展，杜仲橡膠提取工藝及膠用新品種選育方面的研究^[20-21]也獲得了成功。

2 杜仲育種

我國系統(tǒng)開展杜仲遺傳育種工作始于20世紀(jì)80年代，以西北農(nóng)林科技大學(xué)和河南省洛陽市林業(yè)科學(xué)研究所為主的一些單位在杜仲常規(guī)育種、生物技術(shù)育種方面作了大量研究，并取得了一定成果。

2.1 常規(guī)育種

2.1.1 種質(zhì)資源區(qū)劃和保存

由于杜仲皮藥用價(jià)值較高，20世紀(jì)80年代初非法商販在川陜等地大量收購杜仲皮，導(dǎo)致野生杜仲資源遭到嚴(yán)重破壞，直至杜仲被列為國家二級(jí)保護(hù)植物后育種工作者才開始開展杜仲資源的收集保護(hù)工作^[22]。張維濤等根據(jù)杜仲生物學(xué)特性和栽培現(xiàn)狀，對(duì)全國杜仲栽培資源進(jìn)行區(qū)劃，劃分出中心栽培區(qū)、主要栽培區(qū)、邊緣區(qū)、引種區(qū)^[23]。20世紀(jì)90年代末陳品良等根據(jù)自然地理特點(diǎn)、經(jīng)濟(jì)性狀、形態(tài)特點(diǎn)上的差異，劃分出杜仲的7個(gè)主要分布區(qū)：秦巴山區(qū)、大婁山區(qū)、鄂西山區(qū)、武陵山區(qū)、伏牛山-桐柏山-大別山區(qū)以及浙、贛、皖交界山區(qū)和南嶺山區(qū)^[24]。此后四川、貴州、河南、湖南、河北等省對(duì)當(dāng)?shù)囟胖俜N質(zhì)資源分別進(jìn)行了調(diào)查和收集[22，25-28]。21世紀(jì)初中國林業(yè)科學(xué)研究院經(jīng)濟(jì)林研究開發(fā)中心建立了世界上最大的杜仲種質(zhì)資源庫，共收集保存了600余份杜仲優(yōu)良基因資源^[29]。武漢植物園發(fā)現(xiàn)了1株指紋圖譜與栽培杜仲差異很大的200多年樹齡雄性古樹，被認(rèn)為是野生杜仲滅絕后發(fā)現(xiàn)的重要野生種質(zhì)資源^[30]。這些都為我國杜仲育種工作提供了寶貴的基因資源。

2.1.2 引種

杜仲為我國特有樹種，僅在我國部分地區(qū)有野生資源，其他國家的杜仲資源均引種自我國^[31]。1890年杜仲首次被引入歐洲，先被引入法國，幾年后被引入英國，1899年被引入日本，1906年被傳入俄國，1907年被引入美國。除上述國家外，先后從我國引種杜仲的國家還有韓國、德國、匈牙利、印度、朝鮮、加拿大等。目前杜仲已在歐洲、美洲、亞洲的十多個(gè)國家和地區(qū)安家落戶^[32]。

由于杜仲適應(yīng)性強(qiáng)，在我國亞熱帶、暖溫帶的大部分地方均能正常生長發(fā)育。杜仲除在與其主要栽培區(qū)鄰近、氣候土壤條件相似的江西、廣西、福建、廣東等地得到較大發(fā)展外，距主要栽培區(qū)較遠(yuǎn)的甘肅、寧夏、北京、河北、天津、山東、遼寧、陜北、吉林、新疆、云南、上海等?。ㄊ?、區(qū)）的部分地區(qū)，也先后引種獲得成功。目前除海南、臺(tái)灣、黑龍江、西藏等地外的27個(gè)?。▍^(qū)、市）均有杜仲種植[29，31]。

