新疆阿瓦提多脂鱗傘對不同碳氮比的利用能力*

劉 淼，林辰壹＊＊，阿依買木·沙吾提，劉玉芳，賈培松

(1.新疆農(nóng)業(yè)大學林學與園藝學院，新疆 烏魯木齊 830052;2.新疆農(nóng)業(yè)大學設(shè)施農(nóng)業(yè)研究所，新疆 烏魯木齊 830052;3.塔里木大學植物科學學院，新疆 阿拉爾 843300;4.新疆農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所，新疆 烏魯木齊 830091)

多脂鱗傘Phonliota adiposa(Fr.)Quél.的子實體色澤鮮艷呈金黃色，菌蓋、菌柄上布滿黃褐色鱗片，又稱作黃傘，富含蛋白質(zhì)、碳水化合物、維生素及多種礦物質(zhì)元素，可提神醒腦，并可預防、治療腫瘤和葡萄球菌、大腸桿菌、肺炎桿菌以及結(jié)核桿菌的感染。食之黏滑爽口，味道鮮美，風味獨特，是1種食藥兼優(yōu)且具有較高商品價值的珍稀食用菌[1－3]。研究證明，碳氮比含量直接影響菌絲體正常生長，影響食用菌子實體發(fā)生時間和產(chǎn)量[4，5]。新疆多脂鱗傘主要分布于新疆天山、阿勒泰山山區(qū)的河谷闊葉林中，烏魯木齊南山小渠子及精河河岸的楊、柳樹林也有分布[6]。因此，為了獲得最適合多脂鱗傘生長的碳氮比值，本文針對采摘于新疆阿瓦提縣野生多脂鱗傘進行不同碳氮比利用能力研究，為生理活性物質(zhì)代謝、分析與提取提供技術(shù)支撐，為新疆阿瓦提多脂鱗傘菌種生產(chǎn)及人工栽培提供理論基礎(chǔ)和技術(shù)指導。

1 材料與方法

1.1 野生多脂鱗傘的獲得與菌絲體活化

野生多脂鱗傘采自新疆阿瓦提縣 (39°31′N、79°45′E、海拔1 028 m)拜什艾日克鎮(zhèn)農(nóng)田防護林中柳樹的枯洞。經(jīng)多代分離獲得穩(wěn)定菌株多脂鱗傘LL－01，試驗菌株由新疆農(nóng)業(yè)科學院植物保護所提供。以PDA加富培養(yǎng)基為活化培養(yǎng)基，滅菌后趁熱倒平板，取大小為5 mm×5 mm菌種塊接種，25℃黑暗條件下菌絲體活化培養(yǎng)。

1.2 多脂鱗傘LL－01碳氮比優(yōu)化配方

準確稱量磷酸二氫鉀2 g、硫酸鎂1 g、VB10.05 g、瓊脂20 g，充分溶解后定容至1 000 mL，培養(yǎng)基為基本配方[7]。以本項目前期研究過程中獲得適宜的碳源 (可溶性淀粉)和氮源 (硝酸銨)為依據(jù)，設(shè)置 10∶1、15∶1、20∶1、25∶1、30∶1、35∶1、40∶1七種碳氮比，以不加可溶性淀粉、硝酸銨為對照CK;加入20 g可溶性淀粉，不加任何的氮源為CK1;以加入2 g硝酸銨，不加任何碳源為CK2。各配方調(diào)pH至7，滅菌和接種方法同1.1所述。

1.3 指標測定與數(shù)據(jù)處理

菌絲長勢:+++表示長勢濃密、++表示長勢一般、+表示長勢差稀疏、—表示萎縮、－表示不生長。

菌落形態(tài)特征:□表示老化斑點、◎表示菌絲干縮、¤表示菌絲松散，同時觀測菌絲生長圈、邊緣特征、菌絲爬壁、菌絲吐水、菌落形狀、中央隆起或倒伏、轉(zhuǎn)色、氣味和雜菌抑制線特點。

顯微特征觀察:在10倍×40倍Motic SFC－28顯微鏡下，觀測菌絲粗細、分支、形狀以及每視野下鎖狀聯(lián)合特征等。

每天觀測并記錄菌絲生長量[8]，統(tǒng)計并計算平均滿皿時間 (FT)，即菌絲體生長至培養(yǎng)皿直徑大小所需天數(shù) (d)、平均總生長量GT(mm)、平均生長速率SGT(mm·d－1)、最大日生長量Gmax(mm)及出現(xiàn)時間DGmax(d)，達到50%總生長量所需的平均生長天數(shù)G50(d)。

