張建　蔣細旺

摘 要：以藜蒿莖段為外植體，通過對各組織培養(yǎng)階段中激素種類和濃度的篩選，研究了不同激素使用的必要性及作用。試驗結果表明，最適宜愈傷組織誘導的培養(yǎng)基分別為云南藜蒿MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L、楚天藜蒿MS+6-BA 1.5 mg/L+IAA 1.0 mg/L、香藜一號MS+6-BA 1.5 mg/L+IAA 0.5 mg/L；最適宜的增殖培養(yǎng)基分別為云南藜蒿MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，楚天藜蒿、香藜一號MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L；最適宜的生根培養(yǎng)基為1/2 MS+NAA 0.1 mg/L。

關鍵詞：藜蒿；莖段；快速繁殖；激素；濃度篩選

藜蒿（Artemisia selengensis），別名蔞蒿，蘆蒿，水艾等，為菊科多年生宿根性草本植物[1]，蔞蒿味甘性涼，具有祛風濕、健脾胃、平抑肝火、化痰、助消化等功效[2]。藜蒿營養(yǎng)豐富，據(jù)測定，每100 g嫩莖含有蛋白質(zhì)3.70 g、脂肪0.64 g、鐵2.9 mg、胡蘿卜素 4.0 mg、維生素C 3.73 mg、維生素B 0.28 mg、尼古酸1.27 mg、天門冬氨酸20.4 mg、谷氨酸3.43 mg、賴氨酸0.97 mg，并含有豐富的微量元素和酸性洗滌纖維等[3]。

藜蒿膳食纖維含量高，其TDF（總膳食纖維）占鮮質(zhì)量的3.95%、干莖的50%以上，SDF（可溶性膳食纖維）在總膳食纖維中所占比重較大（SDF/TDF=34.88%），IDF（不溶性膳食纖維）持水性好，溶脹力強，所含果膠比例較高。這些特性表明，藜蒿是極好的膳食纖維源[4，5]。

目前隨著農(nóng)業(yè)種植結構的調(diào)整和市場的需要，在湖北省，藜蒿種植面積也逐年增加。武漢市成為華中地區(qū)藜蒿的優(yōu)勢產(chǎn)區(qū)，特別是在武漢市蔡甸區(qū)，藜蒿已經(jīng)成為當?shù)厝笾鲗厣卟酥弧＾驾锓N植使當?shù)亟?jīng)濟產(chǎn)值顯著提高，當?shù)剞驾锓N植面積達到4 500 hm2 以上，且平均每年每667 m2總產(chǎn)值可達10 000元[6]。

通過對藜蒿進組織培養(yǎng)， 可加快藜蒿的繁殖速度，實現(xiàn)大規(guī)模工廠化生產(chǎn)，保證市場的全年供應，進而為藜蒿藥用、保健等深層次的加工提供原料基礎[7]。

近年來，藜蒿的組織培養(yǎng)集中在以藜蒿幼葉[8，9]、嫩莖[9，10]、離體莖尖[11]、嫩芽[12]等為外植體的研究，本試驗用目前武漢市種植的3個藜蒿主栽品種為材料，以莖段為外植體，研究不同藜蒿品種的最適激素濃度，從而實現(xiàn)藜蒿的高效快速繁殖，為農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結構調(diào)整和農(nóng)業(yè)增效、農(nóng)民增收服務。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

本試驗采用云南藜蒿、楚天藜蒿、香藜一號3個藜蒿品種，材料均由武漢荷香源農(nóng)業(yè)發(fā)展有限公司提供。

1.2 試驗方法

先將藜蒿莖段在流水下沖洗1 h，然后在超凈工作臺上，先用75%的酒精消毒30 s，無菌水沖洗3～4次，再用0.1%升汞（HgCl2）消毒3 min，用無菌水沖洗5～6次，升汞消毒重復2次，將莖段接種在愈傷組織誘導培養(yǎng)基上。

①不同IAA、6-BA濃度對愈傷組織誘導的影響 以MS為基本培養(yǎng)基，附加6-BA（0.5、1.0、 1.5 mg/L）、IAA（0.1、0.5、1.0 mg/L），進行兩因素組合，共計9個組合，并設1組空白對照，記為A1～A10。每個組合5瓶，每瓶接4個莖段。黑暗條件下培養(yǎng)，15 d后開始觀察，統(tǒng)計愈傷組織誘導率、愈傷組織形成所用時間及生長情況。愈傷組織誘導率（%）=形成愈傷組織的莖段數(shù)/接種莖段總數(shù)×100%。