2.1.3 良種選育

河南省洛陽市林業(yè)科學(xué)研究所等單位根據(jù)多年系統(tǒng)研究，通過培育同齡苗、無性系苗期測定、多點(diǎn)造林測定、區(qū)域試驗(yàn)，選育出我國首批杜仲優(yōu)良品種華仲1號(hào)至華仲5號(hào)，填補(bǔ)了我國杜仲良種的空白，對(duì)杜仲生產(chǎn)逐步實(shí)現(xiàn)良種化具有積極引導(dǎo)和推動(dòng)作用^[33]。此后，研究者從樹皮特征、枝條變異特點(diǎn)、葉片、果實(shí)特征等方面將杜仲劃分為不同類型，并總結(jié)其形態(tài)特征和經(jīng)濟(jì)價(jià)值等，為挖掘優(yōu)良杜仲基因資源和杜仲遺傳改良研究提供材料^[34]。在此基礎(chǔ)上，針對(duì)不同育種目標(biāo)分別選育出適于營建杜仲良種果園、生產(chǎn)杜仲膠和杜仲亞麻酸油的華仲6～9號(hào)^[35-38]。同時(shí)還選育出具有特異性狀的杜仲良種紅葉杜仲和密葉杜仲，目前已審定杜仲良種5個(gè)，認(rèn)定杜仲良種1個(gè)^[29]。西北農(nóng)林科技大學(xué)通過有效成分分析，選出杜仲優(yōu)良種源區(qū)和優(yōu)良類型^[39]；在此基礎(chǔ)上選擇優(yōu)樹，建立了無性系測定林^[40]；然后以有效成分為首選指標(biāo)，結(jié)合生長量、抗性等指標(biāo)，選出14個(gè)優(yōu)良無性系；最后通過優(yōu)良無性系區(qū)域栽培試驗(yàn)，選育出有效成分含量高且性狀穩(wěn)定的優(yōu)良品種秦仲1號(hào)至秦仲4號(hào)，其產(chǎn)量和品質(zhì)較野生杜仲均有一定程度提高^[11]。

2.1.4 雜交育種

雜交育種是培育新品種的傳統(tǒng)方法之一，近年來關(guān)于杜仲雜交育種的研究也在進(jìn)行中。西北農(nóng)林科技大學(xué)選擇性狀差異較大的12個(gè)杜仲優(yōu)良品種（無性系）各1株作為雜交親本，按析因交配設(shè)計(jì)組成35個(gè)雜交組合進(jìn)行人工雜交，得到7個(gè)較大的F1全同胞家系^[41]；測定了這些2年生杜仲雜種苗苗期表型性狀，并對(duì)苗高、地徑、葉面積等性狀的遺傳參數(shù)進(jìn)行了分析；結(jié)果表明杜仲雜交子代的苗期表型性狀差異顯著，可以進(jìn)行家系間和家系內(nèi)的初步選擇，其中5個(gè)家系各性狀的特殊配合力相對(duì)較高，可用于進(jìn)一步雜交選育杜仲良種^[42]。

2.1.5 多倍體育種

人工誘導(dǎo)多倍體是獲得植物新類型或新種質(zhì)的重要途徑之一。20世紀(jì)90年代初就有了杜仲三倍體誘導(dǎo)成功的報(bào)道^[43]，此后我國對(duì)杜仲多倍體誘導(dǎo)進(jìn)行了大量研究。西北農(nóng)林科技大學(xué)先后利用60Co輻射處理萌動(dòng)種子和秋水仙素處理杜仲幼苗頂端生長點(diǎn)，成功誘導(dǎo)出形態(tài)變異的單株，但誘導(dǎo)后染色體數(shù)目是否發(fā)生變化尚不明確^[44-45]。成都大學(xué)、北京林業(yè)大學(xué)分別使用秋水仙素對(duì)杜仲種子和花粉染色體進(jìn)行人工誘導(dǎo)加倍，經(jīng)植物形態(tài)學(xué)和染色體數(shù)檢測，誘導(dǎo)后的材料具有明顯的多倍體特征^[46-47]。河北農(nóng)業(yè)大學(xué)的郭海鳳等采用秋水仙素溶液處理生長點(diǎn)的誘變方法對(duì)杜仲籽苗進(jìn)行誘導(dǎo)，對(duì)獲得的 148個(gè)變異株進(jìn)行染色體數(shù)檢測及DNA 相對(duì)含量測定后，鑒定出47株為四倍體，而且這些四倍體植株明顯表現(xiàn)出多倍體的特征^[48]。然后對(duì)其主要藥用成分、杜仲膠等進(jìn)行了測定，從中篩選出生長快、抗性強(qiáng)、有效成分含量高的優(yōu)良四倍體植株^[49]。

