五蓮山野生迎紅杜鵑組織快繁技術(shù)

李媛+侯可雷

摘要：以野生迎紅杜鵑幼嫩枝芽為試驗(yàn)材料，進(jìn)行組織培養(yǎng)技術(shù)研究。結(jié)果表明：當(dāng)年生野生迎紅杜鵑嫩枝的最佳消毒方法為，先用0.25 g/L多菌靈浸泡45 min，然后用75%乙醇溶液消毒30 s，再用0.1% HgCl2消毒6 min；最佳啟動培養(yǎng)基配方為Read+3 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+6.5 g/L瓊脂粉，pH值5.5，該條件下誘芽率達(dá)到89.73%；最佳繼代增殖培養(yǎng)基配方為1/2 Read+2 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA；最適生根培養(yǎng)基配方為Read+0.5 mg/L NAA+20 g/L蔗糖。

關(guān)鍵詞：迎紅杜鵑；正交設(shè)計(jì)；組織培養(yǎng)

中圖分類號：S685.210.4+3 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-1302（2014）08-0055-02

杜鵑花是世界著名的園林觀賞植物，也是我國十大傳統(tǒng)名花之一，與龍膽、報(bào)春并稱為世界三大高山野生花卉^[1]。我國杜鵑花栽培歷史悠久，種質(zhì)資源豐富，在環(huán)境綠化、園林觀賞等方面應(yīng)用很廣^[2-3]。五蓮山位于山東省日照市，是我國野生杜鵑花資源的主要分布地之一，擁有迎紅杜鵑（Rhododendron mucronulatum）、映山紅（Rhododendron simsii）、照山白（Rhododendron micramthum）等三大品系共40多個(gè)杜鵑花品種，是長江以北地區(qū)最大的野生杜鵑花棲息地^[4]。迎紅杜鵑別稱迎山紅、萬荊子、藍(lán)荊子、尖葉杜鵑等^[5]，屬杜鵑花科杜鵑花屬的落葉灌木，生于山地灌叢及石砬子上，喜光、喜濕潤，稍耐陰，耐寒冷，喜酸性土壤，忌高溫、干旱，花粉紅絢麗，秋葉綠、紅、黃相間，嬌艷優(yōu)美，盛花期長達(dá)1個(gè)月，彩葉期長達(dá)2個(gè)月，是花帶、花境、花叢等園林景觀設(shè)計(jì)的優(yōu)良素材^[6]。

迎紅杜鵑在長江以北地區(qū)少有推廣^[7]，僅停留在少量野生苗被移植應(yīng)用的水平上，主要是因?yàn)槌Ｒ?guī)繁殖方法下繁殖系數(shù)較低，而且其對生長環(huán)境要求苛刻，馴化栽培有一定難度^[8-11]。本研究探討了迎紅杜鵑快速繁殖技術(shù)，該技術(shù)在較短時(shí)間內(nèi)憑借少量母本材料獲得了較多無性系名貴苗木，以期為該樹種更好地服務(wù)于未來城鄉(xiāng)綠化建設(shè)提供支持。

1 材料與方法

1.1 材料

在五蓮山采集野生迎紅杜鵑嫩枝條。在連續(xù)晴天3 d以上、枝條無露水時(shí)進(jìn)行取樣，取樣時(shí)間一般在09：00—10：00，剪取無病蟲害、生長健壯的枝梢。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 外植體消毒滅菌 用流水沖洗、去除外植體表面附著物后，放入洗潔精稀釋液中逐個(gè)清洗并浸泡5 min，再置于流水中1 h以上，徹底洗去洗滌劑后轉(zhuǎn)入超凈工作臺內(nèi)，進(jìn)行滅菌處理。對外植體先用0.25 g/L多菌靈浸泡，再用75%乙醇溶液浸泡，最后用0.1% HgCl2進(jìn)行消毒。每種消毒劑的消毒時(shí)間設(shè)3個(gè)水平，采用L9（34）正交設(shè)計(jì)進(jìn)行試驗(yàn)（表1）。每個(gè)處理重復(fù)3次。統(tǒng)計(jì)外植體污染率、褐化率、成活率。

1.2.3 繼代培養(yǎng)基配方篩選 以改良Read培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，以ZT為影響因素，ZT設(shè)1、 2、3 mg/L等3個(gè)水平，每個(gè)組合30瓶，重復(fù)2次，統(tǒng)計(jì)增殖率。

1.2.4 生根培養(yǎng)方案 基本培養(yǎng)基選用Read和1/2 Read，蔗糖濃度分別為10、20、30 g/L。每個(gè)處理接種10株組培苗，3次重復(fù)，生長調(diào)節(jié)劑均為0.5 mg/L NAA，pH值5.5，40 d后調(diào)查其生根率。

