肝細(xì)胞肝癌超聲造影與血管生成的關(guān)系

艾迪拜·木合買提，熱沙來提·阿不都瓦衣特（新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院，新疆 烏魯木齊 830054）

血管生成是促進(jìn)肝細(xì)胞肝癌侵襲、生長以及轉(zhuǎn)移等的重要基礎(chǔ)，微血管密度（MVD）在很大程度上反應(yīng)了肝細(xì)胞肝癌組織新生成血管的情況，這也是臨床判斷腫瘤預(yù)后的重要指標(biāo)[1]。本研究分析了免疫組化法測得的MVD與超聲造影所得峰值強(qiáng)度（PI）之間的關(guān)系，旨在探討超聲造影征像與血管生成的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇2011年1月～2013年9月我院收治的肝細(xì)胞肝癌患者43例（51個(gè)病灶），男35例，女8例，年齡33～72歲，平均（43.4±2.5）歲。36例為1個(gè)病灶，6例為2個(gè)結(jié)節(jié)，1例為有3個(gè)結(jié)節(jié)，結(jié)節(jié)最大直徑在2.0～6.0 cm之間，平均（3.7±2.1）cm。

1.2 儀器和試劑：美國Acuson Sequoia 512型超聲診斷儀，探頭為4C-1型，配套CPS超聲造影成像軟件以及ACQ超聲造影定量分析軟件。采用意大利Bracco公司生產(chǎn)的Sono Vue造影劑，使用前加入生理鹽水5 ml溶解并振搖均勻，并抽取2.4 ml經(jīng)患者的肘部淺靜脈予以快速注射，然后在快速注射生理鹽水5 ml。羊抗鼠試劑盒以及鼠抗人CD34單克隆抗體均由北京中山生物科技有限公司提供。

1.3 方法

1.3.1 超聲造影：采用二維與彩超對肝臟以及病灶部位進(jìn)行掃查，仔細(xì)觀察并記錄病灶的位置、數(shù)目、大小、邊界、血供情況、內(nèi)部回聲等。啟動(dòng)CPS系統(tǒng)，常規(guī)注入造影劑，視患者的探頭與病灶的距離以及患者的胖瘦合理調(diào)節(jié)機(jī)械指數(shù)，實(shí)時(shí)監(jiān)測病灶區(qū)域以及周圍肝組織的回聲強(qiáng)度變化以及灌注過程，并將造影全程數(shù)據(jù)記錄存盤。結(jié)束造影后，以ACQ軟件進(jìn)行圖像分析。選擇動(dòng)脈期感興趣區(qū)，對強(qiáng)化最明顯的病灶部位以及同深度癌旁組織繪制造影時(shí)間—強(qiáng)度曲線，即可得出病灶部位以及癌旁組織的造影峰值強(qiáng)度（PI）。

1.3.2 免疫組化檢查：選取51個(gè)結(jié)節(jié)經(jīng)超聲造影顯示動(dòng)態(tài)增強(qiáng)的區(qū)域（ROI）標(biāo)本，采用蘇木素—伊紅進(jìn)行染色，以CD34染色以及MVD進(jìn)行測定。所有標(biāo)本均采用4%的福爾馬林進(jìn)行固定，并以石蠟包埋和固定。切片均以SP法進(jìn)行CD34染色，一抗?jié)舛瓤刂茷?:100。本組所有標(biāo)本均在相同的條件下進(jìn)行染色，均設(shè)置陽性以及陰性對照組，以抑制陽性HCC組織作為陽性對照，以PBS代替一抗進(jìn)行組織切片孵育，以此作為陰性對照組。在低倍鏡（×100）下仔細(xì)觀察并選擇微血管最豐富、腫瘤細(xì)胞浸潤區(qū)域，換為高倍鏡（×400）進(jìn)行觀測，并以染色最為清晰的區(qū)域，選取5個(gè)背景對照較好的視野較小微血管計(jì)數(shù)，取平均值計(jì)數(shù)，以此作為MVD。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：使用SPSS 18.0對各項(xiàng)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)、分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 病灶及癌旁組織超聲造影特征、PI及血管生成：本組51個(gè)病灶在動(dòng)脈期均表現(xiàn)為增強(qiáng)，且增強(qiáng)時(shí)間較周圍肝實(shí)質(zhì)更早，其中有46個(gè)病灶的造影劑退出時(shí)間較周圍肝組織明顯提前，呈現(xiàn)快進(jìn)快出的特征，造影時(shí)間與峰強(qiáng)度曲線上呈現(xiàn)早期快速增強(qiáng)以及峰值強(qiáng)度較高。另5個(gè)病灶的超聲造影顯示，在門靜脈期以及實(shí)質(zhì)期，患者的病灶內(nèi)部回聲似于周圍肝組織。經(jīng)免疫組化染色顯示，病灶內(nèi)部生成豐富微血管。病灶組織的PI以及MVD均顯著高于癌旁組織（P＜0.05），在病灶組織中，46例個(gè)“快進(jìn)快出”病灶的PI值與MVD略低于5個(gè)回聲似于周圍肝組織病灶，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見表1。

表1 病灶及癌旁組織超PI及MVD（）

表1 病灶及癌旁組織超PI及MVD（）

項(xiàng)目 病灶組織與癌旁組織不同病灶組織病灶組織（n=51） 癌旁組織（n=51） 快進(jìn)快出病灶（n=46） 回聲正常病灶（n=5）PI（dB） 135.18±28.15 72.92±19.21 134.25±26.14 145.66±30.19 MVD 43.45±12.21 17.15±9.16 42.09±12.11 47.58±13.25

