桂毓　李雙躍　劉艷軍　楊靜慧　于俊生

摘 要：為了建立紫蘇草離體試管開花體系，本試驗(yàn)以紫蘇草種子無菌苗為外植體，通過對培養(yǎng)基中激素及營養(yǎng)水平的調(diào)整、采用低溫處理和PEG的使用，從中找到離體開花的最適條件。結(jié)果表明：植物激素影響紫蘇草試管花形成發(fā)育，采用MS附加6-BA 1.0 mg·L-1和IAA0.5 mg·L-1對于紫蘇草試管苗開花的誘導(dǎo)效率最高； 采用10 ℃低溫處理2 d對試管苗開花率有提高作用；培養(yǎng)基中營養(yǎng)水平不同對開花有影響，半量MS培養(yǎng)基利于試管開花；在培養(yǎng)基中加入10%PEG-6000可以提高開花率和開花質(zhì)量。

關(guān)健詞： 紫蘇草；PEG-6000；試管開花；培養(yǎng)基

中圖分類號：S636.9 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A DOI 編碼：10.3969/j.issn.1006-6500.2014.11.002

試管開花是利用組織培養(yǎng)技術(shù)使得組培植物在離體環(huán)境下開花的一種現(xiàn)象。離體試管開花一般不受季節(jié)變化的影響，可以控制植物在一定條件下隨時進(jìn)入開花期。目前有關(guān)組培材料離體開花的報道已經(jīng)很多，其中有一些是在進(jìn)行植物組織培養(yǎng)中偶爾發(fā)現(xiàn)的，有些是有目的誘導(dǎo)的[1-8]。本試驗(yàn)以紫蘇草試管苗為對象，尋找控制其離體開花的培養(yǎng)條件，主要目的是為研究其花期生理與調(diào)控奠定基礎(chǔ)，也為研究植物成花機(jī)制提供一個良好的試驗(yàn)平臺。同時也可以進(jìn)行紫蘇草試管花卉的開發(fā)，帶動相關(guān)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展[9-14]。

1 材料和方法

1.1 材 料

紫蘇草Perilla nankinensis種子購自天津市曹莊花卉市場。

1.2 紫蘇草無菌苗的制備

取紫蘇草的種子，從中挑選飽滿、無病蟲害的種子在超凈工作臺中進(jìn)行消毒處理。先用濃度為70%的乙醇將種子打濕30 s，倒掉酒精后，采用40%的安替富民浸泡消毒10 min，倒掉消毒液后用無菌水反復(fù)沖洗3～5次，每次洗10 min，然后將消毒好的種子播種在事先準(zhǔn)備好的1/2 MS培養(yǎng)基上進(jìn)行無菌苗的培養(yǎng)。具體培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為24 ℃，24 h光照，光照強(qiáng)度1 500～2 000 lx。

1.3 不同濃度的BA與IAA對紫蘇草試管開花的影響試驗(yàn)

當(dāng)紫蘇草試管苗長到3～5 cm時，用剪刀在超凈臺中剪下根以上部位，然后將其接種到含有不同濃度的BA與IAA的MS培養(yǎng)基上，每種培養(yǎng)基中都含有30 g·L-1的蔗糖和6.8 g·L-1瓊脂粉，pH值調(diào)到5.8. 具體培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為24 ℃，24 h光照，光照強(qiáng)度2 000 lx。在培養(yǎng)期間觀察植株生長情況并隨時進(jìn)行試驗(yàn)記錄，在培養(yǎng)70 d時對每個處理進(jìn)行開花率的統(tǒng)計(jì)。

1.4 低溫的處理

切取無菌苗接于以MS為基本培養(yǎng)基，加入相同的1.0 mg·L-1 6-BA和IAA0.5 mg·L-1激素，并添加7.0 g·L-1瓊脂粉和30 g·L-1的蔗糖，在10 ℃和15 ℃低溫下分別處理1，2，3 d后，再進(jìn)行開花誘導(dǎo)，每天光照24 h，光照強(qiáng)度2 000 lx。在培養(yǎng)期間觀察植株生長情況并隨時進(jìn)行試驗(yàn)記錄，在培養(yǎng)70 d時對每個處理進(jìn)行開花率的統(tǒng)計(jì)。