2.2 生物技術(shù)育種

2.2.1 組織培養(yǎng)

杜仲造林以種子繁殖為主，但其發(fā)芽率較低，而且實(shí)生個(gè)體之間的有效成分含量差異較大，不利于新品種選育。組織培養(yǎng)技術(shù)可以大大縮短育種周期，而且可以提高品質(zhì)^[50]。杜仲組織培養(yǎng)從20世紀(jì)80年代就已經(jīng)開始，經(jīng)過30年研究，技術(shù)已經(jīng)逐漸趨于成熟。目前除子葉外，葉片、葉柄、腋芽、胚軸、帶芽莖段、莖尖、子葉等外植體在不同再生體系中均獲得了再生植株。由于杜仲的體細(xì)胞胚發(fā)生還未能突破，所以杜仲苗的工廠化生產(chǎn)在一定程度上受到限制^[51]。

2.2.2 遺傳多樣性研究

近年來隨著分子生物學(xué)的高速發(fā)展，有關(guān)先進(jìn)技術(shù)在杜仲育種研究中也得以應(yīng)用。杜仲RAPD、AFLP、ISSR、SSR等分子標(biāo)記反應(yīng)體系相繼被建立[7，52-54]，為分子水平上的杜仲育種研究提供了技術(shù)支持。王媛琦等以20年樹齡栽培杜仲的16個(gè)群體共260個(gè)個(gè)體為研究對(duì)象，利用RAPD分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)其遺傳多樣性和居群遺傳結(jié)構(gòu)進(jìn)行了研究。結(jié)果表明，杜仲種內(nèi)具有豐富的遺傳多樣性，各群體內(nèi)部的遺傳多樣性較低。認(rèn)為杜仲群體間已發(fā)生了高度的遺傳分化，在此基礎(chǔ)上提出了“盡可能保護(hù)更多的種群”的保護(hù)策略^[55]。武漢植物園在上述研究基礎(chǔ)上擴(kuò)大了研究樣本量，以15～30年生的9個(gè)栽培群體和1個(gè)半野生群體共582個(gè)個(gè)體為材料，利用穩(wěn)定性高于RAPD的SSR、AFLP 2種標(biāo)記分別從葉綠體DNA及核基因DNA角度再次對(duì)杜仲遺傳多樣性進(jìn)行分析。結(jié)果表明栽培群體間的遺傳多樣性較低，神農(nóng)架半野生群體與其他栽培群體相比，表現(xiàn)出很高水平的遺傳多樣性。說明人工選擇是導(dǎo)致栽培品種遺傳多樣性降低的主要原因。而各群體內(nèi)的遺傳多樣性表現(xiàn)為中等水平。這與RAPD標(biāo)記分析結(jié)果有一定差異，認(rèn)為是RAPD分析的群體內(nèi)樣本量過少造成的。并提出優(yōu)先保護(hù)與其他群體差異較大的遵義群體，而神農(nóng)架半野生群體應(yīng)進(jìn)行遷地保護(hù)，以保證種內(nèi)高水平的遺傳多樣性^[56]。

2.2.3 性別相關(guān)分子標(biāo)記

杜仲為嚴(yán)格的雌雄異株植物，不同性別的杜仲植株在經(jīng)濟(jì)價(jià)值和實(shí)際利用方面有很大差別。在幼年期僅憑形態(tài)學(xué)特征難以辨別其性別，給杜仲品種改良和保護(hù)工作帶來困難。北京大學(xué)、西北農(nóng)林科技大學(xué)分別利用RAPD、AFLP標(biāo)記結(jié)合BSA（bulk segregant analysis）法對(duì)杜仲性別相關(guān)分子標(biāo)記進(jìn)行了篩選和驗(yàn)證；分別得到1個(gè) 569 bp 的雌性特有的RAPD標(biāo)記和1個(gè)350 bp 的雄性特有的AFLP標(biāo)記，并將這2個(gè)標(biāo)記轉(zhuǎn)化成簡單、穩(wěn)定的SCAR標(biāo)記。經(jīng)反復(fù)驗(yàn)證，確定這2個(gè)SCAR標(biāo)記可用于杜仲分子標(biāo)記輔助育種，可用于杜仲后代在苗期進(jìn)行性別快速選擇，大幅提高育種效率^[57-58]。

