李成林+張琳+洪金鑫等

[摘要] 目的 創(chuàng)新性地提出一種可高靈敏、高選擇性定量檢測(cè)中藥材中黃芪甲苷的新方法。 方法 將氨基苯硼酸共價(jià)吸附到多孔硅膠中，制備得到苯硼酸功能化的分子印跡材料。該印跡材料中的雙羥基基團(tuán)能與黃芪甲苷分子結(jié)構(gòu)中的雙羥基發(fā)生特異性識(shí)別。采用紫外分光光度法為檢測(cè)手段，以茜素紅（ARS）為光度指示劑，利用ARS與黃芪甲苷之間的雙羥基競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，觀察加入不同濃度的黃芪甲苷后所引起可見(jiàn)光區(qū)吸光度的變化，達(dá)到高靈敏定量分析黃芪甲苷的目的。 結(jié)果 在510 nm處，溶液吸光度響應(yīng)值的變化與黃芪甲苷的濃度在1×10-6～6.4×10-4 mol/L內(nèi)呈現(xiàn)良好的線(xiàn)性關(guān)系，線(xiàn)性回歸系數(shù)為0.9929，檢出限為0.3×10-6 mol/L。 結(jié)論 本方法結(jié)果可信，重復(fù)性較好，可用于中藥材中黃芪甲苷的定量分析。

[關(guān)鍵詞] 黃芪甲苷；茜素紅；競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)；紫外分光光度法

[中圖分類(lèi)號(hào)] R286.0 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721（2014）11（c）-0004-04

[Abstract] Objective To establish a new strategy for the sensitive and specific determination in Chinese medicinal herbs of astragaloside Ⅳ. Methods Molecular imprinting material phenylboronic acid functionalized was prepared by the adsorption of the amino phenylboronic acid covalently to porous silica gel.Specific recognition was produced between double hydroxyl groups in molecular imprinting material phenylboronic acid functionalized and two hydroxyl groups in the molecular structure of astragaloside Ⅳ.UV spectrophotometry was adopted as the mean of detection.ARS was adopted as an indicator for the photometric.The change of visible region added to different concentrations of astragaloside Ⅳ was observed to achieve objective of the high sensitive and quantitative analysis of astragaloside Ⅳ through the double hydroxyl competitive reaction between ARS and astragaloside Ⅳ. Results Under 510 nm，the absorbance displayed a linear relationship toward astragaloside Ⅳ in the concentration range from 1.0×10-6 to 6.4×10-4 mol/L with the linear regression coefficient of 0.9929 and the detection limit of 0.3×10-6 mol/L. Conclusion This method result is reliable.It has good reproducibility，can be used for quantitative analysis in Chinese medicinal herbs of astragaloside Ⅳ.

[Key words] Astragaloside Ⅳ；Alizarin Red S；Competitive reaction；UV-vis

在中國(guó)藥典中，黃芪藥材及含黃芪的復(fù)方中成藥一般都需要對(duì)黃芪甲苷的含量進(jìn)行測(cè)定。目前測(cè)定方法多為薄層掃描法[1]，香草醛硫酸比色法[2]以及高效液相色譜法[3-4]。前兩種方法操作繁瑣，背景干擾多，誤差較大，且后者空白吸收值高，受時(shí)間因素干擾較大；在高效液相色譜法測(cè)定中，黃芪甲苷分子結(jié)構(gòu)中只含有一種活性基團(tuán)——羥基，所以很難將其與黃芪中其他含有相同活性基團(tuán)，如葡萄糖、蔗糖、芒柄花黃素等碳水化合物分離，因此，迫切需要開(kāi)發(fā)一種能特異性檢出黃芪甲苷的新方法。

分子印跡技術(shù)因具有預(yù)定性、識(shí)別性、實(shí)用性三大特性，在中藥活性成分的分離和純化中發(fā)揮重要作用[5]。如張玉奎課題組將非瑟酮分子印跡聚合物作為固相萃取吸附劑，成功地對(duì)非瑟酮及其相似物槲皮素進(jìn)行分離[6]。由于硼酸結(jié)構(gòu)中的鄰二羥基基團(tuán)能選擇性識(shí)別多糖分子，可與包括糖在內(nèi)的1，2-或1，3-二羥基化合物以較高的結(jié)合效率可逆結(jié)合，從而形成穩(wěn)定的酯類(lèi)化合物[7-8]，因而近年來(lái)被廣泛應(yīng)用于多糖化合物的檢測(cè)。