1.5 培養(yǎng)基中無機(jī)鹽的含量對紫蘇草試管開花的影響試驗(yàn)

將用于紫蘇草試管開花的MS培養(yǎng)基中無機(jī)鹽含量分別設(shè)成1，1/2，1/4和1/8，并在培養(yǎng)基中添加相同的1.0 mg·L-1 6-BA和IAA0.5 mg·L-1激素和30 g·L-1的蔗糖、6.8 g·L-1瓊脂粉，pH值調(diào)到5.8，每個處理50株。培養(yǎng)溫度為25 ℃，每天光照24 h，光照強(qiáng)度2 000 lx。70 d左右統(tǒng)計(jì)開花率。

1.6 PEG-6000的處理

采用1/2 MS為基本培養(yǎng)基，其中添加相同的1.0 mg·L-1 6-BA和IAA0.5 mg·L-1激素和30 g·L-1的蔗糖、6.8 g·L-1瓊脂粉，pH值調(diào)到5.8，并在上述培養(yǎng)基中分別加入濃度為0%，5%， 10%， 15%的PEG-6000， 將紫蘇草的無菌苗接種到上面進(jìn)行離體開花的誘導(dǎo)。具體培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為24 ℃，24 h光照，光照強(qiáng)度2 000 lx。在培養(yǎng)期間觀察植株生長情況并隨時進(jìn)行試驗(yàn)記錄，在培養(yǎng)70 d時對每個處理進(jìn)行開花率的統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度的BA與IAA對紫蘇草試管開花的影響

紫蘇草試管苗在不添加任何激素的培養(yǎng)基處理中雖然能夠正常生長但都沒有開花現(xiàn)象，說明激素是紫蘇草開花的必須條件。但在1.5 mg·L-1 6-BA+0.5 mg·L-1 IAA與0 mg·L-1 6-BA+1.0 mg·L-1 IAA的處理中也沒有出現(xiàn)開花現(xiàn)象，這說明紫蘇草必須在適合的分裂素與生長素下才能開花。從表1可以看出，在1.0 mg·L-1 6-BA +1.0 mg·L-1 IAA組合培養(yǎng)基上誘導(dǎo)試管開花率最高，達(dá)到62%。但在1.0 mg·L-1 6-BA+ 0.5 mg·L-1 IAA組合培養(yǎng)基上誘導(dǎo)試管開花率雖然較低，但在較短時間內(nèi)即可實(shí)現(xiàn)正常開花，IAA雖然能促進(jìn)試管苗的開花，但會拖延開花時間，分析其原因可能是由于較高濃度的IAA會誘導(dǎo)植株過早生根，從而消耗植株養(yǎng)分，降低開花的速度，導(dǎo)致開花延后，因此在實(shí)際生產(chǎn)中應(yīng)選定適合的IAA濃度。在本試驗(yàn)中，1.0 mg·L-1 6-BA+ 0.5 mg·L-1 IAA組合培養(yǎng)基雖然也產(chǎn)生過早生根現(xiàn)象，但在40 d左右即可達(dá)到較高的開花率，因此確定為最適合誘導(dǎo)開花的濃度。

2.2 低溫處理對紫蘇草試管開花的影響

適合的低溫處理能夠提高紫蘇草試管開花率，從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，10 ℃處理的效果明顯好于15 ℃處理，15 ℃處理的開花率還略低于正常培養(yǎng)的數(shù)值，分析其原因，說明10 ℃處理對植株的生理產(chǎn)生了一定的影響，從而誘發(fā)了植株成花機(jī)制的運(yùn)行；從低溫處理時間上看，在處理2 d的效果最好，過短或過長都不理想，時間短達(dá)不到低溫處理的目的，時間過長則造成對植物的傷害，影響植株正常生長。因此在10 ℃處理2 d的情況下，紫蘇草試管開花的效果最好。