2.2.4 遺傳連鎖圖譜構(gòu)建及QTL定位

西北農(nóng)林科技大學(xué)利用AFLP標(biāo)記技術(shù)和擬測交作圖策略，以人工雜交獲得的F1作圖群體為材料，構(gòu)建了首張杜仲分子遺傳連鎖圖譜。親本Q1遺傳連鎖圖包括12個(gè)連鎖群108個(gè)標(biāo)記，覆蓋基因組總長929.57 cM，相鄰標(biāo)記的平均間距為8.61 cM。親本LF遺傳連鎖圖包括14個(gè)連鎖群127個(gè)標(biāo)記，覆蓋LF基因組總長約1 116.08 cM，連鎖圖上相鄰標(biāo)記間的平均距離為 8.78 cM。在此遺傳連鎖圖譜的基礎(chǔ)上利用F1作圖群體的表型數(shù)據(jù)分析結(jié)果，對(duì)杜仲生長性狀和葉片性狀進(jìn)行了QTL定位，共檢測到控制8個(gè)性狀的29個(gè)QTL位點(diǎn)^[59]。遺傳連鎖圖譜的構(gòu)建為今后杜仲分子遺傳改良及分子標(biāo)記輔助育種奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

2.2.5 功能基因研究

杜仲功能基因研究也取得了一定進(jìn)展。貴州大學(xué)以杜仲幼嫩樹皮為材料，采用RT-PCR技術(shù)構(gòu)建了杜仲樹皮的cDNA文庫^[60]。在此基礎(chǔ)上又分離出杜仲膠顆粒結(jié)合蛋白EuRPP，并證明EuRPP存在于含膠細(xì)胞中，可能參與杜仲膠的形成過程^[61-62]。隨著一個(gè)新的杜仲抗真菌蛋白EAFP3被發(fā)現(xiàn)，EuRPP的氨基酸序列也得到鑒定，其具有與EAFP3相同的抗菌功能也能得到證明^[63]。目前已經(jīng)成功克隆出的杜仲膠合成相關(guān)基因還有EuFPS、杜仲肉桂醇脫氫酶基因和杜仲3-羥基-3-甲基戊二酸單酞輔酶A還原酶基因^[64-66]。近年來隨著第2代測序技術(shù)的發(fā)展，轉(zhuǎn)錄組測序分析已經(jīng)成為發(fā)掘功能基因的主流方法。中南林業(yè)科技大學(xué)對(duì)杜仲葉片和果實(shí)的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)進(jìn)行了深度分析，得到了果實(shí)和葉片差異表達(dá)基因和特異表達(dá)基因信息，以及杜仲膠、α-亞麻酸、苯丙素類等活性物質(zhì)生物合成途徑的相關(guān)基因表達(dá)規(guī)律及關(guān)鍵酶基因信息；分別發(fā)現(xiàn)杜仲膠合成上游、下游相關(guān)基因124、74條，篩選出杜仲膠合成上游和下游包括乳膠管蛋白、橡膠延伸因子、橡膠小顆粒蛋白和杜仲膠合成關(guān)鍵酶基因異戊二烯磷酸二合酶等關(guān)鍵酶基因63條^[67-69]。

2.2.6 轉(zhuǎn)基因研究

功能基因的大量發(fā)掘?yàn)槎胖俚霓D(zhuǎn)基因育種奠定了基礎(chǔ)。貴州大學(xué)采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法對(duì)杜仲進(jìn)行了遺傳轉(zhuǎn)化，構(gòu)建了杜仲膠合成基因的RNA干擾表達(dá)載體和過量表達(dá)載體，建立了杜仲遺傳轉(zhuǎn)化體系^[70-71]。將杜仲膠合成基因成功轉(zhuǎn)入煙草，得到了轉(zhuǎn)基因植株，證明EuFPS基因參與了煙草揮發(fā)性成分等萜類物質(zhì)的調(diào)控^[72]，且發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因植株的杜仲膠含量提高了18.65%～26.54%^[69]。