基于上述原理，本文創(chuàng)新性地提出一種可高靈敏、高選擇性地定量檢測(cè)中藥材中黃芪甲苷的新方法。筆者首先將氨基苯硼酸共價(jià)結(jié)合到多孔的硅膠結(jié)構(gòu)中，并以黃芪甲苷為模板分子，制備了苯硼酸功能化的黃芪甲苷分子印跡材料；同時(shí)利用黃芪甲苷與茜素紅（ARS）和氨基苯硼酸之間的競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，建立能精確識(shí)別黃芪甲苷并高靈敏檢出的新方法。

1 材料與方法

1.1 試劑

實(shí)驗(yàn)中所有試劑均為分析純。氨基苯硼酸、ARS、黃芪甲苷均購(gòu)自上海Sigma試劑公司。PBS溶液由126.7 mmol/L氯化鈉、2.7 mmol/L氯化鉀、8.72 mmol/L磷酸氫二鈉、1.41 mmol/L磷酸二氫鈉配制而成，用濃鹽酸調(diào)節(jié)至不同pH。

1.2 儀器

紫外分光光度計(jì)（UV-2450，島津，日本），超聲波清洗器（KQ218，昆山，江蘇），離心機(jī)（TG20，湖南凱達(dá)）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)原理 本實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)機(jī)制如圖1所示。游離的ARS在510 nm處會(huì)產(chǎn)生明顯的紫外吸收峰。實(shí)驗(yàn)中，將制備的苯硼酸功能化的介孔硅印跡材料浸于ARS溶液中，此時(shí)ARS中的鄰二醇結(jié)構(gòu)能與苯硼酸發(fā)生共價(jià)結(jié)合作用，從而連接到印跡材料的表面，溶液中游離的ARS濃度降低，吸光值下降；當(dāng)黃芪甲苷定量加入到上述混合液之后，由于黃芪甲苷具備與ARS相似的鄰二醇結(jié)構(gòu)，兩者會(huì)發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，從而與表面ARS競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合苯硼酸，相應(yīng)地表現(xiàn)為溶液中ARS濃度和吸光度增加。利用黃芪甲苷加入前后所引起吸光度的變化，達(dá)到間接檢測(cè)黃芪甲苷的目的。

1.3.2 氨基苯硼酸功能化硅膠印跡材料的制備 該復(fù)合材料由華東師范大學(xué)施國(guó)躍課題組友情提供。該印跡材料以黃芪甲苷為模板分子，可選擇性識(shí)別黃芪甲苷。

1.3.3 印跡材料與ARS的結(jié)合 分別稱(chēng)取1.25 mg印跡材料、1.15 mg ARS和0.24 mg黃芪甲苷，并分別溶解于1、2、5 ml的0.1 mol/L PBS（pH=7.4）溶液中，使三者的最終濃度分別為1.25、0.575、0.048 mg/ml，置于超聲清洗器中超聲分散10 min。

1.3.4 UV-vis檢測(cè) 分別移取50 μl 0.575 mg/ml的ARS和100 μl 1.25 mg/ml印跡材料至同一EP管中，超聲分散10 min后，室溫下繼續(xù)放置5 h，保證兩者能完全反應(yīng)，檢測(cè)溶液的紫外吸收。之后，向上述溶液中繼續(xù)加入50 μl 0.048 mg/ml黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，重復(fù)以上測(cè)定步驟。

2 結(jié)果

3 討論

黃芪素有“補(bǔ)藥之長(zhǎng)”之稱(chēng)，具有益氣固表、利尿托毒等功效，在臨床上常用來(lái)治療非特異性免疫功能低下、乙型肝炎和心血管系統(tǒng)疾病[9]。黃芪甲苷作為中藥黃芪的指標(biāo)性成分應(yīng)用于黃芪藥材的質(zhì)量監(jiān)控[10-11]，目前其測(cè)定方法操作繁瑣，背景干擾多，誤差較大，且特異性差[12-13]。因此，迫切需要開(kāi)發(fā)一種能特異性檢出黃芪甲苷的新方法。本文創(chuàng)新性地提出了一種可高靈敏、高選擇性地定量檢測(cè)中藥材中黃芪甲苷的新方法。以苯硼酸雙羥基識(shí)別競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)為原理，通過(guò)制備氨基苯硼酸功能化的黃芪甲苷分子印跡材料，以達(dá)到對(duì)黃芪甲苷進(jìn)行精確的定量。

