馬珍瓊龔云麒屈云蓮張恒普俊學(xué)

【摘 要】 目的：測(cè)定脫氧土大黃苷的平衡溶解度及表觀油水分配系數(shù)。方法：采用紫外分光光度-搖瓶法測(cè)定脫氧土大黃苷在有機(jī)溶劑、水及不同pH磷酸鹽緩沖鹽中的平衡溶解度和其在正辛醇-水/磷酸鹽緩沖鹽溶鹽中的表觀油水分配系數(shù)。結(jié)果：在溫度37℃時(shí)，脫氧土大黃苷在水中的溶解度為01217mg/mL，乙醇和正辛醇對(duì)脫氧土大黃苷的溶解性較好，其溶解度分別為121146mg/mL和72867mg/mL，在不同pH的磷酸鹽緩沖溶液中隨著pH的升高其溶解度變化無(wú)規(guī)律；脫氧土大黃苷在正辛醇-水中的表觀油水分配系數(shù)Papp為13852（lgP=214）；當(dāng)pH在1～8的磷酸鹽緩沖溶液中時(shí)，受pH影響幾乎無(wú)變化，表現(xiàn)為親脂性。結(jié)論：脫氧土大黃苷在水中的平衡溶解度差，受介質(zhì)的pH影響，且油水分配系數(shù)高。因此，在制劑過程中，可通過改變pH增加藥物的溶解性和穩(wěn)定性。其測(cè)定結(jié)果為進(jìn)一步研究脫氧土大黃苷的制備、制劑及其在生物體內(nèi)外的吸收、分布和代謝過程提供重要的參考和依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】 脫氧土大黃苷；平衡溶解度；紫外分光光度法；表觀油水分配系數(shù)

【中圖分類號(hào)】R914 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號(hào)】1007-8517（2016）23-0039-04

脫氧土大黃苷為拉薩大黃中的主要成分之一，屬脂溶性茋苷類化合物。研究顯示：脫氧土大黃苷具有多種藥理活性，如清除自由基、抗氧化、抗菌、抗炎、改善和治療缺血性心腦血管疾病等[1-3]。藥物吸收進(jìn)入血液需要合適的溶解度和油水分配系數(shù)，以便能透過生物膜的脂質(zhì)雙分子層[4]。藥物的溶解度與油水分配系數(shù)可預(yù)測(cè)藥物在體內(nèi)吸收、分布、代謝等，也可為制劑給藥途徑選擇、劑型選擇、處方篩選、工藝設(shè)計(jì)及生物藥劑學(xué)等研究提供依據(jù)。

目前，脫氧土大黃苷的研究主要集中制備及藥理方面，而理化性質(zhì)研究報(bào)道尚少。研究采用紫外分光光度-搖瓶法測(cè)定脫氧土大黃苷在水及不同pH緩沖液中、溫度在37℃下的平衡溶解度和油水分配系數(shù)[5-6]，為脫氧土大黃苷體內(nèi)外吸收、制劑開發(fā)及其他相關(guān)藥學(xué)研究提供數(shù)據(jù)支持和參考。

1 儀器與材料

11 儀器 UV-2450紫外分光光度計(jì)（日本島津公司）；SW22恒溫震蕩儀（德國(guó)Julabo公司）；FE20實(shí)驗(yàn)室pH計(jì)（梅特勒-托利多公司）。

12 試劑試藥 脫氧土大黃苷對(duì)照品（昆藥集團(tuán)股份有限公司藥物研發(fā)平臺(tái)自制，20160421）；乙醇（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，20141002）、甲醇（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，20141201）、磷酸（廣東省化學(xué)試劑工程技術(shù)研究開發(fā)中心，20141002）、氫氧化鈉（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，20131108）、磷酸二氫鈉（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，20140202）、磷酸二氫鉀（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，20130625）、磷酸氫二鉀（天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司，20130722）、正辛醇（天津市津東天正精細(xì)化學(xué)試劑廠，20150112）等均為分析純，水為自制重蒸水。

2 方法與結(jié)果

21 脫氧土大黃UV檢測(cè)方法的建立

211 樣品儲(chǔ)備溶液的配制 稱量脫氧土大黃苷對(duì)照品適量，精密稱定103mg于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度作脫氧土大黃苷對(duì)照儲(chǔ)備液。