3 研究展望

近年來，我國在杜仲常規(guī)育種和生物技術(shù)育種工作中均取得了一定成就，但活性成分提取、藥理等方面的研究還相對(duì)薄弱。常規(guī)育種方面，研究部門充分利用當(dāng)?shù)胤N質(zhì)資源選育出一批杜仲優(yōu)良品種和優(yōu)良無性系，為杜仲的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。

生物技術(shù)育種方面，分子標(biāo)記技術(shù)已經(jīng)在杜仲育種研究中得到大量應(yīng)用，第1張杜仲分子標(biāo)記遺傳連鎖圖譜已經(jīng)被成功構(gòu)建，但所構(gòu)建的遺傳圖譜密度中等，雖能夠用于杜仲重要性狀定位，但距離飽和差距還較大，無法進(jìn)行精細(xì)定位，離圖位克隆仍有一定距離。為了高效、精準(zhǔn)對(duì)杜仲重要經(jīng)濟(jì)性狀進(jìn)行定位，還須進(jìn)一步建立其高密度連鎖圖。隨著大量功能基因被發(fā)掘，杜仲轉(zhuǎn)基因育種方面的研究也在不斷完善，杜仲遺傳轉(zhuǎn)化體系已經(jīng)建立，而且成功獲得了高膠含量的轉(zhuǎn)基因植株，為大幅度提高杜仲膠含量奠定了基礎(chǔ)。隨著更多功能基因被不斷發(fā)掘，轉(zhuǎn)基因技術(shù)在杜仲育種中一定會(huì)扮演更加重要的角色。

杜仲生長周期長，生長環(huán)境較難控制，是杜仲遺傳改良研究中最主要的限制因素。由于杜仲遺傳基礎(chǔ)研究比較薄弱，對(duì)其許多經(jīng)濟(jì)性狀的早期選擇和高效遺傳改良等問題仍無法從根本上得到解決，從而制約杜仲良種選育工作進(jìn)程。因此，尋找有效的早期選擇方法，提高選擇效率，縮短育種周期，對(duì)杜仲育種工作具有十分重要的意義。

總的說來，如何進(jìn)一步選育出速生、豐產(chǎn)、有效成分含量高的新品種仍是今后杜仲育種工作的重要目標(biāo)。今后應(yīng)根據(jù)生產(chǎn)和產(chǎn)業(yè)化發(fā)展的需求，將常規(guī)育種與生物技術(shù)育種緊密結(jié)合，選育出更多具有廣闊產(chǎn)業(yè)化前景的優(yōu)良品種。

參考文獻(xiàn)：

[1]張康健. 中國杜仲研究[M]. 西安：陜西科學(xué)技術(shù)出版社，1992.

[2]張宏達(dá). 中國植物志：第35卷第2分冊[M]. 北京：科學(xué)出版社，1979.

[3]傅立國. 中國植物紅皮書——稀有瀕危植物：第1冊[M]. 北京：科學(xué)出版社，1991.

[4]袁天翊，方蓮花，呂 揚(yáng)，等. 杜仲葉的藥理作用研究進(jìn)展[J]. 中國中藥雜志，2013，38（6）：781-785.

[5]Li Z Y，Gu J，Yan J，et al. Hypertensive cardiac remodeling effects of lignan extracts from Eucommia ulmoides Oliv. bark-A famous traditional Chinese medicine[J]. The American Journal of Chinese Medicine，2013，41（4）：801-815.

[6]黃麗莉，段玉芳，楊春霞. 杜仲綜合開發(fā)利用及產(chǎn)業(yè)化發(fā)展探討[J]. 農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào)，2013，3（6）：57-60.