利用紫外-可見(jiàn)分光光度法證明黃芪甲苷和ARS能與印跡材料表面的硼酸基團(tuán)發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合作用。圖2結(jié)果所示，ARS和黃芪甲苷都能與硼酸發(fā)生共價(jià)結(jié)合作用。該混合體系中存在兩個(gè)共價(jià)結(jié)合作用平衡，第一個(gè)平衡存在于硼酸與ARS之間，第二個(gè)平衡存在于硼酸與黃芪甲苷之間。因此，黃芪甲苷的加入會(huì)破壞硼酸與ARS之間的作用平衡，從而導(dǎo)致紫外吸收峰強(qiáng)度的改變。在證實(shí)該原理的基礎(chǔ)上，又對(duì)競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)的pH進(jìn)行優(yōu)化，并確定反應(yīng)介質(zhì)的最佳pH為9.0。在上述最佳實(shí)驗(yàn)條件下，可知在510 nm處，溶液吸光度響應(yīng)值的變化與黃芪甲苷的濃度在1×10-6～6.4×10-4 mol/L內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，線(xiàn)性回歸系數(shù)為0.9929，檢出限為0.3×10-6 mol/L。該檢測(cè)方法結(jié)果可信、操作簡(jiǎn)捷、重復(fù)性較好，可用于中藥材中黃芪甲苷的定量分析。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 魯靜，王寶琴.黃芪甲苷的薄層掃描法測(cè)定[J].中成藥，1992，14（6）：34-35.

[2] 俞家華，曹正中，張勤.膜莢黃芪中黃芪甲苷的含量測(cè)定[J].中藥通報(bào)，1986，11（9）：38-39.

[3] 王改香，朱智甲，林苗，等.柱前衍生反相高效液相色譜法測(cè)定黃芪中的黃芪甲苷[J].分析試驗(yàn)室，2009，28（7）：108-111.

[4] Qi LW，Yu QT，Li P，et al.Quality evaluation of Radix Astragali through a simultaneous determination of six major active isoflavonoids and four main saponins by high-performance liquid chromatography coupled with diode array and evaporative light scattering detectors[J].J Chromatogr A，2006，1134（1-2）：162-169.

[5] 周媛媛，孟子暉，董美伶.分子印跡技術(shù)在天然產(chǎn)物有效成分分離純化中的應(yīng)用[J].色譜，2009，27（3）：359-363.

[6] 李禮，胡樹(shù)國(guó)，何錫文，等.應(yīng)用分子印跡固相萃取法提取中藥活性成分非瑟酮[J].高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報(bào)，2006，27（4）：608-611.

[7] Tong A，Yamauchi A，Hayashita T，et al.Boronic acid fluorophore/beta-cyclodextrin complex sensors for selective sugar recognition in water[J].Anal Chem，2001，73（7）：1530-1536.

[8] Salzmann CG，Llewellyn SA，Tobias G，et al.The role of carboxylated carbonaceous fragments in the functionalization and spectroscopy of a single-walled carbon-nanotube material[J].Adv Mater，2007，19（6）：883-887.

[9] Yan MM，Liu W，F(xiàn)u YJ，et al.Optimization of the microwave-assisted extraction process for four main astragalosides in Radix Astragali[J].Food Chem，2010，119（4）：1663-1670.

[10] Ma XQ，Duan JA，Zhu DY，et al.Chemical comparison of Astragali Radix（Huangqi）from different ragions of China[J].Nat Med，2000，54：213-218.

[11] 徐希科，李慧梁，柳潤(rùn)輝，等.HPLC-ELSD法測(cè)定黃芪藥材中黃芪甲苷[J].中草藥，2005，36（11）：1720-1722.

[12] 林緒芳，張禮菊，鄧曉輝.黃芪甲苷定量檢測(cè)方法比較[J].中國(guó)藥房，2007，18（21）：1670-1671.

