秦曉明 柯國琳 楊孔超

·綜述·

黑素細胞移植治療白癜風的研究進展

秦曉明 柯國琳 楊孔超

黑素細胞移植是治療穩(wěn)定期白癜風的方法之一，主要包括培養(yǎng)的黑素細胞移植和表皮細胞懸液移植。近年來動物實驗證實脂肪干細胞可代替角質形成細胞與黑素細胞共培養(yǎng)移植治療白癜風。白癜風患者自體黑素細胞的移植效率可通過皮損周圍皮膚歸巢CD8＋T細胞活動性來進行預測，真皮間充質干細胞可作為黑素細胞移植治療白癜風的輔助劑。本文綜述黑素細胞移植治療白癜風的國內外進展，旨在為臨床提供參考。

白癜風； 黑素細胞； 移植

白癜風是一種需要綜合治療的皮膚病。其病因及發(fā)病機制尚不明確，近年來認為基因遺傳因素、神經學說、自身免疫假說和氧化應激等可直接或間接破壞黑素細胞，引起黑素合成及分布異常，使色素脫失導致白癜風。1對于穩(wěn)定期的局限型、節(jié)段型、散發(fā)型及泛發(fā)型暴露部位的白斑，移植是一種有效的治療手段。白癜風的移植治療主要包括表皮移植和黑素細胞移植。2前者主要是指使用不同的技術使皮膚組織作為一個整體移植到受體區(qū)；而后者則需進一步從皮膚組織中分離出黑素細胞，然后將黑素細胞移植到受體區(qū)。而自體黑素細胞移植又包括非培養(yǎng)的自體黑素細胞移植和培養(yǎng)的自體黑素細胞移植?，F對自體黑素細胞移植治療白癜風的國內外新進展綜述如下。

1 患者的選擇

移植治療白癜風取得良好美容效果的首要因素是選擇合適的患者?？紤]的因素主要包括:患者的年齡、發(fā)病部位、瘢痕體質及是否處在疾病的穩(wěn)定期。3臨床上，白癜風穩(wěn)定期表現為原白斑無擴大，無新發(fā)皮損，無同形反應。IADVL專業(yè)組已達成共識:白癜風患者在過去的一年內白斑無擴大，無新發(fā)皮損，無同形反應為白癜風穩(wěn)定期。4洪為松等5認為白癜風穩(wěn)定期時間越長，移植療效越好。近年來研究發(fā)現在過去的18個月內白斑無擴大，無新發(fā)皮損，無同形反應的白癜風患者更適合進行移植手術。6

2 黑素細胞移植

2.1 非培養(yǎng)的自體黑素細胞移植 非培養(yǎng)的自體黑素細胞移植是指表皮細胞懸液移植，該表皮細胞懸液是由角質形成細胞和黑素細胞組成的混合物，是一種相對簡單的細胞移植治療白癜風的方法。1992年Galus等7首先報道用含角質形成細胞的非培養(yǎng)黑素細胞移植治療白癜風取得成功。1998年 Olsson和Juhlin也用表皮細胞懸液移植成功治療白癜風。8隨后該技術被改進和普遍應用，包括三個主要步驟:9(1)通過刃厚皮片移植或負壓吸皰移植取供皮區(qū)皮膚；(2)制備富含黑素細胞的基底細胞懸液；(3)受皮區(qū)磨皮或者通過CO2激光磨削后將表皮細胞懸液移植于該區(qū)。同表皮移植相比該法具有以少量供皮區(qū)治療較大范圍皮損的優(yōu)點，受皮區(qū)與供皮區(qū)面積比可達1∶8～1∶10。10此外該移植技術的復色效果佳，可以達到更好的美容效果。11但同時它具有以下缺點:3(1)需要特定的細胞培養(yǎng)基生化試劑及媒介；(2)同表皮移植相比花費更高；(3)手術室需配備培養(yǎng)箱、離心機及用于制備細胞懸液的無菌環(huán)境；(4)耗時較長。

非培養(yǎng)的自體黑素細胞移植治療白癜風欲取得良好效果需注意以下幾方面:(1)確保胰蛋白酶消化完全，如果胰蛋白消化不完全，可延長孵育時間；12胰

蛋白有冷熱兩種消化方法，冷消化法分離的細胞數量多，熱消化法耗時少；13(2)將透明質酸摻入到表皮細胞懸液中以增加其黏著性，以使其在移植床部位穩(wěn)定的附著；14(3)確保表皮細胞懸液均勻的涂于移植床部位，以減少復色區(qū)色素不均的可能性；3(4)表皮細胞懸液中的細胞成分需保持在理想的水平，以防止移植床部位色素過度沉著或者色素減退。供皮區(qū)和受皮區(qū)面積之比為1∶10可以達到最佳的復色效果，但是其科學性還有待驗證；14(5)術后采用NB－UVB或PUVA照射可以加快復色的進程，而一些學者僅僅在復色延遲時才使用這些補充治療；12，14(6)術中使用膠原蛋白敷料可以改善復色效果；3(7)通過計算所需表皮細胞懸液中黑素細胞數量可以得出供皮區(qū)面積:取得滿意復色效果的黑素細胞數量為210～250/mm2。15

