翟秋玲 張春曉* 孫云章 王 玲 宋 凱 張 璐

(1.廈門市飼料檢測(cè)與安全評(píng)價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，集美大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院，廈門 361021;2.通威股份有限公司，成都 610041)

腸道健康是魚類快速生長(zhǎng)和魚體保持健康的重要保障。其中，腸道菌群的組成和數(shù)量是評(píng)價(jià)腸道健康的重要指標(biāo)，其在促進(jìn)宿主的生長(zhǎng)和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收、機(jī)體免疫防御、防止消化道疾病發(fā)生、保證腸道功能正常以及促進(jìn)腸細(xì)胞增殖等方面起著重要作用。魚類腸道正常菌群的維持和優(yōu)化主要依賴于腸道優(yōu)勢(shì)菌群種類和數(shù)量的變化［1-5］。另外，腸道黏膜形態(tài)結(jié)構(gòu)是魚類消化吸收的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)，腸黏膜上皮絨毛高度和寬度的增加，即吸收面積的增加，能夠增強(qiáng)其對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收能力［6］。三丁酸甘油酯(tributyrin，TB)，化學(xué)式為C15H26O6，為無(wú)色近油狀液體，幾乎沒(méi)有氣味或略有脂肪香味。TB在腸道脂肪酶的作用下，分解成丁酸、丁酸甘油一酯和甘油，主要有效成分為丁酸，其作為短鏈脂肪酸(SCFA)，能夠?yàn)槟c道上皮細(xì)胞提供能量，促進(jìn)其生長(zhǎng)發(fā)育，改善腸道的形態(tài)結(jié)構(gòu)［7-8］。研究表明，飼糧中添加TB可以提高斷奶仔豬［9］和肉雞的生長(zhǎng)性能［10］，改善肉雞的腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)和微生物菌群，提高飼料養(yǎng)分消化率［10］。目前，對(duì)TB在畜禽動(dòng)物上的應(yīng)用有少量研究報(bào)道，而在水產(chǎn)動(dòng)物上的應(yīng)用則鮮見報(bào)道。甘露寡糖(mannan-oligosaccharides，MOS)是典型的功能性寡糖之一，飼料中添加適量的MOS能夠提高水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)性能、非特異性免疫力，改善腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)及腸道菌群［11-15］。已有研究發(fā)現(xiàn)，丁酸鈉和MOS的復(fù)合添加可使斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能顯著優(yōu)于單獨(dú)添加丁酸鈉或MOS［16］。然而，尚未見動(dòng)物飼料中TB和MOS復(fù)合添加的研究報(bào)道。

菊黃東方鲀(Takifugu flavindus)，屬鲀形目，鲀科，東方鲀屬，俗稱河鲀，為我國(guó)特有的經(jīng)濟(jì)東方鲀類，主要分布于我國(guó)黃海和東海，為暖溫性魚類［17-18］，具有很高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。近年來(lái)，菊黃東方鲀的養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)發(fā)展迅速，而在高密度集約化養(yǎng)殖條件下，菊黃東方鲀生長(zhǎng)緩慢、病害頻發(fā)，隨之而來(lái)的藥物濫用嚴(yán)重威脅著水環(huán)境和食品安全。因而，綠色飼料添加劑的開發(fā)和使用備受關(guān)注。本試驗(yàn)以菊黃東方鲀?yōu)檠芯繉?duì)象，通過(guò)在飼料中添加不同水平的TB和MOS，考察其對(duì)魚體生長(zhǎng)性能、體組成及腸道健康指標(biāo)的影響，探討TB與MOS的作用機(jī)制和適宜的添加量，為其在水產(chǎn)飼料中的合理應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)飼料