[13] 歐燕春華.黃芪甲苷含量測(cè)定幾種常用方法的比較[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2009，3（15）：139-141.

（收稿日期：2014-08-29 本文編輯：李亞聰）

1.2 儀器

紫外分光光度計(jì)（UV-2450，島津，日本），超聲波清洗器（KQ218，昆山，江蘇），離心機(jī)（TG20，湖南凱達(dá)）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)原理 本實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)機(jī)制如圖1所示。游離的ARS在510 nm處會(huì)產(chǎn)生明顯的紫外吸收峰。實(shí)驗(yàn)中，將制備的苯硼酸功能化的介孔硅印跡材料浸于ARS溶液中，此時(shí)ARS中的鄰二醇結(jié)構(gòu)能與苯硼酸發(fā)生共價(jià)結(jié)合作用，從而連接到印跡材料的表面，溶液中游離的ARS濃度降低，吸光值下降；當(dāng)黃芪甲苷定量加入到上述混合液之后，由于黃芪甲苷具備與ARS相似的鄰二醇結(jié)構(gòu)，兩者會(huì)發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，從而與表面ARS競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合苯硼酸，相應(yīng)地表現(xiàn)為溶液中ARS濃度和吸光度增加。利用黃芪甲苷加入前后所引起吸光度的變化，達(dá)到間接檢測(cè)黃芪甲苷的目的。

1.3.2 氨基苯硼酸功能化硅膠印跡材料的制備 該復(fù)合材料由華東師范大學(xué)施國(guó)躍課題組友情提供。該印跡材料以黃芪甲苷為模板分子，可選擇性識(shí)別黃芪甲苷。

1.3.3 印跡材料與ARS的結(jié)合 分別稱(chēng)取1.25 mg印跡材料、1.15 mg ARS和0.24 mg黃芪甲苷，并分別溶解于1、2、5 ml的0.1 mol/L PBS（pH=7.4）溶液中，使三者的最終濃度分別為1.25、0.575、0.048 mg/ml，置于超聲清洗器中超聲分散10 min。

1.3.4 UV-vis檢測(cè) 分別移取50 μl 0.575 mg/ml的ARS和100 μl 1.25 mg/ml印跡材料至同一EP管中，超聲分散10 min后，室溫下繼續(xù)放置5 h，保證兩者能完全反應(yīng)，檢測(cè)溶液的紫外吸收。之后，向上述溶液中繼續(xù)加入50 μl 0.048 mg/ml黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，重復(fù)以上測(cè)定步驟。

2 結(jié)果

3 討論

黃芪素有“補(bǔ)藥之長(zhǎng)”之稱(chēng)，具有益氣固表、利尿托毒等功效，在臨床上常用來(lái)治療非特異性免疫功能低下、乙型肝炎和心血管系統(tǒng)疾病[9]。黃芪甲苷作為中藥黃芪的指標(biāo)性成分應(yīng)用于黃芪藥材的質(zhì)量監(jiān)控[10-11]，目前其測(cè)定方法操作繁瑣，背景干擾多，誤差較大，且特異性差[12-13]。因此，迫切需要開(kāi)發(fā)一種能特異性檢出黃芪甲苷的新方法。本文創(chuàng)新性地提出了一種可高靈敏、高選擇性地定量檢測(cè)中藥材中黃芪甲苷的新方法。以苯硼酸雙羥基識(shí)別競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)為原理，通過(guò)制備氨基苯硼酸功能化的黃芪甲苷分子印跡材料，以達(dá)到對(duì)黃芪甲苷進(jìn)行精確的定量。