②不同NAA、6-BA濃度對愈傷組織增殖的影響 以MS為基本培養(yǎng)基，研究不同NAA、6-BA濃度對愈傷組織增殖的影響，MS培養(yǎng)基中附加6-BA（0.5、1.0、1.5 mg/L）、NAA（0.1、0.5、1.0 mg/L），共設9個組合，并設1組空白對照，記為B1～B10。30 d后統(tǒng)計增殖系數(shù)，增殖系數(shù)=莖段發(fā)生的不定芽總數(shù)/接種莖段總數(shù)。

③不同IBA、NAA濃度對生根誘導的影響 以1/2 MS為基本培養(yǎng)基，采用二因素四水平完全隨機區(qū)組試驗，分別附加IBA（0.1、0.4、0.7、1.0 mg/L）、NAA（0.1、0.4、0.7、1.0 mg/L），試驗組合分別記為C1～C9。2周后統(tǒng)計生根率、平均根數(shù)、平均根長。

以上培養(yǎng)基中加蔗糖30 g/L、瓊脂7 g/L，高壓滅菌前調(diào)pH值為5.8～6.0，培養(yǎng)溫度為（24±2）℃，日光燈光源光照強度為2 000～2 400 lx，光照時問為16 h/d。繼代周期為30 d，試驗重復3次。

④無菌苗的移栽 將裝有生根的無菌苗的培養(yǎng)瓶移至通風有散射光處煉苗48 h，打開瓶蓋，小心洗凈根部培養(yǎng)基，移栽到消過毒的河沙中，1周后統(tǒng)計成活率。

1.3 數(shù)據(jù)處理及分析

試驗重復3次，數(shù)據(jù)采用SPSS 19.0軟件進行差異顯著性分析（Duncan's新復極差法，p=0.05）。

2 結果與分析

2.1 不同IAA、6-BA濃度對愈傷組織誘導和分化的影響

觀察發(fā)現(xiàn)，接種15 d后，外植體切口處開始膨大并且呈紡錘形，愈傷組織開始分化，20 d左右，愈傷組織的顏色開始變深。較好的愈傷組織質(zhì)地緊密、顏色較深、表面出現(xiàn)較多綠色突點，后期可以形成健壯生長的叢生芽；生長不好的愈傷組織顏色為淺黃綠色，質(zhì)地疏松，體積偏小，后期難以形成健壯的叢生芽，或者叢生芽細小，難以生長。說明不同激素組合對不同品種藜蒿愈傷組織誘導的影響存在顯著差異。

由表1可知，本試驗中不同IAA、6-BA濃度對藜蒿愈傷組織誘導率不同，不同品種達到最高愈傷組織誘導率時，激素濃度組合不相一致。當6-BA濃度為1.0 mg/L、IAA濃度為0.5 mg/L時，云南藜蒿愈傷組織誘導率最高，達到94%，且生長狀況總體較好，而最適合楚天藜蒿和香藜一號愈傷組織誘導的激素濃度分別是6-BA 1.5 mg/L、IAA 1.0 mg/L和6-BA 1.5 mg/L、IAA 0.5 mg/L，且誘導率均能達到96%。大量的試驗表明，外植體的基因型對其再生能力有直接的影響，外植體再生能力由染色體上的基因操控，因此不同基因型的外植體對愈傷組織誘導的最佳培養(yǎng)基是不一樣的[13]。

2.2 不同NAA、6-BA濃度對芽叢增殖的影響

將初代培養(yǎng)的芽叢分離，接種于增殖培養(yǎng)基上，14 d后，芽叢基部開始形成大量幼芽。由表2可以看出，不同濃度的激素組合對藜蒿芽叢增殖的影響差異顯著，并且激素組合對不同品種藜蒿芽叢增殖的影響存在顯著差異。當6-BA濃度為1.0 mg/L、NAA濃度為 0.1 mg/L時，云南藜蒿芽叢增殖系數(shù)最高；而楚天藜蒿、香藜一號芽叢增殖系數(shù)最高時，激素濃度均為6-BA 1.0 mg/L、NAA 0.5 mg/L。