以魚粉和豆粕為主要蛋白質(zhì)源，魚油、豆油和卵磷脂為脂肪源，并補(bǔ)充礦物質(zhì)、維生素等配制出基礎(chǔ)飼料，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見表1。以基礎(chǔ)飼料作為對(duì)照(D1組)，分別在基礎(chǔ)飼料(干物質(zhì)基礎(chǔ))中添加50 mg/kg TB(購(gòu)自上海阿拉丁化學(xué)有限公司，純度為98%;D2組)、100 mg/kg TB(D3組)、150 mg/kg TB(D4組)、50 mg/kg TB+250 mg/kg MOS(購(gòu)自成都格拉西亞化學(xué)科技有限公司，純度為93%;D5組)、100 mg/kg TB+250 mg/kg MOS(D6組)，配制成5種試驗(yàn)飼料。將所有固體原料粉碎，過(guò)80目篩，按比例混勻后添加油脂并再次混勻，然后加去離子水揉成面團(tuán)，經(jīng)雙螺桿制粒機(jī)(CD4×1TS型，華南理工大學(xué))加工成 1.5 mm×5.0 mm的顆粒，陰干后保存于-20℃冰箱中備用。

1.2 試驗(yàn)魚來(lái)源與馴化

試驗(yàn)用菊黃東方鲀?yōu)楦＝ㄊ≌钠只圬S養(yǎng)殖場(chǎng)當(dāng)年人工孵化的同一批魚苗，正式試驗(yàn)前，試驗(yàn)魚在集美大學(xué)海水試驗(yàn)場(chǎng)循環(huán)過(guò)濾桶(1 200 L)中暫養(yǎng)14 d，并以基礎(chǔ)飼料飽食投喂(08:30、16:30各投喂1次)，使之逐漸適應(yīng)試驗(yàn)飼料和養(yǎng)殖環(huán)境。

1.3 試驗(yàn)分組與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)魚馴養(yǎng)結(jié)束后，停食24 h，挑選出體格健壯、規(guī)格一致［平均體重為(15.99±0.15)g］的試驗(yàn)魚，隨機(jī)分為6組，每組設(shè)3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)20尾，以重復(fù)為單位放養(yǎng)于玻璃缸(120 L)內(nèi)。試驗(yàn)在海水循環(huán)過(guò)濾系統(tǒng)中進(jìn)行，每天飽食投喂2次(08:30、16:30 各投喂 1 次)，在攝食 0.5 h 后吸去殘餌和糞便，并換水50%。試驗(yàn)期間，水溫為(27±2)℃，鹽度為(30±1)‰，溶解氧濃度＞7.6 mg/L。試驗(yàn)期為8周。

1.4 樣品采集

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后停食24 h，用丁香酚麻醉，對(duì)各組試驗(yàn)魚進(jìn)行稱重并計(jì)數(shù)。每缸隨機(jī)撈取3尾魚，尾靜脈取血，血液放在4℃冰箱內(nèi)靜置12 h后，離心(3 500 r/min，10 min)取血清，置于-80℃冰箱中保存用于分析生化指標(biāo);之后，解剖取出內(nèi)臟，分離肝胰臟，分別稱量?jī)?nèi)臟總重和肝胰臟重;并取出全部腸道和肝胰臟，剔除脂肪，用冷卻的生理鹽水(質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.86%)沖洗干凈并用濾紙吸干，液氮中保存用于分析腸道消化酶活力及肝胰臟組成。每缸另隨機(jī)撈取9尾魚，其中3尾用于腸道菌群培養(yǎng)計(jì)數(shù)，3尾用于腸道組織切片觀察，3尾用于全魚組成分析。

表1 基礎(chǔ)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ))Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet(DM basis) %

1.5 指標(biāo)分析與測(cè)定

1.5.1 飼料、全魚和肝胰腺的組成分析

飼料、全魚和肝胰腺的常規(guī)成分測(cè)定采用AOAC(2001)［19］的方法。其中，水分含量是在105℃烘箱中烘至恒重后測(cè)定，粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮法，使用全自動(dòng)凱氏定氮儀(FOSS Kjeltec 8400，美國(guó))測(cè)定，粗脂肪含量采用索氏抽提法(乙醚為溶劑)測(cè)定，粗灰分含量是在馬福爐中550℃灼燒12 h后測(cè)定。肝糖原含量采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定，操作步驟按照說(shuō)明書進(jìn)行。