利用紫外-可見(jiàn)分光光度法證明黃芪甲苷和ARS能與印跡材料表面的硼酸基團(tuán)發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合作用。圖2結(jié)果所示，ARS和黃芪甲苷都能與硼酸發(fā)生共價(jià)結(jié)合作用。該混合體系中存在兩個(gè)共價(jià)結(jié)合作用平衡，第一個(gè)平衡存在于硼酸與ARS之間，第二個(gè)平衡存在于硼酸與黃芪甲苷之間。因此，黃芪甲苷的加入會(huì)破壞硼酸與ARS之間的作用平衡，從而導(dǎo)致紫外吸收峰強(qiáng)度的改變。在證實(shí)該原理的基礎(chǔ)上，又對(duì)競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)的pH進(jìn)行優(yōu)化，并確定反應(yīng)介質(zhì)的最佳pH為9.0。在上述最佳實(shí)驗(yàn)條件下，可知在510 nm處，溶液吸光度響應(yīng)值的變化與黃芪甲苷的濃度在1×10-6～6.4×10-4 mol/L內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，線(xiàn)性回歸系數(shù)為0.9929，檢出限為0.3×10-6 mol/L。該檢測(cè)方法結(jié)果可信、操作簡(jiǎn)捷、重復(fù)性較好，可用于中藥材中黃芪甲苷的定量分析。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 魯靜，王寶琴.黃芪甲苷的薄層掃描法測(cè)定[J].中成藥，1992，14（6）：34-35.

[2] 俞家華，曹正中，張勤.膜莢黃芪中黃芪甲苷的含量測(cè)定[J].中藥通報(bào)，1986，11（9）：38-39.

[3] 王改香，朱智甲，林苗，等.柱前衍生反相高效液相色譜法測(cè)定黃芪中的黃芪甲苷[J].分析試驗(yàn)室，2009，28（7）：108-111.

[4] Qi LW，Yu QT，Li P，et al.Quality evaluation of Radix Astragali through a simultaneous determination of six major active isoflavonoids and four main saponins by high-performance liquid chromatography coupled with diode array and evaporative light scattering detectors[J].J Chromatogr A，2006，1134（1-2）：162-169.

[5] 周媛媛，孟子暉，董美伶.分子印跡技術(shù)在天然產(chǎn)物有效成分分離純化中的應(yīng)用[J].色譜，2009，27（3）：359-363.

[6] 李禮，胡樹(shù)國(guó)，何錫文，等.應(yīng)用分子印跡固相萃取法提取中藥活性成分非瑟酮[J].高等學(xué)?；瘜W(xué)學(xué)報(bào)，2006，27（4）：608-611.

[7] Tong A，Yamauchi A，Hayashita T，et al.Boronic acid fluorophore/beta-cyclodextrin complex sensors for selective sugar recognition in water[J].Anal Chem，2001，73（7）：1530-1536.

[8] Salzmann CG，Llewellyn SA，Tobias G，et al.The role of carboxylated carbonaceous fragments in the functionalization and spectroscopy of a single-walled carbon-nanotube material[J].Adv Mater，2007，19（6）：883-887.

[9] Yan MM，Liu W，F(xiàn)u YJ，et al.Optimization of the microwave-assisted extraction process for four main astragalosides in Radix Astragali[J].Food Chem，2010，119（4）：1663-1670.

[10] Ma XQ，Duan JA，Zhu DY，et al.Chemical comparison of Astragali Radix（Huangqi）from different ragions of China[J].Nat Med，2000，54：213-218.

[11] 徐?？?，李慧梁，柳潤(rùn)輝，等.HPLC-ELSD法測(cè)定黃芪藥材中黃芪甲苷[J].中草藥，2005，36（11）：1720-1722.

[12] 林緒芳，張禮菊，鄧曉輝.黃芪甲苷定量檢測(cè)方法比較[J].中國(guó)藥房，2007，18（21）：1670-1671.

[13] 歐燕春華.黃芪甲苷含量測(cè)定幾種常用方法的比較[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用，2009，3（15）：139-141.

（收稿日期：2014-08-29 本文編輯：李亞聰）

1.2 儀器

紫外分光光度計(jì)（UV-2450，島津，日本），超聲波清洗器（KQ218，昆山，江蘇），離心機(jī)（TG20，湖南凱達(dá)）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 實(shí)驗(yàn)原理 本實(shí)驗(yàn)的檢測(cè)機(jī)制如圖1所示。游離的ARS在510 nm處會(huì)產(chǎn)生明顯的紫外吸收峰。實(shí)驗(yàn)中，將制備的苯硼酸功能化的介孔硅印跡材料浸于ARS溶液中，此時(shí)ARS中的鄰二醇結(jié)構(gòu)能與苯硼酸發(fā)生共價(jià)結(jié)合作用，從而連接到印跡材料的表面，溶液中游離的ARS濃度降低，吸光值下降；當(dāng)黃芪甲苷定量加入到上述混合液之后，由于黃芪甲苷具備與ARS相似的鄰二醇結(jié)構(gòu)，兩者會(huì)發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)，從而與表面ARS競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合苯硼酸，相應(yīng)地表現(xiàn)為溶液中ARS濃度和吸光度增加。利用黃芪甲苷加入前后所引起吸光度的變化，達(dá)到間接檢測(cè)黃芪甲苷的目的。