212 最大吸收波長(zhǎng)的確定 取脫氧土大黃苷對(duì)照儲(chǔ)備液適量，用甲醇不斷稀釋，在波長(zhǎng)190～800nm的波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，其吸光度值在03～07之間，其最大吸收波長(zhǎng)為319nm。見圖1。

213 脫氧土大黃苷標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 精密移取脫氧土大黃苷對(duì)照儲(chǔ)備液1、1、5、6、2、5mL分別于50、25、100、100、25、50mL容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度制得濃度分別為206、412、513、618、824、103μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，照紫外分光光度法，在波長(zhǎng)319nm處，用紫外分光光度計(jì)分別測(cè)定其吸收度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程為：Y=0076x-000875，R2=099997，表明脫氧土大黃苷在濃度206～103μg/mL范圍內(nèi)吸光度與濃度呈良好線性關(guān)系。

214 精密度考察 按“標(biāo)準(zhǔn)曲線”法，配制濃度為513、618、824μg/mL的脫氧土大黃苷溶液，在319nm處測(cè)定各溶液的吸光度，每個(gè)濃度平行測(cè)定6次，計(jì)算其精密度，結(jié)果分別為：01856%、01983%、01792%，均小于10%，結(jié)果表明該測(cè)定方法精密度良好。

215 加樣回收率考察 按“標(biāo)準(zhǔn)曲線”法，分別量取脫氧土大黃苷對(duì)照儲(chǔ)備液和樣品儲(chǔ)備液適量配制成濃度為80%、100%、120%的脫氧土大黃苷溶液，每個(gè)濃度配制3份，和3份樣品溶液在319nm處測(cè)定各溶液的吸光度，帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算得到對(duì)應(yīng)的質(zhì)量濃度，按公式：準(zhǔn)確度=測(cè)定質(zhì)量濃度值/真實(shí)質(zhì)量濃度值×100%，計(jì)算各濃度下的平均回收率，結(jié)果分別為：1013%、998%、987%，結(jié)果表明該測(cè)定方法準(zhǔn)確度良好。

216 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密量取脫氧土大黃苷對(duì)照品溶液3mL于50mL容量瓶中，分別加水和pH為12的磷酸溶液超聲溶解并定容至刻度50mL，分別精密取2mL于50mL容量瓶中，分別用水和pH為118的磷酸溶液定容至刻度50mL，制得濃度為618μg/mL的對(duì)照品溶液，放于室溫，分別于0、2、8、12、24、36、48h取樣照紫外分光光度法測(cè)定其吸光度，測(cè)定結(jié)果的RSD分別為：101%、132%，均小于20%，結(jié)果表明，在48h內(nèi)，脫氧土大黃苷在水中和pH為118的磷酸溶液中穩(wěn)定。

22 平衡溶解度測(cè)定

221 不同pH磷酸緩沖液的配制 按《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版第四部配制pH 12的磷酸溶液及pH 20、30、40、50、60、70、80的磷酸鹽緩沖液，并用磷酸和磷酸氫二鈉調(diào)節(jié)pH，最終用pH計(jì)驗(yàn)證其pH為118、203、305、406、503、605、705、802。

222 脫氧土大黃苷在水及不同pH緩沖液中的平衡溶解度測(cè)定 稱取脫氧土大黃苷300mg數(shù)份，置于50mL具塞三角瓶中，分別加入水，不同pH值的磷酸緩沖液20mL，每種溶劑平行操作3份，置于（37±05）℃的恒溫水浴中，以150r/min勻速震振搖48h至藥物不再溶解。將飽和脫氧土大黃苷溶液用045μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液做適當(dāng)稀釋后，按照紫外分光光度法進(jìn)行測(cè)定，記錄其數(shù)據(jù)，并計(jì)算其平衡溶解度，結(jié)果如表2。于24h時(shí)脫氧土大黃苷的濃度為平衡溶解度，做出其在不同緩沖液中的平衡溶解度曲線，如圖2。

由圖2可知，溶劑的pH對(duì)脫氧土大黃苷的平衡溶解度影響較大，隨著pH的不斷增加，其平衡溶解度先降低后增加的趨勢(shì)。

于不同時(shí)間點(diǎn)取樣測(cè)定脫氧土大黃苷的濃度為平衡溶解度，做出其在水中不同時(shí)間的平衡溶解度曲線，如圖3。

由圖3可知，脫氧土大黃苷的平衡溶解度隨著時(shí)間增加逐漸增加，其平衡溶解度于2h趨于平衡。

23 表觀油水分配系數(shù)測(cè)定

231 水飽和正辛醇溶液及正辛醇飽和水溶液的配制量 取200mL正辛醇和250mL蒸餾水于具塞三角瓶中。恒溫振蕩24h，使其混合均勻，相互飽和后，于分液漏斗中，靜置過夜分層，分離兩相，將兩相界面附近的溶液棄去，并將上層的水飽和正辛醇溶液和下層的正辛醇飽和水溶液保存?zhèn)溆谩?/p>