1.5.2 腸道消化酶活力的測(cè)定

稱量全腸重量，按1∶9(質(zhì)量體積比)加入0～4℃的生理鹽水，在組織勻漿器中勻漿(冰水浴)。用低溫離心機(jī)2 000 r/min離心10 min后，取出上清液于4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫?4 h內(nèi)測(cè)定完畢。淀粉酶和脂肪酶的活力均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的相應(yīng)試劑盒測(cè)定，操作步驟按照說(shuō)明書進(jìn)行;組織蛋白質(zhì)含量采用微量考馬斯亮藍(lán)法(試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所)測(cè)定;蛋白酶的活力采用福林-酚法［20］測(cè)定。淀粉酶活力單位定義:組織中每毫克蛋白質(zhì)在37℃條件下與底物作用30 min，水解10 mg淀粉定義為1個(gè)酶活力單位。脂肪酶活力單位定義:在37℃條件下，每克組織蛋白質(zhì)在反應(yīng)體系中與底物反應(yīng)1 min，每消耗1μmol底物為1個(gè)酶活力單位。蛋白酶活力單位定義:在37℃、pH為7.5的條件下，與1%酪蛋白底物作用10 min，每分鐘內(nèi)分解出1μg酪氨酸的酶量為1個(gè)酶活力單位。

1.5.3 血清生化指標(biāo)的測(cè)定

血清中堿性磷酸酶(AKP)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)、溶菌酶(LYS)和總超氧化物歧化酶(T-SOD)的活力以及總蛋白(TP)含量均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的相應(yīng)試劑盒測(cè)定;血清中甘油三酯(TG)和總膽固醇(TC)含量采用浙江東甌診斷產(chǎn)品有限公司生產(chǎn)的相應(yīng)試劑盒測(cè)定;血清中葡萄糖(GLU)含量采用上海榮盛生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的試劑盒測(cè)定。

1.5.4 腸道菌群培養(yǎng)計(jì)數(shù)

樣品采集參考王琨等［21］提供的方法略作改進(jìn)，具體如下:清水沖洗魚體表面，拭干，再用酒精棉球擦拭。用滅菌的解剖工具解剖試驗(yàn)魚，取出腸道，用磷酸鹽緩沖溶液(PBS，pH 7.3)沖洗腸道并去除內(nèi)容物，保留腸壁樣品，置于經(jīng)稱重的1.5 mL離心管內(nèi)，稱重，并以1∶4的質(zhì)量體積比加入無(wú)菌PBS，用滅菌勻漿器充分勻漿，制成腸道原液，然后進(jìn)行梯度稀釋。取 10-1、10-2、10-3梯度稀釋液各100μL，分別涂布在選擇性培養(yǎng)基MRS培養(yǎng)基(購(gòu)自青島日水生物技術(shù)有限公司)上，用于乳酸菌的分離計(jì)數(shù);取10-2、10-3、10-4梯度稀釋液各100μL，分別涂布在硫代硫酸鹽檸檬酸鹽膽鹽蔗糖(TCBS)瓊脂培養(yǎng)基(購(gòu)自北京陸橋技術(shù)有限責(zé)任公司)上，用于弧菌的分離計(jì)數(shù);取10-2、10-3、10-4梯度稀釋液各100μL，分別涂布在2216培養(yǎng)基(購(gòu)自青島海博生物技術(shù)有限公司)上，用于需氧異養(yǎng)細(xì)菌的分離計(jì)數(shù)。將上述培養(yǎng)基置于28℃恒溫生化培養(yǎng)箱(PYX-250S-B，科力儀器)中培養(yǎng)。選擇菌落生長(zhǎng)疏密適當(dāng)、菌落清晰的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并將結(jié)果換算成每克樣品中菌落數(shù)的對(duì)數(shù)值［lg(CFU/g)］［22］進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。1.5.5 腸道組織切片觀察