1.3.2 氨基苯硼酸功能化硅膠印跡材料的制備 該復(fù)合材料由華東師范大學(xué)施國(guó)躍課題組友情提供。該印跡材料以黃芪甲苷為模板分子，可選擇性識(shí)別黃芪甲苷。

1.3.3 印跡材料與ARS的結(jié)合 分別稱(chēng)取1.25 mg印跡材料、1.15 mg ARS和0.24 mg黃芪甲苷，并分別溶解于1、2、5 ml的0.1 mol/L PBS（pH=7.4）溶液中，使三者的最終濃度分別為1.25、0.575、0.048 mg/ml，置于超聲清洗器中超聲分散10 min。

1.3.4 UV-vis檢測(cè) 分別移取50 μl 0.575 mg/ml的ARS和100 μl 1.25 mg/ml印跡材料至同一EP管中，超聲分散10 min后，室溫下繼續(xù)放置5 h，保證兩者能完全反應(yīng)，檢測(cè)溶液的紫外吸收。之后，向上述溶液中繼續(xù)加入50 μl 0.048 mg/ml黃芪甲苷標(biāo)準(zhǔn)溶液，重復(fù)以上測(cè)定步驟。

2 結(jié)果

3 討論

黃芪素有“補(bǔ)藥之長(zhǎng)”之稱(chēng)，具有益氣固表、利尿托毒等功效，在臨床上常用來(lái)治療非特異性免疫功能低下、乙型肝炎和心血管系統(tǒng)疾病[9]。黃芪甲苷作為中藥黃芪的指標(biāo)性成分應(yīng)用于黃芪藥材的質(zhì)量監(jiān)控[10-11]，目前其測(cè)定方法操作繁瑣，背景干擾多，誤差較大，且特異性差[12-13]。因此，迫切需要開(kāi)發(fā)一種能特異性檢出黃芪甲苷的新方法。本文創(chuàng)新性地提出了一種可高靈敏、高選擇性地定量檢測(cè)中藥材中黃芪甲苷的新方法。以苯硼酸雙羥基識(shí)別競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)為原理，通過(guò)制備氨基苯硼酸功能化的黃芪甲苷分子印跡材料，以達(dá)到對(duì)黃芪甲苷進(jìn)行精確的定量。

利用紫外-可見(jiàn)分光光度法證明黃芪甲苷和ARS能與印跡材料表面的硼酸基團(tuán)發(fā)生競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合作用。圖2結(jié)果所示，ARS和黃芪甲苷都能與硼酸發(fā)生共價(jià)結(jié)合作用。該混合體系中存在兩個(gè)共價(jià)結(jié)合作用平衡，第一個(gè)平衡存在于硼酸與ARS之間，第二個(gè)平衡存在于硼酸與黃芪甲苷之間。因此，黃芪甲苷的加入會(huì)破壞硼酸與ARS之間的作用平衡，從而導(dǎo)致紫外吸收峰強(qiáng)度的改變。在證實(shí)該原理的基礎(chǔ)上，又對(duì)競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)的pH進(jìn)行優(yōu)化，并確定反應(yīng)介質(zhì)的最佳pH為9.0。在上述最佳實(shí)驗(yàn)條件下，可知在510 nm處，溶液吸光度響應(yīng)值的變化與黃芪甲苷的濃度在1×10-6～6.4×10-4 mol/L內(nèi)呈良好的線(xiàn)性關(guān)系，線(xiàn)性回歸系數(shù)為0.9929，檢出限為0.3×10-6 mol/L。該檢測(cè)方法結(jié)果可信、操作簡(jiǎn)捷、重復(fù)性較好，可用于中藥材中黃芪甲苷的定量分析。

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（收稿日期：2014-08-29 本文編輯：李亞聰）