232 脫氧土大黃苷在正辛醇-水及不同pH緩沖液中的表觀油水分配系數(shù)測(cè)定 稱取脫氧土大黃苷100mg，精密稱定為01058mg于50mL容量瓶中，用水飽和正辛醇溶解并定容，配成濃度為2116mg/mL的溶液，分別量取該溶液20mL于具塞三角瓶中，再分別加入被正辛醇飽和的水和pH20、30、40、50、60、70、80的磷酸鹽緩沖液20mL，放入（37±05）℃恒溫水浴振蕩儀中振搖24h后取出，以4000r/min離心30min分別取上、下層溶液，照紫外分光光度法在319nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸光度，根據(jù)公式Papp=Co/Cw計(jì)算其油水分配系數(shù)。公式中Papp為各介質(zhì)下的表觀油水分配系數(shù)、Co為脫氧土大黃苷在正辛醇中分配平衡時(shí)測(cè)得的濃度，Cw為脫氧土大黃苷在水相中分配平衡時(shí)測(cè)得的濃度。脫氧土大黃苷在水和不同pH緩沖液飽和的正辛醇/正辛醇飽和的水和不同pH緩沖液中表觀分配系數(shù)如表3。

3 討論

目前，平衡溶解度和油水分配系數(shù)測(cè)定的方法很多，如搖瓶法、HPLC法和產(chǎn)生柱法，其中以搖瓶法最為簡(jiǎn)便。本研究采用紫外分光光光度-搖瓶法測(cè)定脫氧土大黃苷的平衡溶解度和油水分配系數(shù)[7-9]，此方法操作簡(jiǎn)便、省時(shí)、經(jīng)濟(jì)，且得到的線性、精密度和回收率均符合《中國(guó)藥典》要求，表明該方法測(cè)定脫氧土大黃苷的平衡溶解度和油水分配系數(shù)可行。

人體的生理環(huán)境大致在pH20～80，參照中國(guó)藥典及相關(guān)文獻(xiàn)中緩沖液的pH范圍，并設(shè)計(jì)考察脫氧土大黃苷在pH 118、203、305、406、503、605、705、802下的磷酸緩沖鹽中的平衡溶解度和表觀油水分配系數(shù)，模擬藥物在生物體內(nèi)（水相）和生物相（油相）間的分配情況。在研究中大多采用有機(jī)溶劑來(lái)模擬生物相（油相），如：正辛醇、橄欖油和氯仿等。正辛醇是被公認(rèn)為更接近生物相的有機(jī)溶劑，其原因主要是因?yàn)槠淙芙舛葹?107MPa，接近于生物膜的溶解度參數(shù)[10]，其可作為模擬生物相的有機(jī)溶劑。因此，本實(shí)驗(yàn)研究采用正辛醇-水為模擬系統(tǒng)測(cè)定油水分配系數(shù)。

研究表明，溫度在37℃下，脫氧土大黃苷的油水分配系數(shù)P為13852（lgP=214），表現(xiàn)為疏水性，容易透過生物體細(xì)胞膜而進(jìn)入體內(nèi)被吸收，這不是限制脫氧土大黃苷在體內(nèi)外吸收的重要原因。而其在水中的平衡溶解度僅為01217mg/mL，藥物的水溶性差導(dǎo)致其在體內(nèi)的溶出速度慢。因此，其溶解度是體內(nèi)外吸收轉(zhuǎn)運(yùn)的限速因素，是制劑過程中應(yīng)該解決的首要問題。本文對(duì)脫氧土大黃苷進(jìn)行平衡溶解度及表觀油水分配系數(shù)的測(cè)定，不僅可為脫氧土大黃苷的體內(nèi)、體外吸收代謝及分離制備等研究提供參考，為脫氧土大黃苷進(jìn)一步制劑處方工藝研究提供數(shù)據(jù)支持和指導(dǎo)。

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（編輯：梁志慶）