2.3 不同IBA、NAA濃度對生根誘導的影響

將增殖后獲得的較為健壯的組培苗轉入不含激素的MS培養(yǎng)基培養(yǎng)2周，以消除前設激素的影響[14]，然后轉入生根培養(yǎng)基中，15 d后統(tǒng)計生根情況。從表3可以看出，植株生根過程中，NAA對生根的促進作用明顯大于IBA，相同激素濃度下，4個添加NAA的1/2 MS處理的組培苗的生根率與4個添加IBA的1/2 MS處理的相當或更高，4個添加NAA的1/2 MS處理的平均根數(shù)與平均根長也比添加IBA的1/2 MS及空白對照處理提高，說明NAA對藜蒿組培苗根的形成有明顯的促進作用。在NAA濃度為0.1 mg/L時生根率最高，且植株生根數(shù)與根長都是最大的。綜合生根率、平均根數(shù)、平均根長來看，添加0.1 mg/L NAA的1/2 MS培養(yǎng)基的優(yōu)勢最大。

2.4 移栽成苗

當無菌苗長5 cm左右、葉片舒展時，將培養(yǎng)瓶移至室溫通風有散射光處，去除封口膜煉苗48 h，洗凈幼苗根部培養(yǎng)基后移栽到消過毒的河沙中，1周后，幼苗成活率均達到90%以上。

3 結論與討論

藜蒿的組培通過器官發(fā)生途徑實現(xiàn)。在植物組培研究中，如何提高誘導率和增殖系數(shù)一直是各種植物組培快繁技術的關鍵。涂藝聲等[10]研究認為，MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L最適合誘導藜蒿的葉片、莖段形成愈傷組織，以及愈傷組織分化成再生植株，黃白紅[15]研究表明，藜蒿莖葉均適宜作為外植體進行愈傷組織誘導，最佳配方為MS+6-BA 1 mg/L+2，4-D 4 mg/L。本試驗以藜蒿莖段為外植體，結果表明，最適宜愈傷組織誘導的培養(yǎng)基分別為云南藜蒿MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L、楚天藜蒿MS+6-BA 1.5 mg/L+IAA 1.0 mg/L、香藜一號MS+6-BA 1.5 mg/L+IAA 0.5 mg/L。

黃白紅等[9]研究表明，最適宜誘導藜蒿葉叢芽分化的繼代培養(yǎng)基配方為MS+6-BA 4 mg/L+NAA 0.4 mg/L。蔣向輝等[8]篩選出藜蒿叢生芽誘導的最適培養(yǎng)基為 MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.5 mg/L。本試驗結果表明，最適宜的增殖培養(yǎng)基分別為云南藜蒿MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，楚天藜蒿和香藜一號均為 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L。

藜蒿的生根培養(yǎng)直接影響其移栽成活率。涂藝聲等[10]研究認為，MS+NAA 0.5 mg/L 最適合藜蒿外植體誘導生根，黃白紅[15]研究表明，藜蒿叢生苗生根的最佳培養(yǎng)基為1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+IAA

0.5 mg/L。本試驗結果表明，藜蒿最適宜的生根培養(yǎng)基為1/2 MS+NAA 0.1 mg/L；生根培養(yǎng)中，NAA的效果明顯好于IBA，顯著促進生根，這可能是藜蒿無菌苗對IBA較為遲鈍造成，因此，在工廠化育苗中宜選用NAA。

參考文獻

[1] 中國科學院植物研究所.中國高等植物圖鑒[M].北京：科學出版社，1985.

[2] 涂宗財，毛沅文，李志，等.野生藜蒿葉中黃酮類化合物的提取工藝[J].南昌大學學報：工科版，2011，33（3）：234-238.

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[9] 黃白紅，喬乃妮，龔逸，等.藜蒿離體培養(yǎng)再生體系的建立[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2007，35（22）：6 832-6 834.

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[12] 王新華，劉偉，趙恒國.藜蒿組織培養(yǎng)[J].北方園藝，2002（4）：62.

[13] 鞏振輝，申書興.植物組織培養(yǎng).2版[M].北京：化學工業(yè)出版社，2013：13.

[14] 王曉娟，金樑，沈延松，等.萱草再生植株過程中根的誘導[J].復旦學報：自然科學版，2002，41（1）：89-91.