用PBS沖洗腸道后，分別取前腸的中間部分和后腸的中間部分各 0.5 cm，Bouin氏液固定12 h，乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切片(厚度為5μm)，蘇木精-伊紅(HE)染色。切片采用光學(xué)顯微鏡(奧林巴斯BX80，日本)觀察、拍照，每張切片選擇5個(gè)視野。在200倍下測(cè)量腸絨毛高度與寬度，在400倍下測(cè)量腸上皮細(xì)胞高度和微絨毛估計(jì)高度，測(cè)量方法參考 Escaffre等［23］的方法，并用Motic照相處理軟件處理。

1.6 計(jì)算公式

式中:W0為初始體重(g);Wt為終末體重(g);t為試驗(yàn)天數(shù)(d);WP為攝入的蛋白質(zhì)總量(g);Wf為攝入的飼料總量(g，干物質(zhì)基礎(chǔ));Wh為樣品魚肝胰臟重(g);Wv為樣品魚內(nèi)臟重(g);Wd為樣品魚體重(g)。

1.7 統(tǒng)計(jì)與分析

各組數(shù)據(jù)均采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行方差分析，若差異顯著，則進(jìn)行Tukey氏多重比較，差異顯著水平為P＜0.05。所有數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SE)表示。

2 結(jié)果

2.1 TB和MOS對(duì)菊黃東方鲀生長(zhǎng)性能的影響

養(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后，各組試驗(yàn)魚成活率均為100%。由表2可知，菊黃東方鲀的增重率、特定生長(zhǎng)率、飼料效率和蛋白質(zhì)效率隨著TB添加量的增加先升高，在添加量為100 mg/kg時(shí)達(dá)到最大值(分別為 74.72%、1.00%/d、0.53 和 1.14)，而后趨于平穩(wěn)。與單獨(dú)添加50 mg/kg TB相比，飼料中添加50 mg/kg TB+250 mg/kg MOS顯著提高菊黃東方鲀的增重率、特定生長(zhǎng)率、飼料效率和蛋白質(zhì)效率(P＜0.05);飼料中添加 100 mg/kg TB+250 mg/kg MOS與單獨(dú)添加100 mg/kg TB相比，菊黃東方鲀的各生長(zhǎng)性能指標(biāo)均無(wú)顯著變化(P＞0.05)。飼料中單獨(dú)添加TB有促進(jìn)肝胰指數(shù)和臟體指數(shù)增大的趨勢(shì)，當(dāng)添加量為150 mg/kg時(shí)菊黃東方鲀的肝體指數(shù)和臟體指數(shù)顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，但與2個(gè)聯(lián)合添加組差異不顯著(P＞0.05)。此外，50 mg/kg TB+250 mg/kg MOS 組的增重率顯著高于100 mg/kg TB+250 mg/kg MOS組(P＜0.05)，其他生長(zhǎng)性能指標(biāo)2組間差異不顯著(P＞0.05)。

2.2 TB和 MOS對(duì)菊黃東方鲀魚體和肝胰腺組成的影響

由表3可知，飼料中添加TB和MOS對(duì)魚體水分、粗灰分及粗蛋白質(zhì)以及肝胰腺粗蛋白質(zhì)、粗灰分含量均無(wú)顯著影響(P＞0.05)。魚體粗脂肪含量以150 mg/kg TB組最高，顯著高于其他各組(P＜0.05);同時(shí)，聯(lián)合添加組的魚體粗脂肪含量要高于對(duì)應(yīng)添加量的單獨(dú)添加組，且在TB添加量為50 mg/kg時(shí)組間差異達(dá)到顯著水平(P＜0.05)。肝胰腺粗脂肪含量以150 mg/kg TB組最高，顯著高于除50 mg/kg TB+250 mg/kg MOS組外的其他各組(P＜0.05);同時(shí)，聯(lián)合添加組的肝胰腺粗脂肪含量均顯著高于對(duì)應(yīng)添加量的單獨(dú)添加組(P＜0.05)。150 mg/kg TB組的肝胰腺水分含量顯著低于其他單獨(dú)添加組(P＜0.05)，與2個(gè)聯(lián)合添加組差異不顯著(P＞0.05);同時(shí)，聯(lián)合添加組的肝胰腺含量要低于對(duì)應(yīng)添加量的單獨(dú)添加組，且在TB添加量為50 mg/kg時(shí)組間差異達(dá)到顯著水平(P＜0.05)。肝糖原的含量隨著TB添加量的增加而顯著下降(P＜0.05)，聯(lián)合添加組顯著低于對(duì)應(yīng)添加量的單獨(dú)添加組(P＜0.05)，以 100 mg/kg TB+250 mg/kg MOS組的肝糖原含量最低。