2.3 培養(yǎng)基中無機(jī)鹽的含量對紫蘇草試管開花的影響

培養(yǎng)基中無機(jī)鹽的含量對植物的生長可以起到兩方面的影響，一是滲透壓的調(diào)節(jié)，二是對植物營養(yǎng)的影響。從表3的數(shù)據(jù)可以看出，其對紫蘇草離體開花也有影響。從開花率來看，1/2 MS處理獲得的開花率最高，而MS最低。說明低滲透壓利于試管開花，但過低則開花率下降，分析原因可能是過低滲透壓的培養(yǎng)基營養(yǎng)不足，不能很好地滿足植物開花需要，因此，應(yīng)根據(jù)具體情況調(diào)整培養(yǎng)基的滲透壓，如組培苗健壯，營養(yǎng)充足時可進(jìn)一步降低無機(jī)鹽用量，從而提高試管開花率。

2.4 PEG-6000對紫蘇草試管開花的影響

PEG-6000能夠提高紫蘇草試管開花率，幾乎每個處理都能達(dá)到80%以上。從開花質(zhì)量來看，在培養(yǎng)基中加入PEG-6000后，植株開始生長健壯，花色鮮艷，但隨著培養(yǎng)時間的延長，20 d左右植株生長開始出現(xiàn)不正常，一是生長緩慢，并有個別植株出現(xiàn)萎蔫現(xiàn)象，尤其在較高濃度PEG-6000處理的植株表現(xiàn)突出，分析原因可能是植株在長時間高滲透壓作用下出現(xiàn)了生理干旱現(xiàn)象，因此在選擇采用PEG-6000來提高植物試管開花效率時，一定要選擇好使用濃度和正確的處理時間，否則會導(dǎo)致培養(yǎng)的失敗。綜上所述，在紫蘇草進(jìn)行試管開花誘導(dǎo)中應(yīng)采用10%PEG-6000處理，時間為20 d的效果最好。

3 討 論

3.1 細(xì)胞分裂素對植物離體開花的影響

在本試驗(yàn)中，采用植物細(xì)胞分裂素6-BA來進(jìn)行紫蘇草的試管開花誘導(dǎo)，試驗(yàn)結(jié)果顯示，采用6-BA進(jìn)行誘導(dǎo)收效顯著，說明6-BA對紫蘇開花有促進(jìn)作用，因?yàn)橹参镌谶M(jìn)行花芽分化時，細(xì)胞分裂素是必不可少的，而6-BA的使用正好補(bǔ)充了其自身激素合成的不足；另外在本試驗(yàn)中，筆者還發(fā)現(xiàn)在配合使用一定量的生長素時則更能使開花效率大大提高，這也進(jìn)一步說明植物在進(jìn)行分化時，生長素與分裂素在適當(dāng)?shù)呐浔认虏拍馨l(fā)揮作用。

3.2 低溫對植物試管開花的影響

在本試驗(yàn)中，通過采用低溫處理來提高紫蘇草試管開花的效率，試驗(yàn)結(jié)果顯示，適當(dāng)?shù)牡蜏赜欣谠嚬荛_花。植物在離體環(huán)境下一般生長會受到嚴(yán)重的影響，最為明顯的是對植物生長周期的影響，在自然條件下，植物開花往往要經(jīng)歷一個低溫過程，在多年生植物上表現(xiàn)尤為明顯，如一些植物的花芽分化需要低溫進(jìn)行春化作用，在一些草本植物中低溫也能促進(jìn)植株盡早進(jìn)入生殖生長階段，因此，在離體培養(yǎng)條件下，對培養(yǎng)植物進(jìn)行一定時間的低溫處理也能促進(jìn)其成花機(jī)制的運(yùn)行[15-16]。雖然如此，也并不能說明所有植物都適合低溫處理，另外，處理時間及溫度一定要反復(fù)試驗(yàn)，以找到適合的條件，否則不但不能促進(jìn)植株開花，還會使植株的正常生長受到影響。