[15] 黃白紅.藜蒿離體培養(yǎng)與試管苗分泌結構的研究[D].長沙：湖南農(nóng)業(yè)大學，2007.

2.2 不同NAA、6-BA濃度對芽叢增殖的影響

將初代培養(yǎng)的芽叢分離，接種于增殖培養(yǎng)基上，14 d后，芽叢基部開始形成大量幼芽。由表2可以看出，不同濃度的激素組合對藜蒿芽叢增殖的影響差異顯著，并且激素組合對不同品種藜蒿芽叢增殖的影響存在顯著差異。當6-BA濃度為1.0 mg/L、NAA濃度為 0.1 mg/L時，云南藜蒿芽叢增殖系數(shù)最高；而楚天藜蒿、香藜一號芽叢增殖系數(shù)最高時，激素濃度均為6-BA 1.0 mg/L、NAA 0.5 mg/L。

2.3 不同IBA、NAA濃度對生根誘導的影響

將增殖后獲得的較為健壯的組培苗轉入不含激素的MS培養(yǎng)基培養(yǎng)2周，以消除前設激素的影響[14]，然后轉入生根培養(yǎng)基中，15 d后統(tǒng)計生根情況。從表3可以看出，植株生根過程中，NAA對生根的促進作用明顯大于IBA，相同激素濃度下，4個添加NAA的1/2 MS處理的組培苗的生根率與4個添加IBA的1/2 MS處理的相當或更高，4個添加NAA的1/2 MS處理的平均根數(shù)與平均根長也比添加IBA的1/2 MS及空白對照處理提高，說明NAA對藜蒿組培苗根的形成有明顯的促進作用。在NAA濃度為0.1 mg/L時生根率最高，且植株生根數(shù)與根長都是最大的。綜合生根率、平均根數(shù)、平均根長來看，添加0.1 mg/L NAA的1/2 MS培養(yǎng)基的優(yōu)勢最大。

2.4 移栽成苗

當無菌苗長5 cm左右、葉片舒展時，將培養(yǎng)瓶移至室溫通風有散射光處，去除封口膜煉苗48 h，洗凈幼苗根部培養(yǎng)基后移栽到消過毒的河沙中，1周后，幼苗成活率均達到90%以上。

3 結論與討論

藜蒿的組培通過器官發(fā)生途徑實現(xiàn)。在植物組培研究中，如何提高誘導率和增殖系數(shù)一直是各種植物組培快繁技術的關鍵。涂藝聲等[10]研究認為，MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L最適合誘導藜蒿的葉片、莖段形成愈傷組織，以及愈傷組織分化成再生植株，黃白紅[15]研究表明，藜蒿莖葉均適宜作為外植體進行愈傷組織誘導，最佳配方為MS+6-BA 1 mg/L+2，4-D 4 mg/L。本試驗以藜蒿莖段為外植體，結果表明，最適宜愈傷組織誘導的培養(yǎng)基分別為云南藜蒿MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L、楚天藜蒿MS+6-BA 1.5 mg/L+IAA 1.0 mg/L、香藜一號MS+6-BA 1.5 mg/L+IAA 0.5 mg/L。

黃白紅等[9]研究表明，最適宜誘導藜蒿葉叢芽分化的繼代培養(yǎng)基配方為MS+6-BA 4 mg/L+NAA 0.4 mg/L。蔣向輝等[8]篩選出藜蒿叢生芽誘導的最適培養(yǎng)基為 MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.5 mg/L。本試驗結果表明，最適宜的增殖培養(yǎng)基分別為云南藜蒿MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，楚天藜蒿和香藜一號均為 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L。

藜蒿的生根培養(yǎng)直接影響其移栽成活率。涂藝聲等[10]研究認為，MS+NAA 0.5 mg/L 最適合藜蒿外植體誘導生根，黃白紅[15]研究表明，藜蒿叢生苗生根的最佳培養(yǎng)基為1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+IAA

0.5 mg/L。本試驗結果表明，藜蒿最適宜的生根培養(yǎng)基為1/2 MS+NAA 0.1 mg/L；生根培養(yǎng)中，NAA的效果明顯好于IBA，顯著促進生根，這可能是藜蒿無菌苗對IBA較為遲鈍造成，因此，在工廠化育苗中宜選用NAA。

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[15] 黃白紅.藜蒿離體培養(yǎng)與試管苗分泌結構的研究[D].長沙：湖南農(nóng)業(yè)大學，2007.