[7]王大瑋，李 煜，周 瑋，等. 杜仲AFLP反應(yīng)體系的建立及優(yōu)化[J]. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2010，38（6）：88-94.

[8]唐建軍，張祿源，何鳴筱. 杜仲的研究與應(yīng)用進(jìn)展[J]. 植物學(xué)通報(bào)，1998，15（6）：48-52.

[9]蘇印泉，馬希漢，楊宗英.日本的杜仲研究開發(fā)評(píng)述[J]. 西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，1996，11（2）：96-102.

[10]艾倫強(qiáng)，李婷婷，何銀生，等. 杜仲的應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2010，6（10）：163-165.

[11]張博勇，張康健，張 檀，等. 秦仲1-4號(hào)優(yōu)良品種選育研究[J]. 西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，19（3）：18-20.

[12]杜紅巖，譚運(yùn)德，張保懷. 杜仲良種果園、種子園的營建與整形修剪技術(shù)[J]. 林業(yè)科技開發(fā)，1997（5）：15-17.

[13]呂 強(qiáng)，彭密軍，彭 勝，等. 不同栽培模式對(duì)杜仲葉及枝皮中多種活性成分含量的影響[J]. 經(jīng)濟(jì)林研究，2012，30（1）：73-76.

[14]張康健，蘇印泉，劉淑明，等. 杜仲優(yōu)樹返幼及快速繁殖方法的研究[J]. 西北植物學(xué)報(bào)，1989，10（2）：102-109.

[15]袁云香.杜仲葉片愈傷組織誘導(dǎo)及增殖培養(yǎng)條件的優(yōu)化[J]. 科學(xué)技術(shù)與工程，2013，13（7）：1927-1929.

[16]尉 芹，馬希漢，張康健. 杜仲化學(xué)成分研究[J]. 西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，1995，10（4）：88-93.

[17]潘亞磊，翟遠(yuǎn)坤，武祥龍，等. 杜仲活性成分的提取及分離純化方法研究進(jìn)展[J]. 化學(xué)與生物工程，2012，29（2）：1-5.

[18]杜紅巖. 杜仲活性成分與藥理研究的新進(jìn)展[J]. 經(jīng)濟(jì)林研究，2003，21（2）：58-61，82.

[19]彭紅梅，李小姝.杜仲的藥理研究現(xiàn)狀及應(yīng)用展望[J]. 中醫(yī)學(xué)報(bào)，2013，28（1）：72-73.

[20]王 聰，毛 波，王 旭，等. 高溫蒸煮結(jié)合溶劑提取法提取杜仲膠的工藝研究[J]. 化學(xué)與生物工程，2012，29（2）：77-79.

[21]杜紅巖，烏云塔娜，杜蘭英. 杜仲高產(chǎn)膠優(yōu)良無性系的選育[J]. 中南林學(xué)院學(xué)報(bào)，2006，26（1）：6-11.

[22]譚家駒. 川北杜仲資源及其開發(fā)利用[J]. 山區(qū)開發(fā)，1994（6）：20-21.

[23]張維濤，劉湘民，沈紹華，等. 中國杜仲栽培區(qū)劃初探[J]. 西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，1994，9（4）：36-40.

[24]陳品良，吳俊元，賀善安.杜仲種質(zhì)資源的現(xiàn)狀及保護(hù)對(duì)策[J]. 植物資源與環(huán)境，1992，1（4）：6-11.

[25]嚴(yán)玉平，宋國英，葛喜珍，等. 河北省種植杜仲的問題淺析[J]. 河北林果研究，1998（增刊）：28-29.

[26]覃正亞. 論湖南杜仲產(chǎn)業(yè)發(fā)展的策略調(diào)整[J]. 經(jīng)濟(jì)林研究，2001，19（1）：66-68.

[27]丁 銳. 慈利縣杜仲資源的保護(hù)與開發(fā)[J]. 湖南環(huán)境生物職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報(bào)，2001，7（2）：34-37.

[28]張 敏. 科學(xué)種植、合理開發(fā)我省杜仲資源[J]. 種子，2002（4）：74-75.