3.3 PEG-6000處理對植物試管開花的影響

在本試驗(yàn)中，通過采用PEG-6000處理來提高紫蘇草試管開花的效率，試驗(yàn)結(jié)果顯示，適當(dāng)濃度PEG-6000處理有利于試管開花。通過在培養(yǎng)基中加入滲透壓調(diào)節(jié)物質(zhì)PEG-6000，人為造成培養(yǎng)植物的生理干旱。在自然環(huán)境中，干旱可以誘發(fā)植物提早開花，尤其一些一年生植物，因此在組培中通過模擬自然干旱，在培養(yǎng)基中加入PEG-6000，目的是促使植株盡早進(jìn)入開花階段。在試驗(yàn)中可以看到，適合濃度的PEG-6000處理有利于植株的成花，但濃度過高，培養(yǎng)時間過長都不利于試管開花培養(yǎng)，因此在實(shí)際應(yīng)用時應(yīng)慎用此處理，必要時，則進(jìn)行一段干旱處理后，再轉(zhuǎn)到正常培養(yǎng)基上進(jìn)行恢復(fù)，否則會在植株誘導(dǎo)開花后出現(xiàn)植物生長停滯，甚至死亡。

4 結(jié) 論

通過對紫蘇草試管開花的相關(guān)因素的試驗(yàn)研究，將理想的紫蘇草試管開花的條件及方法總結(jié)如下。

（1）取紫蘇草的種子用濃度為70%的乙醇將種子打濕30 s，采用40%的安替富民浸泡消毒10 min，然后將消毒好的種子播種在事先準(zhǔn)備好的1/2 MS培養(yǎng)基上進(jìn)行無菌苗的培養(yǎng)。具體培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為24 ℃，24 h光照，光照強(qiáng)度1 500～2 000 lx。

（2）切取上述培養(yǎng)的紫蘇草無菌苗接于以1/2 MS為基本培養(yǎng)基，添加7.0 g·L-1瓊脂粉和30 g·L-1的蔗糖，另外加入兩種植物激素（6-BA濃度設(shè)置為1.0 mg·L-1，IAA為0.5 mg·L-1），再附加PEG-6000（使用濃度為10%），先在10 ℃下培養(yǎng)2 d后，再在24 ℃的培養(yǎng)條件下，每天光照24 h，光照強(qiáng)度2 000 lx 進(jìn)行開花培養(yǎng)，70 d左右時間可以獲得100%的開花率。

參考文獻(xiàn)：

[1] 趙大中，雍偉東，種康，等.高等植物開花研究現(xiàn)狀簡述[J].植物學(xué)通報，1999，16（2）：157-162.

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2.3 培養(yǎng)基中無機(jī)鹽的含量對紫蘇草試管開花的影響

培養(yǎng)基中無機(jī)鹽的含量對植物的生長可以起到兩方面的影響，一是滲透壓的調(diào)節(jié)，二是對植物營養(yǎng)的影響。從表3的數(shù)據(jù)可以看出，其對紫蘇草離體開花也有影響。從開花率來看，1/2 MS處理獲得的開花率最高，而MS最低。說明低滲透壓利于試管開花，但過低則開花率下降，分析原因可能是過低滲透壓的培養(yǎng)基營養(yǎng)不足，不能很好地滿足植物開花需要，因此，應(yīng)根據(jù)具體情況調(diào)整培養(yǎng)基的滲透壓，如組培苗健壯，營養(yǎng)充足時可進(jìn)一步降低無機(jī)鹽用量，從而提高試管開花率。