2.2 不同NAA、6-BA濃度對芽叢增殖的影響

將初代培養(yǎng)的芽叢分離，接種于增殖培養(yǎng)基上，14 d后，芽叢基部開始形成大量幼芽。由表2可以看出，不同濃度的激素組合對藜蒿芽叢增殖的影響差異顯著，并且激素組合對不同品種藜蒿芽叢增殖的影響存在顯著差異。當6-BA濃度為1.0 mg/L、NAA濃度為 0.1 mg/L時，云南藜蒿芽叢增殖系數(shù)最高；而楚天藜蒿、香藜一號芽叢增殖系數(shù)最高時，激素濃度均為6-BA 1.0 mg/L、NAA 0.5 mg/L。

2.3 不同IBA、NAA濃度對生根誘導的影響

將增殖后獲得的較為健壯的組培苗轉入不含激素的MS培養(yǎng)基培養(yǎng)2周，以消除前設激素的影響[14]，然后轉入生根培養(yǎng)基中，15 d后統(tǒng)計生根情況。從表3可以看出，植株生根過程中，NAA對生根的促進作用明顯大于IBA，相同激素濃度下，4個添加NAA的1/2 MS處理的組培苗的生根率與4個添加IBA的1/2 MS處理的相當或更高，4個添加NAA的1/2 MS處理的平均根數(shù)與平均根長也比添加IBA的1/2 MS及空白對照處理提高，說明NAA對藜蒿組培苗根的形成有明顯的促進作用。在NAA濃度為0.1 mg/L時生根率最高，且植株生根數(shù)與根長都是最大的。綜合生根率、平均根數(shù)、平均根長來看，添加0.1 mg/L NAA的1/2 MS培養(yǎng)基的優(yōu)勢最大。

2.4 移栽成苗

當無菌苗長5 cm左右、葉片舒展時，將培養(yǎng)瓶移至室溫通風有散射光處，去除封口膜煉苗48 h，洗凈幼苗根部培養(yǎng)基后移栽到消過毒的河沙中，1周后，幼苗成活率均達到90%以上。

3 結論與討論

藜蒿的組培通過器官發(fā)生途徑實現(xiàn)。在植物組培研究中，如何提高誘導率和增殖系數(shù)一直是各種植物組培快繁技術的關鍵。涂藝聲等[10]研究認為，MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 0.5 mg/L最適合誘導藜蒿的葉片、莖段形成愈傷組織，以及愈傷組織分化成再生植株，黃白紅[15]研究表明，藜蒿莖葉均適宜作為外植體進行愈傷組織誘導，最佳配方為MS+6-BA 1 mg/L+2，4-D 4 mg/L。本試驗以藜蒿莖段為外植體，結果表明，最適宜愈傷組織誘導的培養(yǎng)基分別為云南藜蒿MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.5 mg/L、楚天藜蒿MS+6-BA 1.5 mg/L+IAA 1.0 mg/L、香藜一號MS+6-BA 1.5 mg/L+IAA 0.5 mg/L。

黃白紅等[9]研究表明，最適宜誘導藜蒿葉叢芽分化的繼代培養(yǎng)基配方為MS+6-BA 4 mg/L+NAA 0.4 mg/L。蔣向輝等[8]篩選出藜蒿叢生芽誘導的最適培養(yǎng)基為 MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.5 mg/L。本試驗結果表明，最適宜的增殖培養(yǎng)基分別為云南藜蒿MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L，楚天藜蒿和香藜一號均為 MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L。

藜蒿的生根培養(yǎng)直接影響其移栽成活率。涂藝聲等[10]研究認為，MS+NAA 0.5 mg/L 最適合藜蒿外植體誘導生根，黃白紅[15]研究表明，藜蒿叢生苗生根的最佳培養(yǎng)基為1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+IAA

0.5 mg/L。本試驗結果表明，藜蒿最適宜的生根培養(yǎng)基為1/2 MS+NAA 0.1 mg/L；生根培養(yǎng)中，NAA的效果明顯好于IBA，顯著促進生根，這可能是藜蒿無菌苗對IBA較為遲鈍造成，因此，在工廠化育苗中宜選用NAA。

參考文獻

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