張 勉，李 超

(重慶市食品藥品檢驗(yàn)所，重慶 401121)

氟比洛芬酯注射液是以脂微球?yàn)樗幬镙d體的非甾體類鎮(zhèn)痛劑。藥物進(jìn)入體內(nèi)靶向分布到創(chuàng)傷及腫瘤部位后，氟比洛芬酯從脂微球中釋放出來，在羧基酯酶作用下迅速水解生成氟比洛芬，通過氟比洛芬抑制前列腺素的合成而發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。大豆油是制備乳劑的重要原輔料，其含量直接影響乳劑的成型質(zhì)量，在氟比洛芬酯注射液中大豆油作為氟比洛芬酯的載體，有利于氟比洛芬酯達(dá)到靶向部位，更好地吸收。但由于大豆油為長鏈甘油三酸酯，紫外特征不強(qiáng)，常規(guī)的紫外檢測(cè)器無法完成對(duì)其的測(cè)定。國內(nèi)僅有一個(gè)廠家生產(chǎn)該品種，現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[1]中未對(duì)大豆油進(jìn)行含量控制。筆者采用高效液相色譜法分離，利用蒸發(fā)光散射檢測(cè)器測(cè)定氟比洛芬酯注射液中大豆油的含量，有效地解決了大豆油在該注射劑中的檢測(cè)問題，方法準(zhǔn)確，操作簡便。

1 儀器與試藥

Waters e2695型高效液相色譜儀。大豆油對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)為100277－201103);大豆油原料(重慶藥友制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)為R1105067);氟比洛芬酯注射液(北京泰德制藥股份有限公司，批號(hào)分別為5091N，5012B，5022B);正己烷與異丙醇均為色譜純，冰醋酸為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

檢測(cè)器:Waters 2424型蒸發(fā)光檢測(cè)器(霧化氣:空氣，霧化壓力:35．0 psi，漂移管溫度:70℃);色譜柱:菲羅門 Luna Silica色譜柱(250 mm ×4．6 mm，5 μm);流動(dòng)相:正己烷 － 異丙醇 － 冰醋酸(99．4 ∶0．5 ∶0．1);流速:1．0 mL/min;柱溫:室溫。進(jìn)樣量:10 μL。配制大豆油與油酸的混合溶液，按擬訂方法測(cè)定，兩者能較好地分離，見圖1。

2．2 溶液制備

圖1 高效液相色譜圖

取大豆油對(duì)照品0．062 11 g，置25 mL容量瓶中，用正己烷－異丙醇(1∶1)的混合溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取 1．0，3．0，5．0 mL，分別置 10 mL 容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密量取樣品1 mL，置25 mL容量瓶中，用混合溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密取3 mL，置25mL容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，即得供試品溶液。

2．3 大豆油原料的標(biāo)定

取大豆油原料0．543 2 g，置100 mL容量瓶中，加混合溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5．0 mL，置50 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，依法測(cè)定，測(cè)得大豆油含量為 100．0% 。

2．4 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察:取大豆油原料0．853 6 g，置100 mL容量瓶中，加混合溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取1，2，4，5，6，8，10 mL，分別置50 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，依法測(cè)定，得回歸方程 Y=0．001 7 X+115．7(r=0．998)。結(jié)果表明，大豆油質(zhì)量濃度在 1．707～17．072 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。

精密度試驗(yàn):取同一質(zhì)量濃度對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果的 RSD為0．57%(n=6)，表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn):取樣品(批號(hào)為5091N)各1．0 mL，共6份，分別置25 mL容量瓶中，加混合溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取3．0 mL，置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，依法測(cè)定。結(jié)果樣品平均含量為10．5 g/mL，RSD為2．4%，表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn):取大豆油原料0．543 2 g，置100 mL容量瓶中，加混合溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品貯備液。取樣品(批號(hào)為5091N)各 1．0 mL，共9份，分別置25 mL容量瓶中，加混合溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，分別精密量取3．0 mL，置 50 mL 容量瓶中，分別加入對(duì)照品貯備液 2．0，2．5，3．0 mL，各3份，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，依法測(cè)定。結(jié)果見表1。

表1 大豆油加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

檢測(cè)限及定量限:以 S/N為3計(jì)算，大豆油的檢測(cè)限為0．050 7 μg。以 S/N 為 10 計(jì)算，大豆油的定量限為 0．169 μg。

專屬性試驗(yàn):取樣品1 mL，置錐形瓶中，加0．1 mol/L鹽酸溶液2 mL，加熱至沸，放冷，加0．1 mol/L氫氧化鈉溶液2 mL，加混合溶液稀釋至25 mL，搖勻，取3．0 mL，置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為酸破壞溶液。取樣品1 mL，置錐形瓶中，加0．1 mol/L氫氧化鈉溶液2 mL，加熱至沸，放冷，加0．1 mol/L鹽酸溶液2 mL，加混合溶液稀釋至25 mL，搖勻，取3．0 mL，置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為堿破壞溶液。取樣品1 mL，置錐形瓶中，加30%過氧化氫溶液2 mL，加熱至沸，放冷，加混合溶液稀釋至25 mL，搖勻，取3．0 mL，置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為氧化破壞溶液。取樣品1 mL，置錐形瓶中，加水2 mL，加熱至沸，放冷，加混合溶液稀釋至25 mL，搖勻，取3．0 mL，置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為高溫破壞溶液。取樣品置日光下放置48 h后，取1 mL置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，取3．0 mL，置25 mL容量瓶中，加混合溶液稀釋至刻度，搖勻，作為光破壞溶液。取上述破壞后的供試品溶液，按擬訂色譜條件分別注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，見圖3。可見，本品經(jīng)破壞后產(chǎn)生的降解產(chǎn)物均能與大豆油有效分離(分離度大于1．5)，表明上述色譜條件可用于大豆油含量的測(cè)定。

圖3 高效液相色譜圖

2．5 樣品含量測(cè)定

按擬訂方法測(cè)定3批氟比洛芬酯注射液中大豆油的含量。結(jié)果批號(hào)為5091N，5012B，5022B的大3批氟比洛芬注射液中豆油含量分別為 10．8，10．7，10．5 g/mL。

3 討論

參照脂肪乳注射液(C14－24)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[2]中大豆油含量測(cè)定項(xiàng)下方法，流動(dòng)相為正己烷 －異丙醇 －冰醋酸(98．9∶1∶0．1)，大豆油和油酸的分離較差，達(dá)不到要求。因此將流動(dòng)相調(diào)整為正己烷－異丙醇 － 冰醋酸(99．4 ∶0．5 ∶0．1)，大豆油和油酸的分離度大于 2。

參照脂肪乳注射液(C14－24)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)[2]中大豆油含量測(cè)定項(xiàng)下方法，在供試品溶液配制時(shí)先用正己烷－異丙醇(1∶1)的混合溶液溶解，再用流動(dòng)相稀釋，供試品溶液即發(fā)生乳渾。經(jīng)考察，在第二步仍用上述混合溶液稀釋，溶液澄清。因此試驗(yàn)中所用溶劑均為正己烷－異丙醇(1∶1)混合溶液。

在結(jié)果計(jì)算時(shí)，峰面積和質(zhì)量濃度計(jì)算的線性良好，所以未使用峰面積和質(zhì)量濃度的對(duì)數(shù)進(jìn)行計(jì)算。

[1]YBH15412004，國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)(試行)[S]．

[2]YBH13472008，國家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)[S]．