2.4 PEG-6000對紫蘇草試管開花的影響

PEG-6000能夠提高紫蘇草試管開花率，幾乎每個處理都能達(dá)到80%以上。從開花質(zhì)量來看，在培養(yǎng)基中加入PEG-6000后，植株開始生長健壯，花色鮮艷，但隨著培養(yǎng)時間的延長，20 d左右植株生長開始出現(xiàn)不正常，一是生長緩慢，并有個別植株出現(xiàn)萎蔫現(xiàn)象，尤其在較高濃度PEG-6000處理的植株表現(xiàn)突出，分析原因可能是植株在長時間高滲透壓作用下出現(xiàn)了生理干旱現(xiàn)象，因此在選擇采用PEG-6000來提高植物試管開花效率時，一定要選擇好使用濃度和正確的處理時間，否則會導(dǎo)致培養(yǎng)的失敗。綜上所述，在紫蘇草進(jìn)行試管開花誘導(dǎo)中應(yīng)采用10%PEG-6000處理，時間為20 d的效果最好。

3 討 論

3.1 細(xì)胞分裂素對植物離體開花的影響

在本試驗(yàn)中，采用植物細(xì)胞分裂素6-BA來進(jìn)行紫蘇草的試管開花誘導(dǎo)，試驗(yàn)結(jié)果顯示，采用6-BA進(jìn)行誘導(dǎo)收效顯著，說明6-BA對紫蘇開花有促進(jìn)作用，因?yàn)橹参镌谶M(jìn)行花芽分化時，細(xì)胞分裂素是必不可少的，而6-BA的使用正好補(bǔ)充了其自身激素合成的不足；另外在本試驗(yàn)中，筆者還發(fā)現(xiàn)在配合使用一定量的生長素時則更能使開花效率大大提高，這也進(jìn)一步說明植物在進(jìn)行分化時，生長素與分裂素在適當(dāng)?shù)呐浔认虏拍馨l(fā)揮作用。

3.2 低溫對植物試管開花的影響

在本試驗(yàn)中，通過采用低溫處理來提高紫蘇草試管開花的效率，試驗(yàn)結(jié)果顯示，適當(dāng)?shù)牡蜏赜欣谠嚬荛_花。植物在離體環(huán)境下一般生長會受到嚴(yán)重的影響，最為明顯的是對植物生長周期的影響，在自然條件下，植物開花往往要經(jīng)歷一個低溫過程，在多年生植物上表現(xiàn)尤為明顯，如一些植物的花芽分化需要低溫進(jìn)行春化作用，在一些草本植物中低溫也能促進(jìn)植株盡早進(jìn)入生殖生長階段，因此，在離體培養(yǎng)條件下，對培養(yǎng)植物進(jìn)行一定時間的低溫處理也能促進(jìn)其成花機(jī)制的運(yùn)行[15-16]。雖然如此，也并不能說明所有植物都適合低溫處理，另外，處理時間及溫度一定要反復(fù)試驗(yàn)，以找到適合的條件，否則不但不能促進(jìn)植株開花，還會使植株的正常生長受到影響。

3.3 PEG-6000處理對植物試管開花的影響

在本試驗(yàn)中，通過采用PEG-6000處理來提高紫蘇草試管開花的效率，試驗(yàn)結(jié)果顯示，適當(dāng)濃度PEG-6000處理有利于試管開花。通過在培養(yǎng)基中加入滲透壓調(diào)節(jié)物質(zhì)PEG-6000，人為造成培養(yǎng)植物的生理干旱。在自然環(huán)境中，干旱可以誘發(fā)植物提早開花，尤其一些一年生植物，因此在組培中通過模擬自然干旱，在培養(yǎng)基中加入PEG-6000，目的是促使植株盡早進(jìn)入開花階段。在試驗(yàn)中可以看到，適合濃度的PEG-6000處理有利于植株的成花，但濃度過高，培養(yǎng)時間過長都不利于試管開花培養(yǎng)，因此在實(shí)際應(yīng)用時應(yīng)慎用此處理，必要時，則進(jìn)行一段干旱處理后，再轉(zhuǎn)到正常培養(yǎng)基上進(jìn)行恢復(fù)，否則會在植株誘導(dǎo)開花后出現(xiàn)植物生長停滯，甚至死亡。