表2 TB和MOS對(duì)菊黃東方鲀生長(zhǎng)性能的影響Table 2 Effects of TB and MOS on growth performance of tawny puffer(Takifugu flavindus)

表3 TB和MOS對(duì)菊黃東方鲀魚體和肝胰腺組成的影響(濕重基礎(chǔ))Table 3 Effects of TB and MOS on whole-body and hepatopancreas composition of tawny puffer(Takifugu flavindus)(wet matter basis) %

2.3 TB和MOS對(duì)菊黃東方鲀腸道消化酶活力的影響

由表4可知，隨著TB添加量的增加，腸道蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活力均先升高后下降，均在100 mg/kg TB組達(dá)到最高值。50 mg/kg TB+250 mg/kg MOS組的腸道蛋白酶活力與50 mg/kg TB 組相比顯著升高(P＜0.05)，但腸道脂肪酶和淀粉酶活力2組間差異不顯著(P＞0.05)。100 mg/kg TB+250 mg/kg MOS 組的腸道脂肪酶活力與100 mg/kg TB組相比顯著升高(P＜0.05)，但其腸道蛋白酶和淀粉酶活力卻顯著下降(P＜0.05)。

表4 TB和MOS對(duì)菊黃東方鲀腸道消化酶活力的影響Table 4 Effects of TB and MOS on intestinal digestive activities of tawny puffer(Takifugu flavindus) U/mg prot

2.4 TB和MOS對(duì)菊黃東方鲀血清生化指標(biāo)的影響

由表5可知，隨著TB添加量的增加，菊黃東方鲀血清中總膽固醇含量顯著降低(P＜0.05)，甘油三酯含量有下降的趨勢(shì)(P＞0.05);聯(lián)合添加組血清總膽固醇和甘油三酯含量均低于對(duì)應(yīng)添加量的單獨(dú)添加組，但差異不顯著(P＞0.05)。血清總蛋白和葡萄糖含量隨著TB添加量的增加而顯著升高(P＜0.05);50 mg/kg TB+250 mg/kg MOS 組與50mg/kg TB組相比，血清總蛋白和葡萄糖含量均 顯 著 升 高 (P＜0.05);100 mg/kg TB+250 mg/kg MOS組與100 mg/kg TB組相比，血清總蛋白含量顯著升高(P＜0.05)，而血清葡萄糖含量則無(wú)顯著差異(P＞0.05)。血清谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力隨著TB添加量的增加而顯著降低(P＜0.05)，且聯(lián)合添加組顯著低于對(duì)應(yīng)添加量的單獨(dú)添加組(P＜0.05)。血清堿性磷酸酶、溶菌酶以及總超氧化物歧化酶活力在各組間均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。

表5 TB和MOS對(duì)菊黃東方鲀血清生化指標(biāo)的影響Table 5 Effects of TB and MOS on serum biochemical indices of tawny puffer(Takifugu flavindus)

2.5 TB和MOS對(duì)菊黃東方鲀腸道菌群的影響

由表6可知，隨著TB添加量的增加，腸道需氧異養(yǎng)細(xì)菌數(shù)量先增加后降低，在100 mg/kg TB組顯著高于除50 mg/kg TB+250 mg/kg MOS組外的其他各組(P＜0.05);同時(shí)，50 mg/kg TB+250 mg/kg MOS組與50 mg/kg TB組相比顯著增加(P＜0.05)，100 mg/kg TB+250 mg/kg MOS 組與100 mg/kg TB組相比則顯著下降(P＜0.05)。50 mg/kg TB+250 mg/kg MOS組的腸道弧菌數(shù)量顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，但各單獨(dú)添加組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)，聯(lián)合添加組與對(duì)應(yīng)添加量的單獨(dú)添加組之間亦無(wú)顯著差異(P＞0.05)。腸道乳酸菌數(shù)量先隨著TB添加量的增加顯著升高(P＜0.05)，在添加量為 50 mg/kg之后趨于穩(wěn)定(P＞0.05)，聯(lián)合添加組與對(duì)應(yīng)添加量的單獨(dú)添加組之間無(wú)顯著差異(P＞0.05)。