[29]杜紅巖. 我國的杜仲膠資源及其開發(fā)潛力與產(chǎn)業(yè)發(fā)展思路[J]. 經(jīng)濟(jì)林研究，2010，28（3）：1-6.

[30]鄧建云，李建強(qiáng)，黃宏文. 一株具有特異AFLP指紋圖譜的杜仲古樹[J]. 武漢植物學(xué)研究，2006，24（6）：509-513.

[31]李芳東，杜紅巖. 杜仲[M]. 北京：中國中醫(yī)藥出版社，2001：232-256.

[32]周政賢. 中國杜仲[M]. 貴陽：貴州科技出版社，1993.

[33]杜紅巖. 杜仲良種──華仲1-5號(hào)[J]. 經(jīng)濟(jì)林研究，1995，13（4）：78.

[34]杜紅巖.我國杜仲變異類型的研究[J]. 經(jīng)濟(jì)林研究，1997，15（3）：34-36，64.

[35]杜紅巖，李芳東，杜蘭英，等. 果用杜仲良種“華仲6號(hào)”[J]. 林業(yè)科學(xué)，2010，46（8）：182.

[36]杜紅巖，李芳東，李福海，等. 果用杜仲良種“華仲7號(hào)”[J]. 林業(yè)科學(xué)，2010，46（9）：186.

[37]杜紅巖，李芳東，楊紹彬，等. 果用杜仲良種“華仲8號(hào)”[J]. 林業(yè)科學(xué)，2010，46（11）：189.

[38]杜紅巖，李芳東，楊紹彬，等. 果用杜仲良種“華仲9號(hào)”[J]. 林業(yè)科學(xué)，2011，47（3）：194.

[39]張博勇，張康健，王亞琴，等. 杜仲優(yōu)良種源區(qū)與類型選擇的研究[J]. 西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，18（4）：32-34.

[40]張康健，蘇印泉，張 檀. 中國杜仲優(yōu)良品種選育[M]. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)出版社，2002.

[41]李 煜，王大瑋，李周岐，等. 杜仲遺傳作圖群體的建立[J]. 西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，27（2）：62-65，108.

[42]魏永成，李周岐，李 煜，等. 杜仲雜交子代苗期表型性狀的遺傳分析[J]. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，2012，40（8）：137-143.

[43]崔克明. 杜仲研究的歷史、現(xiàn)狀和展望[J]. 西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，1994，9（4）：51-57.

[44]畢春俠，張存旭，郭軍戰(zhàn)，等. 杜仲多倍體的誘導(dǎo)[J]. 河北林果研究，1999，14（2）：50-52.

[45]張煥玲，李俊紅，李周岐.秋水仙素處理杜仲種子誘導(dǎo)多倍體的研究[J]. 西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2008，23（1）：78-81.

[46]高 鵬，林 威，康向陽. 秋水仙堿誘導(dǎo)杜仲花粉染色體加倍的研究[J]. 北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，26（4）：39-42.

[47]王躍華. 杜仲種子的多倍體誘導(dǎo)研究[J]. 亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2006（8）：73-76.

[48]張海鳳，郭寶林，張成合，等. 杜仲四倍體的誘導(dǎo)與鑒定[J]. 園藝學(xué)報(bào)，2008，35（7）：1047-1052.

[49]趙 靜. 四倍體與二倍體杜仲生長、抗寒及主要藥物成分的比較研究[D]. 保定：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)，2011.

[50]何 莉，賈文慶，劉 宇.杜仲莖尖離體培養(yǎng)的研究[J]. 浙江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008（6）：675-677.

[51]唐 亮，金曉玲. 杜仲組織培養(yǎng)的研究進(jìn)展[J]. 貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，38（3）：15-18.

[52]王 宏，趙 輝，李周岐，等. 杜仲RAPD反應(yīng)體系的優(yōu)化[J]. 西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，2007，22（4）：86-89.

[53]Deng J Y，Liu Y F，Huang H W. Development and characterization of microsatellite markers in Eucommia ulmoides Oliver （Eucommiaceae）[J]. Molecular Ecology Notes，2006，6（2）：496-498.