4 結(jié) 論

通過對紫蘇草試管開花的相關(guān)因素的試驗(yàn)研究，將理想的紫蘇草試管開花的條件及方法總結(jié)如下。

（1）取紫蘇草的種子用濃度為70%的乙醇將種子打濕30 s，采用40%的安替富民浸泡消毒10 min，然后將消毒好的種子播種在事先準(zhǔn)備好的1/2 MS培養(yǎng)基上進(jìn)行無菌苗的培養(yǎng)。具體培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為24 ℃，24 h光照，光照強(qiáng)度1 500～2 000 lx。

（2）切取上述培養(yǎng)的紫蘇草無菌苗接于以1/2 MS為基本培養(yǎng)基，添加7.0 g·L-1瓊脂粉和30 g·L-1的蔗糖，另外加入兩種植物激素（6-BA濃度設(shè)置為1.0 mg·L-1，IAA為0.5 mg·L-1），再附加PEG-6000（使用濃度為10%），先在10 ℃下培養(yǎng)2 d后，再在24 ℃的培養(yǎng)條件下，每天光照24 h，光照強(qiáng)度2 000 lx 進(jìn)行開花培養(yǎng)，70 d左右時間可以獲得100%的開花率。

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2.3 培養(yǎng)基中無機(jī)鹽的含量對紫蘇草試管開花的影響

培養(yǎng)基中無機(jī)鹽的含量對植物的生長可以起到兩方面的影響，一是滲透壓的調(diào)節(jié)，二是對植物營養(yǎng)的影響。從表3的數(shù)據(jù)可以看出，其對紫蘇草離體開花也有影響。從開花率來看，1/2 MS處理獲得的開花率最高，而MS最低。說明低滲透壓利于試管開花，但過低則開花率下降，分析原因可能是過低滲透壓的培養(yǎng)基營養(yǎng)不足，不能很好地滿足植物開花需要，因此，應(yīng)根據(jù)具體情況調(diào)整培養(yǎng)基的滲透壓，如組培苗健壯，營養(yǎng)充足時可進(jìn)一步降低無機(jī)鹽用量，從而提高試管開花率。

2.4 PEG-6000對紫蘇草試管開花的影響

PEG-6000能夠提高紫蘇草試管開花率，幾乎每個處理都能達(dá)到80%以上。從開花質(zhì)量來看，在培養(yǎng)基中加入PEG-6000后，植株開始生長健壯，花色鮮艷，但隨著培養(yǎng)時間的延長，20 d左右植株生長開始出現(xiàn)不正常，一是生長緩慢，并有個別植株出現(xiàn)萎蔫現(xiàn)象，尤其在較高濃度PEG-6000處理的植株表現(xiàn)突出，分析原因可能是植株在長時間高滲透壓作用下出現(xiàn)了生理干旱現(xiàn)象，因此在選擇采用PEG-6000來提高植物試管開花效率時，一定要選擇好使用濃度和正確的處理時間，否則會導(dǎo)致培養(yǎng)的失敗。綜上所述，在紫蘇草進(jìn)行試管開花誘導(dǎo)中應(yīng)采用10%PEG-6000處理，時間為20 d的效果最好。

3 討 論

3.1 細(xì)胞分裂素對植物離體開花的影響

在本試驗(yàn)中，采用植物細(xì)胞分裂素6-BA來進(jìn)行紫蘇草的試管開花誘導(dǎo)，試驗(yàn)結(jié)果顯示，采用6-BA進(jìn)行誘導(dǎo)收效顯著，說明6-BA對紫蘇開花有促進(jìn)作用，因?yàn)橹参镌谶M(jìn)行花芽分化時，細(xì)胞分裂素是必不可少的，而6-BA的使用正好補(bǔ)充了其自身激素合成的不足；另外在本試驗(yàn)中，筆者還發(fā)現(xiàn)在配合使用一定量的生長素時則更能使開花效率大大提高，這也進(jìn)一步說明植物在進(jìn)行分化時，生長素與分裂素在適當(dāng)?shù)呐浔认虏拍馨l(fā)揮作用。