表6 TB和MOS對(duì)菊黃東方鲀腸道菌群的影響Table 6 Effects of TB and MOS on intestinal microflora of tawny puffer(Takifugu flavindus) lg(CFU/g)

2.6 TB和MOS對(duì)菊黃東方鲀腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

由表7可知，菊黃東方鲀前腸和后腸的絨毛高度和寬度均隨著TB添加量的增加而增加，在150 mg/kg TB組達(dá)到最大值，其中前腸的絨毛高度顯著高于其他單獨(dú)添加組(P＜0.05)，前腸的絨毛寬度顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)，后腸的絨毛高度和寬度顯著高于對(duì)照組和50 mg/kg TB組(P＜0.05)。聯(lián)合添加組的前腸和后腸的絨毛高度和寬度均高于對(duì)應(yīng)添加量的單獨(dú)添加組，但二者間差異未達(dá)顯著水平(P＞0.05)。前腸和后腸的上皮細(xì)胞高度和微絨毛估計(jì)高度各組間均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。

表7 TB和MOS對(duì)菊黃東方鲀腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響Table 7 Effects of TB and MOS on intestinal morphology and structure of tawny puffer(Takifugu flavindus) μm

3 討論

3.1 TB和MOS對(duì)菊黃東方鲀生長(zhǎng)性能的影響

本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中添加TB對(duì)菊黃東方鲀的生長(zhǎng)具有促進(jìn)作用。Hou等［9］和胡杰［24］研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加TB顯著提高了斷奶仔豬的平均日增重，并降低了料肉比。彭麗莎等［10］在對(duì)肉雞的研究中也獲得了相似的結(jié)果。此外，本試驗(yàn)結(jié)果還表明，與單獨(dú)添加TB相比，同時(shí)添加TB和MOS菊黃東方鲀的生長(zhǎng)性能得到進(jìn)一步提高。研究表明，飼料中單獨(dú)添加MOS能提高歐洲鱸魚(Dicentrarchus labrax)［25］、 鯉 魚 (Cyprinus carpio)［26］、虹鱒(Oncorhynchus mykiss)［27］和紅羅非魚［28］的增重率，降低飼料系數(shù)。游金明等［16］研究發(fā)現(xiàn)，飼糧中添加0.1%丁酸鈉+0.1%MOS組斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能顯著優(yōu)于單獨(dú)添加丁酸鈉或MOS組，而本試驗(yàn)中 50 mg/kg TB+250 mg/kg MOS組菊黃東方鲀表現(xiàn)出最好的生長(zhǎng)性能，說(shuō)明飼料中丁酸與MOS具有協(xié)同促生長(zhǎng)作用，而二者的實(shí)際摩爾比例可能影響受試養(yǎng)殖動(dòng)物的生長(zhǎng)效果。

本試驗(yàn)中，隨著TB添加量的增加，腸道蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活力均先升高后下降，其總的變化趨勢(shì)與飼料效率、增重率和特定生長(zhǎng)率相似，其中100 mg/kg TB組試驗(yàn)魚腸道中3種消化酶的活力均最高，且生長(zhǎng)性能最好。這說(shuō)明適量的TB可能通過(guò)影響消化酶活力，促進(jìn)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收，從而改善菊黃東方鲀的生長(zhǎng)性能，這與其他學(xué)者對(duì)丁酸鈉(主要有效成分為丁酸)在斷奶仔豬上的研究結(jié)果［7］相似。TB在腸道內(nèi)被脂肪酶分解成丁酸、丁酸甘油一酯和甘油［29］。脂肪酸鹽可通過(guò)刺激膽囊收縮素釋放而促進(jìn)胰腺分泌消化酶類［30］，從而提高腸道消化酶活力。而150 mg/kg TB組腸道蛋白酶、脂肪酶和淀粉酶活力均顯著低于100 mg/kg TB組，100 mg/kg TB+250 mg/kg MOS組腸道蛋白酶和淀粉酶活力顯著低于50 mg/kg TB+250 mg/kg MOS組，這可能是由于飼料TB添加過(guò)量或一定量的TB與MOS協(xié)同對(duì)消化酶活力產(chǎn)生負(fù)面影響，其具體機(jī)理還有待進(jìn)一步研究。