2.2 PI與MVD間的關(guān)系：經(jīng)線性分析顯示，病灶與癌旁組織的PI與MVD之間呈現(xiàn)正相關(guān)的關(guān)系（r=0.782，P＜0.05）。見圖1。

3 討論

肝細(xì)胞肝癌是臨床常見的一種惡性腫瘤，具有易于轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)、預(yù)后不良以及死亡率較高等特點(diǎn)。近年來，隨著腫瘤學(xué)領(lǐng)域研究的深入，學(xué)者們提出了腫瘤生長“血管依賴說”，即腫瘤的生長過程中新生血管具有重要作用，對于肝細(xì)胞肝癌的臨床治療以及預(yù)后預(yù)測等均具有重要意義[2]。新生血管能夠?yàn)槟[瘤細(xì)胞的生長提供氧氣和營養(yǎng)，還可導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)增加，MVD能夠客觀準(zhǔn)確地反應(yīng)病灶組織的新生血管程度，這也是判斷臨床預(yù)后的重要指標(biāo)。但目前測量組織MVD的方法主要是取組織學(xué)標(biāo)本測定，操作繁瑣，具有創(chuàng)傷性，且其可重復(fù)性較差，難以在術(shù)前作出準(zhǔn)確評(píng)估，這在很大程度上限制了組織學(xué)MVD計(jì)算在臨床中的應(yīng)用[3]。因此，尋找一種無創(chuàng)、簡便快捷且能夠反復(fù)在活體上實(shí)施的MVD評(píng)價(jià)技術(shù)非常必要。

超聲造影技術(shù)是一種新型的影像學(xué)檢查技術(shù)，其利用造影劑進(jìn)入到組織微循環(huán)中，并以低機(jī)械指數(shù)進(jìn)行連續(xù)成像，可動(dòng)態(tài)、實(shí)時(shí)地監(jiān)測腫瘤組織中血液灌流的具體情況，能夠?qū)δ[瘤進(jìn)行定性診斷，并可為臨床提供間接性病理信息[4]。其定量定性超聲造影對于腫瘤血管生成的顯示主要表現(xiàn)為惡性腫瘤存在明顯強(qiáng)化以及豐富灌注。相比于常規(guī)超聲技術(shù)，超聲造影技術(shù)應(yīng)用超聲造影劑能夠更為敏感地顯示出病灶組織，提高臨床鑒別診斷的準(zhǔn)確性，并能夠更為清晰地顯示組織血流狀況以及灌注情況[5]。

本研究應(yīng)用Sono Vue超聲造影劑進(jìn)行超聲造影檢查，在動(dòng)脈期病灶均顯示為快速增強(qiáng)，對病灶組織以及癌旁組織感興趣區(qū)繪制時(shí)間-強(qiáng)度曲線，分析顯示，病灶組織造影劑達(dá)到所需時(shí)間以及達(dá)到PI時(shí)間均較癌旁組織明顯提前，PI值顯著提高。提示肝細(xì)胞肝癌的病灶組織主要為動(dòng)脈供血，且血流灌注較癌旁組織明顯更高。此外，經(jīng)病灶組織與癌旁組織MVD計(jì)算結(jié)果顯示，病灶組織的MVD顯著高于癌旁組織。經(jīng)相關(guān)性分析顯示，PI與MVD之間呈現(xiàn)正相關(guān)性，與相關(guān)研究報(bào)道一致。由此可見，肝細(xì)胞肝癌病灶組織的PI較癌旁組織更強(qiáng)，且與MVD水平密切相關(guān)，測量組織PI可推測肝癌的MVD水平，有效反應(yīng)肝癌組織新生血管情況。腫瘤的PI值越大，MVD就越大，也說明腫瘤組織的血流灌注較癌旁組織跟高。

圖1 PI與MVD關(guān)系（r=0.782）

總之，肝細(xì)胞肝癌患者的超聲造影PI與MVD之間具有顯著正相關(guān)性，這為臨床評(píng)價(jià)肝細(xì)胞肝癌血管生成情況具有重要意義，且可避免組織學(xué)所需組織標(biāo)本檢查，操作方便快捷且可重復(fù)性好，值得深入研究并應(yīng)用于臨床。

[1] 白 敏,杜聯(lián)芳,顧繼英,等.肝細(xì)胞肝癌超聲造影評(píng)估血管生成的初步研究[J].中國超聲醫(yī)學(xué)雜志,2012,28(3):251.

[2] 王曉東,梁群興,趙 萍,等.超聲造影和彩色多普勒超聲在原發(fā)性肝細(xì)胞肝癌診斷中的應(yīng)用[J].廣東醫(yī)學(xué),2013,34(12):1869.

[3] 任秀昀,焦 健,張 延,等.肝細(xì)胞肝癌的超聲造影參數(shù)成像分析研究[J].醫(yī)學(xué)影像學(xué)雜志,2012,22(7):1133.

[4] 白 敏,杜聯(lián)芳,張雪梅,等.肝細(xì)胞肝癌超聲造影與微血管密度的相關(guān)性研究[J].中華超聲影像學(xué)雜志,2010,19(3):223.

[5] 胡張春.肝癌超聲征像與血管生成的相關(guān)性研究[J].中華全科醫(yī)學(xué),2013,11(2):302.