3.2 低溫對植物試管開花的影響

在本試驗(yàn)中，通過采用低溫處理來提高紫蘇草試管開花的效率，試驗(yàn)結(jié)果顯示，適當(dāng)?shù)牡蜏赜欣谠嚬荛_花。植物在離體環(huán)境下一般生長會受到嚴(yán)重的影響，最為明顯的是對植物生長周期的影響，在自然條件下，植物開花往往要經(jīng)歷一個低溫過程，在多年生植物上表現(xiàn)尤為明顯，如一些植物的花芽分化需要低溫進(jìn)行春化作用，在一些草本植物中低溫也能促進(jìn)植株盡早進(jìn)入生殖生長階段，因此，在離體培養(yǎng)條件下，對培養(yǎng)植物進(jìn)行一定時間的低溫處理也能促進(jìn)其成花機(jī)制的運(yùn)行[15-16]。雖然如此，也并不能說明所有植物都適合低溫處理，另外，處理時間及溫度一定要反復(fù)試驗(yàn)，以找到適合的條件，否則不但不能促進(jìn)植株開花，還會使植株的正常生長受到影響。

3.3 PEG-6000處理對植物試管開花的影響

在本試驗(yàn)中，通過采用PEG-6000處理來提高紫蘇草試管開花的效率，試驗(yàn)結(jié)果顯示，適當(dāng)濃度PEG-6000處理有利于試管開花。通過在培養(yǎng)基中加入滲透壓調(diào)節(jié)物質(zhì)PEG-6000，人為造成培養(yǎng)植物的生理干旱。在自然環(huán)境中，干旱可以誘發(fā)植物提早開花，尤其一些一年生植物，因此在組培中通過模擬自然干旱，在培養(yǎng)基中加入PEG-6000，目的是促使植株盡早進(jìn)入開花階段。在試驗(yàn)中可以看到，適合濃度的PEG-6000處理有利于植株的成花，但濃度過高，培養(yǎng)時間過長都不利于試管開花培養(yǎng)，因此在實(shí)際應(yīng)用時應(yīng)慎用此處理，必要時，則進(jìn)行一段干旱處理后，再轉(zhuǎn)到正常培養(yǎng)基上進(jìn)行恢復(fù)，否則會在植株誘導(dǎo)開花后出現(xiàn)植物生長停滯，甚至死亡。

4 結(jié) 論

通過對紫蘇草試管開花的相關(guān)因素的試驗(yàn)研究，將理想的紫蘇草試管開花的條件及方法總結(jié)如下。

（1）取紫蘇草的種子用濃度為70%的乙醇將種子打濕30 s，采用40%的安替富民浸泡消毒10 min，然后將消毒好的種子播種在事先準(zhǔn)備好的1/2 MS培養(yǎng)基上進(jìn)行無菌苗的培養(yǎng)。具體培養(yǎng)條件為：培養(yǎng)溫度為24 ℃，24 h光照，光照強(qiáng)度1 500～2 000 lx。

（2）切取上述培養(yǎng)的紫蘇草無菌苗接于以1/2 MS為基本培養(yǎng)基，添加7.0 g·L-1瓊脂粉和30 g·L-1的蔗糖，另外加入兩種植物激素（6-BA濃度設(shè)置為1.0 mg·L-1，IAA為0.5 mg·L-1），再附加PEG-6000（使用濃度為10%），先在10 ℃下培養(yǎng)2 d后，再在24 ℃的培養(yǎng)條件下，每天光照24 h，光照強(qiáng)度2 000 lx 進(jìn)行開花培養(yǎng)，70 d左右時間可以獲得100%的開花率。

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