3.2 TB和 MOS對(duì)菊黃東方鲀魚體和肝胰腺組成的影響

肝胰腺是營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝的主要器官，因此肝體指數(shù)的大小與動(dòng)物代謝活力有關(guān)［31-32］。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，飼料中單獨(dú)添加TB或聯(lián)合添加TB和MOS后，試驗(yàn)魚魚體和肝胰腺中粗脂肪含量增加，而血清中總膽固醇和甘油三酯含量降低，說(shuō)明TB和MOS的添加促進(jìn)了脂質(zhì)在魚體和肝胰腺中沉積。此外，試驗(yàn)魚的肝體指數(shù)和臟體指數(shù)隨著TB添加量的增加而升高，與魚體和肝胰腺中粗脂肪含量的變化趨勢(shì)一致，而肝胰腺是菊黃東方鲀脂肪沉積的主要器官，也是其最大的內(nèi)臟器官，因此，菊黃東方鲀的肝體指數(shù)和臟體指數(shù)也能間接反映肝胰腺的脂肪水平。

本試驗(yàn)中，隨著飼料中TB添加量的增加，肝糖原的含量呈下降趨勢(shì)，而血清中葡萄糖含量則呈升高趨勢(shì)。這說(shuō)明TB可促進(jìn)菊黃東方鲀肝糖原分解為葡萄糖進(jìn)入血液，為機(jī)體新陳代謝供能。而細(xì)胞利用葡萄糖的主要限速步驟是葡萄糖的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)，這一過(guò)程是依靠細(xì)胞膜上的葡萄糖運(yùn)載體(glucose transporter，GT)來(lái)完成的，而丁酸能夠促進(jìn)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因的表達(dá)，這已被Takano等［33］證實(shí)，因此丁酸可促進(jìn)動(dòng)物體內(nèi)糖的分解代謝。根據(jù)魚體組成和血清總膽固醇與甘油三酯含量數(shù)據(jù)，作者認(rèn)為飼料中添加TB和MOS可能促進(jìn)菊黃東方鲀對(duì)碳水化合物的優(yōu)先利用而節(jié)約脂質(zhì)。另外，與50 mg/kg TB+250 mg/kg MOS組相比，100 mg/kg TB+250 mg/kg MOS組試驗(yàn)魚肝胰腺粗脂肪和血清葡萄糖含量顯著降低，這可能由于該組試驗(yàn)魚的腸道淀粉酶活力較低，影響其對(duì)碳水化合物的吸收，導(dǎo)致其肝糖原和血清葡萄糖含量降低，從而動(dòng)員機(jī)體脂肪分解以維持肝糖原和血糖水平。

3.3 TB和MOS對(duì)菊黃東方鲀血清生化指標(biāo)的影響

血清轉(zhuǎn)氨酶活力是評(píng)價(jià)動(dòng)物肝胰腺健康程度的指標(biāo)［34］。本試驗(yàn)中，飼料中添加TB和MOS降低了試驗(yàn)魚血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶活力，說(shuō)明TB和MOS有利于改善菊黃東方鲀肝胰腺的健康。血清中總蛋白含量在一定程度上反映了機(jī)體的蛋白質(zhì)代謝狀況。已有研究表明，飼料中添加MOS可提高草魚(Ctenopharyngodon idellus)血清中總蛋白含量［35］。在本試驗(yàn)中，飼料中單獨(dú)添加TB或聯(lián)合添加TB和MOS均顯著提高了試驗(yàn)魚的血清總蛋白含量，這說(shuō)明飼料中TB和MOS的添加促進(jìn)了菊黃東方鲀蛋白質(zhì)的沉積。另外，本試驗(yàn)中腸道蛋白酶活力與血清總蛋白含量的變化并不一致，這可能是因?yàn)閺哪c道消化吸收的氨基酸并不是合成蛋白質(zhì)的氨基酸的唯一來(lái)源，因此腸道蛋白酶活力是魚體內(nèi)蛋白質(zhì)合成水平的充分不必要條件。