1.2.5 馴化移栽 選取根系健壯且數(shù)量多的幼苗，將其培養(yǎng)瓶移出光照培養(yǎng)箱，放在18～25 ℃室溫下煉苗。煉苗結(jié)束后將幼苗從培養(yǎng)瓶中取出，洗凈根部的培養(yǎng)基，將其移栽到已滅菌并完全冷卻的基質(zhì)（沙、珍珠巖、營養(yǎng)土體積比為1 ∶1 ∶2）中。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同消毒方法對殺菌效果的影響

由表3可以看出，不同消毒劑、消毒時(shí)間對迎紅杜鵑外植體的殺菌效果有顯著差異。從接種后的迎紅杜鵑組培苗情況來看，最好消毒方法為A8處理，即0.25 g/L多菌靈浸泡 45 min，75%乙醇溶液消毒30 s，0.1%HgCl2消毒6min。該消毒方式能夠保證迎紅杜鵑外植體褐化率最低，感染率最低，成活率最高。對西洋杜鵑組培苗的成活率進(jìn)行極差分析，同樣可以得出最佳消毒方式是A8處理。

2.2 不同培養(yǎng)基配方對出芽誘導(dǎo)效果的影響

由表4可見，不同基本培養(yǎng)基和激素配比對莖段芽的誘導(dǎo)培養(yǎng)影響（出芽率）差異顯著。極差分析和方差分析可知，各因素對出芽率影響效果的大小依次為：培養(yǎng)基類型>ZT濃度>NAA濃度。3種基本培養(yǎng)基對出芽率的影響差異顯著，使用Read基本培養(yǎng)基的出芽率最高（B6處理）；ZT濃度在高水平時(shí)對迎紅杜鵑出芽有促進(jìn)作用；NAA濃度為0.1 mg/L時(shí)誘導(dǎo)出芽效果最佳。

3 結(jié)論

野生迎紅杜鵑外植體表面攜帶各種污染微生物，消毒較困難，僅靠提高消毒劑濃度和消毒時(shí)間，雖然在一定條件下能將細(xì)菌、真菌等污染微生物全部殺死，但同時(shí)會將植物外植體細(xì)胞殺死或損壞大部分外植體從而引起褐變，最終會導(dǎo)致外植體死亡。消毒時(shí)間過短又無法完全清除外植體上的真菌、細(xì)菌等。因此，如何在外植體污染率、成活率、褐變率間找到動態(tài)平衡點(diǎn)，選擇合適的消毒劑種類、濃度和消毒時(shí)間是關(guān)鍵。多菌靈是一種廣譜、低毒、內(nèi)吸性殺菌劑，雖然不能防止細(xì)菌污染，但對多種霉菌生長有強(qiáng)烈抑制作用，具有較好的防霉效果，它和HgCl2、乙醇溶液聯(lián)合組成的復(fù)合消毒劑的效果明顯好于單一使用某種消毒劑。本研究表明，先用0.25 g/L多菌靈浸泡45 min，然后用75%乙醇溶液消毒30 s，最后用0.1% HgCl2消毒6 min，是最好的迎紅杜鵑外植體消毒方式，該方式能保證較高的外植體成活率以及較低的褐化率、污染率。

迎紅杜鵑的最佳啟動培養(yǎng)基是Read+3 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA。迎紅杜鵑是一種對培養(yǎng)基滲透壓反應(yīng)敏感的植物，鹽分濃度低及NH+4/NO-3高的基本培養(yǎng)基對迎紅杜鵑的培養(yǎng)效果較好，如本研究使用的1/4 MS、Read、WPM。Read培養(yǎng)基減少了NH4NO3、KNO3用量，加入（NH4）2SO4使 NH+4 ∶NO-3為1 ∶1，同時(shí)去除碘化鉀（KI），將培養(yǎng)基pH值降至5，更適于耐寒落葉杜鵑的培養(yǎng)^[12]。高濃度的ZT能夠很好地刺激杜鵑組培苗誘導(dǎo)出芽，增殖系數(shù)高；但其濃度過高時(shí)，培養(yǎng)的試管苗細(xì)弱，容易形成玻璃苗。

為了獲得大量組培苗，須要對芽誘導(dǎo)培養(yǎng)后獲得的芽體進(jìn)行增殖培養(yǎng)。使用較高濃度的細(xì)胞分裂素和一定濃度的生長素能有效提高芽體的增殖速率，并獲得較高品質(zhì)的新芽，但此過程中必須控制好二者間的濃度關(guān)系。細(xì)胞分裂素濃度過高將會降低芽體質(zhì)量，從而抑制芽體的增殖效果。適合迎紅杜鵑增殖的培養(yǎng)基配方為Read+2 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA。

要較低的培養(yǎng)基濃度和蔗糖濃度；也可采用組培苗瓶外微條扦插生根的方法，不僅能夠迅速擴(kuò)大繁殖系數(shù)，而且能省去生根培養(yǎng)時(shí)間，提高商品化生產(chǎn)效率。

參考文獻(xiàn)：

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[2]劉茂成. 杜鵑的原種、園藝品種及科學(xué)施肥法[J]. 花卉，1998（3）：4.