[54]王弦云，朱曉敏，王 勤，等. 杜仲ISSR-PCR反應(yīng)體系的建立與引物篩選及其在遺傳多樣性研究中的應(yīng)用[J]. 經(jīng)濟(jì)林研究，2013，31（1）：30-34.

[55]王璦琦，黃璐琦，邵愛娟，等. 孑遺植物杜仲的遺傳多樣性RAPD分析和保護(hù)策略研究[J]. 中國中藥雜志，2006，31（19）：1583-1586.

[56]Yao X H，Deng J Y，Huang H W. Genetic diversity in Eucommia ulmoides（Eucommiaceae），an endangered traditional Chinese medicinal plant[J]. Conservation Genetics，2012，13（6）：1499-1507. [HJ1.7mm]

[57]Xu W J，Wang B W，Cui K M. RAPD and SCAR markers linked to sex determination inEucommia ulmoides Oliv.[J]. Euphytica，2004，136（3）：233-238.

[58]Wang D W，Li Y，Li Z Q. Identification of a male-specific amplified fragment length polymorphism （AFLP） and a sequence characterized amplified region （SCAR） marker in Eucommia ulmoides Oliv.[J]. International Journal of Molecular Sciences，2011，12（1）：857-864.

[59]王大瑋. 杜仲遺傳連鎖圖譜構(gòu)建及重要性狀的分子標(biāo)記[D]. 楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2011.

[60]周明兵，侯 磊，朱冬雪，等. 杜仲樹皮cDNA文庫的構(gòu)建與分析[J]. 山地農(nóng)業(yè)生物學(xué)報(bào)，2004，23（1）：58-59，69.

[61]趙德剛，韓玉珍，傅永福，等. 杜仲膠生物合成相關(guān)蛋白質(zhì)的研究[J]. 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1999，4（1）：114.

[62]王敏杰，韓玉珍，劉衛(wèi)平，等. 杜仲橡膠顆粒結(jié)合蛋白的分離、純化及抗體制備[J]. 林業(yè)科學(xué)，2003，39（4）：23-29.

[63]劉世會(huì). 杜仲蛋白純化、序列分析及抗菌活性研究[D]. 貴陽：貴州大學(xué)，2008.

[64]周明兵，肖月華，朱冬雪，等. 杜仲膠合成相關(guān)基因EuFPS的克隆及序列分析[J]. 分子植物育種，2003，1（1）：66-71.

[65]劉衛(wèi)平，韓玉珍，趙德剛. 杜仲肉桂醇脫氫酶基因克隆及序列分析[J]. 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，8（1）：27-30.

[66]Jiang J H，Kai G Y，Cao X Y，et al. Molecular cloning of a HMG-CoA reductase gene from Eucommia ulmoides Oliver[J]. Bioscience Reports，2006，26（2）：171-181.

[67]李鐵柱，杜紅巖，劉慧敏，等. 杜仲幼果和成熟果實(shí)轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)組裝及基因功能注釋[J]. 中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，32（10）：9-17.

[68]李鐵柱，杜紅巖，劉慧敏，等. 杜仲果實(shí)和葉片轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)組裝及基因功能注釋[J]. 中南林業(yè)科技大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，32（11）：122-130.

[69]王鳳菊.“2012中國杜仲產(chǎn)業(yè)發(fā)展高峰論壇”總結(jié)杜仲產(chǎn)業(yè)重大進(jìn)展[J]. 中國橡膠，2012，28（20）：10-12.

[70]趙 丹，趙德剛，李 巖. EuFPS基因表達(dá)載體構(gòu)建及對(duì)杜仲遺傳轉(zhuǎn)化的研究[J]. 基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué)，2009，28（1）：27-33.

[71]李 巖，趙德剛. ipt基因促進(jìn)杜仲遺傳轉(zhuǎn)化不定芽再生[J]. 北京林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，33（6）：90-93.

[72]Zhao D，Liu Y，Zhu Y，et al. The effect of Eucommia ulmoides farnesyl pyrophosphate synthese gene on volatile constituents of transgenic tobacco[C].11th the International Association for Plant Tissue Culture and Biotechnology Congress. Beijing，2006：13-18.[HT][HJ][FL）]