每個處理重復5次。25℃黑暗條件下恒溫培養(yǎng)7 d，每天同一時間觀測菌絲長勢。試驗數(shù)據(jù)用DPS 7.05進行差異顯著性分析，用平均值±標準差表示。

2 結(jié)果與分析

多脂鱗傘LL－01菌絲體在供試的7種以可溶性淀粉和硝酸銨為碳氮比試驗中，接種后第1天菌絲體恢復生長，菌絲體氣味正常且都有爬壁現(xiàn)象、菌絲成輻射狀生長、菌絲體污染率低、抗雜菌能力強。通過多脂鱗傘LL－01在供試的7種碳氮比中菌絲體長勢、生長圈、鎖狀聯(lián)合數(shù)量、生長速度的比較分析，多脂鱗傘LL－01對不同碳氮比種類的利用能力存在顯著 (p＜0.05)和極顯著 (p＜0.01)差異，具有碳氮比選擇性利用特征。結(jié)果見圖1、圖2、表1、表2。

表1 可溶性淀粉和硝酸銨為碳氮比條件下多脂鱗傘LL－01菌落形態(tài)特征

表2 可溶性淀粉和硝酸銨為碳氮比條件對多脂鱗傘LL－01菌絲生長的影響

由圖1、圖2、表1、表2可見，當C/N=30∶1時，菌絲長勢強、1 d～7 d內(nèi)菌絲體生長一直處于增長期，F(xiàn)T＜7 d，GT、SGT達到最大生長量，到達G50的時間為4 d～5 d。GT生長量是碳氮比10∶1和40∶1處理的109.89%和117.95%，Gmax出現(xiàn)時間比碳氮比為10∶1和40∶1處理滯后了1 d，是多脂鱗傘LL－01生長適宜的碳氮比。

當C/N=25∶1時，菌絲長勢稀疏、生長速度緩慢、生長邊緣不完整，F(xiàn)T＞7 d，GT分別是碳氮比30∶1處理、CK、CK1、CK2的 82.49%、146.12%、124.21%、124.16%。Gmax出現(xiàn)時間比碳氮比30∶1處理、CK分別滯后了2 d。菌絲長勢、GT、SGT隨著碳和氮的添加量而增大。這充分表明碳和氮添加量以及適宜的碳氮比濃度，對多脂鱗傘LL－01菌絲生長有著顯著影響。

3 討論與結(jié)論

碳氮比過高或過低都不利于菌絲生長。前人對采自吉林的野生多脂鱗傘馴化過程中認為，葡萄糖/蛋白胨為40∶1是菌絲體生長的適宜碳氮比[9]，本研究結(jié)果顯示，新疆阿瓦提多脂鱗傘菌絲在可溶性淀粉/硝酸銨=10∶1～40∶l的范圍內(nèi)均有生長現(xiàn)象，當C/N為30∶1時菌絲長勢強，菌絲生長量、生長速率均達到最大值，闡明阿瓦提多脂鱗傘對碳氮比要求有其特殊性，與北冬蟲夏草[10]、花臉香蘑[11]的碳氮比研究結(jié)果一致，說明與其它食用菌種類一樣，多脂鱗傘存在適宜的碳氮比需求和不同的利用能力。

本研究運用多脂鱗傘的最適碳源 (可溶性淀粉)和最適氮源 (硝酸銨)進行不同梯度的碳氮比試驗，與以葡萄糖為碳源、以硝酸鉀為氮源的經(jīng)典碳氮比配方研究相比較[12]，可溶性淀粉含碳量高于葡萄糖，硝酸銨的含氮量高于硝酸鉀，且銨鹽比硝酸鹽更易被食用菌利用[1]，說明以可溶性淀粉和硝酸銨為碳氮比的試驗能夠為多脂鱗傘提供更多的碳氮營養(yǎng)物質(zhì)。前人以最適碳源 (蔗糖)和最適氮源 (蛋白胨)進行了鮑魚菇的適宜碳氮比研究[13]，而以可溶性淀粉為碳源和以硝酸銨為氮源的碳氮比研究是多脂鱗傘適宜碳氮比研究的首次報道。

本研究證實，可溶性淀粉和硝酸鉀碳氮比為10∶1～40∶1之間均能顯著影響新疆阿瓦提多脂鱗傘菌絲體的生長，當C/N=30∶1，菌絲體表現(xiàn)出生長速度快、活力強、長勢整齊。多脂鱗傘表現(xiàn)出對不同濃度碳氮比利用速率和利用效率的差異。

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