3.4 TB和MOS對(duì)菊黃東方鲀腸道菌群和形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響

動(dòng)物腸道菌群和形態(tài)結(jié)構(gòu)是評(píng)價(jià)動(dòng)物腸道健康的重要指標(biāo)。本試驗(yàn)中，飼料中單獨(dú)添加TB或聯(lián)合添加TB和MOS均提高了試驗(yàn)魚腸道中需氧異養(yǎng)細(xì)菌和乳酸菌數(shù)量，并降低了弧菌數(shù)量。彭麗莎等［10］研究發(fā)現(xiàn)，在肉雞飼糧中添加TB可顯著增加其盲腸乳酸菌數(shù)量，顯著降低大腸桿菌數(shù)量。Gálfi等［36］和 Castillo 等［37］在斷奶仔豬的飼糧中添加丁酸鈉也得到相似的結(jié)果。這說(shuō)明丁酸能夠選擇性地抑制弧菌等有害菌的增殖，促進(jìn)乳酸菌等有益菌的增殖［38-39］。MOS在腸道能被乳酸桿菌等有益菌特異性利用而促進(jìn)有益菌群大量增殖，有益菌競(jìng)爭(zhēng)性占據(jù)上皮黏膜結(jié)合位點(diǎn)，有效地阻斷了弧菌等有害菌群的定植［25，40-41］。另外，MOS也可以直接與病原菌細(xì)胞表面外源凝集素有效結(jié)合，從而抑制病原菌與腸道上皮的結(jié)合，有利于有益菌的增殖［42］。然而，與單獨(dú)添加TB相比，聯(lián)合添加TB和MOS并沒(méi)有顯著影響腸道各菌群的數(shù)量，說(shuō)明二者對(duì)菊黃東方鲀腸道菌群的影響不存在交互作用。

本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼料中單獨(dú)添加TB或聯(lián)合添加TB和MOS增加了菊黃東方鲀前腸和后腸的絨毛高度和寬度，有利于腸道吸收面積的增加和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化利用率的提高［43］。已有研究表明，飼料中添加丁酸鈉或 MOS可增加肉仔雞［10，44-45］、斷奶仔豬［46］、異帶重牙鯛(Diplodus sargus)［47］及軍曹魚(Rachycent roncanadum)的腸絨毛高度和微絨毛密度，使腸絨毛更加整齊完整［41］。丁酸是腸上皮細(xì)胞的快速能量和黏膜的營(yíng)養(yǎng)因子，可促進(jìn)腸上皮的增殖，修復(fù)受損黏膜上皮［48-49］;而MOS可能通過(guò)促進(jìn)腸道乳酸桿菌等有益菌的增殖，改善腸道內(nèi)環(huán)境，從而有利于腸絨毛的發(fā)育生長(zhǎng)。本試驗(yàn)中，TB和MOS聯(lián)合添加組前腸和后腸的絨毛高度和寬度與對(duì)應(yīng)添加量的TB單獨(dú)添加組相比有增加的趨勢(shì)，說(shuō)明二者在改善菊黃東方鲀腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)上可能存在協(xié)同促進(jìn)作用。

4 結(jié) 論

飼料中添加50 mg/kg TB+250 mg/kg MOS可改善菊黃東方鲀腸道菌群和形態(tài)結(jié)構(gòu)，維護(hù)腸道健康，增強(qiáng)腸道消化酶活力，促進(jìn)碳水化合物的利用而節(jié)約脂質(zhì)，提高飼料效率和生長(zhǎng)性能。

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