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[10]張曉雅，孫紅梅，田穎輝. 杜鵑組織培養(yǎng)技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 北方園藝，2006（4）：76-77.

[11]張艷紅. 我國杜鵑花的繁育研究進(jìn)展[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2007，35（23）：7170-7171，7209.

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迎紅杜鵑的最佳啟動培養(yǎng)基是Read+3 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA。迎紅杜鵑是一種對培養(yǎng)基滲透壓反應(yīng)敏感的植物，鹽分濃度低及NH+4/NO-3高的基本培養(yǎng)基對迎紅杜鵑的培養(yǎng)效果較好，如本研究使用的1/4 MS、Read、WPM。Read培養(yǎng)基減少了NH4NO3、KNO3用量，加入（NH4）2SO4使 NH+4 ∶NO-3為1 ∶1，同時(shí)去除碘化鉀（KI），將培養(yǎng)基pH值降至5，更適于耐寒落葉杜鵑的培養(yǎng)^[12]。高濃度的ZT能夠很好地刺激杜鵑組培苗誘導(dǎo)出芽，增殖系數(shù)高；但其濃度過高時(shí)，培養(yǎng)的試管苗細(xì)弱，容易形成玻璃苗。

為了獲得大量組培苗，須要對芽誘導(dǎo)培養(yǎng)后獲得的芽體進(jìn)行增殖培養(yǎng)。使用較高濃度的細(xì)胞分裂素和一定濃度的生長素能有效提高芽體的增殖速率，并獲得較高品質(zhì)的新芽，但此過程中必須控制好二者間的濃度關(guān)系。細(xì)胞分裂素濃度過高將會降低芽體質(zhì)量，從而抑制芽體的增殖效果。適合迎紅杜鵑增殖的培養(yǎng)基配方為Read+2 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA。

要較低的培養(yǎng)基濃度和蔗糖濃度；也可采用組培苗瓶外微條扦插生根的方法，不僅能夠迅速擴(kuò)大繁殖系數(shù)，而且能省去生根培養(yǎng)時(shí)間，提高商品化生產(chǎn)效率。

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迎紅杜鵑的最佳啟動培養(yǎng)基是Read+3 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA。迎紅杜鵑是一種對培養(yǎng)基滲透壓反應(yīng)敏感的植物，鹽分濃度低及NH+4/NO-3高的基本培養(yǎng)基對迎紅杜鵑的培養(yǎng)效果較好，如本研究使用的1/4 MS、Read、WPM。Read培養(yǎng)基減少了NH4NO3、KNO3用量，加入（NH4）2SO4使 NH+4 ∶NO-3為1 ∶1，同時(shí)去除碘化鉀（KI），將培養(yǎng)基pH值降至5，更適于耐寒落葉杜鵑的培養(yǎng)^[12]。高濃度的ZT能夠很好地刺激杜鵑組培苗誘導(dǎo)出芽，增殖系數(shù)高；但其濃度過高時(shí)，培養(yǎng)的試管苗細(xì)弱，容易形成玻璃苗。

為了獲得大量組培苗，須要對芽誘導(dǎo)培養(yǎng)后獲得的芽體進(jìn)行增殖培養(yǎng)。使用較高濃度的細(xì)胞分裂素和一定濃度的生長素能有效提高芽體的增殖速率，并獲得較高品質(zhì)的新芽，但此過程中必須控制好二者間的濃度關(guān)系。細(xì)胞分裂素濃度過高將會降低芽體質(zhì)量，從而抑制芽體的增殖效果。適合迎紅杜鵑增殖的培養(yǎng)基配方為Read+2 mg/L ZT+0.1 mg/L NAA。

要較低的培養(yǎng)基濃度和蔗糖濃度；也可采用組培苗瓶外微條扦插生根的方法，不僅能夠迅速擴(kuò)大繁殖系數(shù)，而且能省去生根培養(yǎng)時(shí)間，提高商品化生產(chǎn)效率。

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