2.2 培養(yǎng)的自體黑素細胞移植 1987年Jeong等16首次成功應用培養(yǎng)的自體黑素細胞移植治療白癜風。具體方法是:用胰蛋白酶分離表皮，然后分離出黑素細胞，將黑素細胞放于含有生長因子的黑素細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)15～30天后，將黑素細胞懸液移植到受體區(qū)。12該方法的最大優(yōu)點是以較小的取皮面積治療較大范圍的皮損，受皮區(qū)與供皮區(qū)面積比可達1∶80～1∶100。17但此種方法的復色效果并不優(yōu)于非培養(yǎng)的自體黑素細胞移植。此外培養(yǎng)的自體黑素細胞移植還有以下缺點:(1)實驗室條件要求高，要有相應的人力、物力、技術等各方面的條件支持；(2)細胞培養(yǎng)基中的某些成分特別是TPA可以導致細胞突變；(3)對患者來說治療費用相對較高。

2.3 角質形成細胞和黑素細胞共培養(yǎng)移植 1988年Lee等首次成功地建立角質形成細胞和黑素細胞體外共培養(yǎng)。18Andreassi等將黑素細胞和角質形成細胞共培養(yǎng)于經苯甲醇完全酯化的透明質酸生物聚合膜，移植治療11例非泛發(fā)型白癜風患者，1個月后即有色素再生征象，至18個月時有6例色素完全再生。19角質形成細胞分泌的α－黑素細胞刺激素、促腎上腺皮質激素、堿性成纖維細胞生長因子、神經生長因子、內皮素、粒細胞－巨噬細胞集落刺激因子、肝細胞生長因子等能通過受體介導的信號轉導途徑調節(jié)黑素細胞的增殖和分化。且黑素細胞可在移植部位形成色素沉著，而角質形成細胞保證了傷口快速愈合而不留瘢痕，可獲得較佳的復色效果和皮損的完美愈合。20

2.4 脂肪干細胞與黑素細胞共培養(yǎng)移植 近年來研究發(fā)現，脂肪干細胞可以用來代替角質形成細胞與黑素細胞共培養(yǎng)移植治療白癜風。Kim等通過用免疫組化和Boyeden小室等方法研究了脂肪干細胞對黑素細胞增殖、分化、遷移的影響。21通過共培養(yǎng)黑素細胞和脂肪干細胞發(fā)現，脂肪干細胞可以明顯刺激黑素細胞的增殖和遷移，盡管由脂肪干細胞誘導黑素細胞的增殖和移行不及角質形成細胞，但卻優(yōu)于黑素細胞單獨培養(yǎng)。這可能與脂肪干細胞可分泌干細胞因子、堿性成纖維細胞生長因子等有關。

Lim等22通過向裸小鼠和SD大鼠移植原代培養(yǎng)的人黑素細胞和不同比例原代培養(yǎng)的人脂肪干細胞，進一步驗證了黑素細胞移植復色的耐久性及近期的安全性。培養(yǎng)的黑素細胞和脂肪干細胞按1∶1、1∶2、1∶3的比例混合移植，復色效果均優(yōu)于純黑細胞培養(yǎng)移植。其中黑素細胞和脂肪干細胞按1∶1及1∶2比例混合移植時，復色效果最佳。黑素細胞和脂肪干細胞共培養(yǎng)移植的效果與培養(yǎng)的黑素細胞混合培養(yǎng)的脂肪干細胞移植膚色效果相同。

2.5 CD8＋T細胞及真皮間充質干細胞與黑素細胞移植 Rao等23發(fā)現白癜風疾病活動期皮損中細胞毒性CD8＋T細胞的數量明顯高于穩(wěn)定期，皮損周邊的CD8＋T細胞數量同黑素細胞移植治療白癜風的效率相關，干擾CD8＋T細胞活性可能對黑素細胞移植治療白癜風有益。白癜風皮損周邊的CD8＋T細胞可以誘導自體黑素細胞凋亡，表明CD8＋T細胞在白癜風的發(fā)病機制中有重要作用。24Zhou等25研究了23例進行自體黑素細胞移植的白癜風患者，其中12例患者復色效果滿意(恢復正常膚色的面積/原皮損面積≥90%)，6例患者復色效果良好(恢復正常膚色的面積/原皮損面積≥50%～89%)，5例患者復色效果一般或者較差(恢復正常膚色的面積/原皮損面積＜50%)。所有患者皮損周圍均有CD8＋T細胞浸潤，且移植效率同皮膚歸巢CD8＋T細胞活動性密切相關。皮損周邊CD8＋T細胞數量越多或其分泌的細胞因子、趨化因子越多則復色效果越差。體外實驗中，他們成功分離并鑒定出人類真皮間充質干細胞和皮膚歸巢CD8＋T細胞，并且建立了真皮間充質干細胞和皮膚歸巢CD8＋T細胞共培養(yǎng)體系，發(fā)現真皮間充質干細胞可抑制CD8＋T細胞增殖，誘導CD8＋T細胞凋亡并調節(jié)CD8＋T細胞相關細胞因子及趨化因子的分泌。這些研究結果表明，白癜風患者自體黑素細胞的移植效率可通過皮損周圍皮膚歸巢CD8＋T細胞活動性來進行預測，真皮間充質干細胞可能被用作自體黑素細胞移植的輔助劑。

3 結語

綜上所述，黑素細胞移植是治療穩(wěn)定期白癜風的方法之一，治療面積大，復色效果好，值得臨床推廣應用。同時脂肪干細胞代替角質形成細胞與黑素細胞共培養(yǎng)移植治療白癜風的安全性及療效已在動物實驗中被證實，真皮間充質干細胞在黑素細胞移植治療白癜風方面也有重要作用，這些為黑素細胞移植治療白癜風提供了新的思路。

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(收稿:2014－12－06 修回:2014－12－24)

Updata on transp lantion of melanocytes in the treatment of vitiligo

QIN Xiao-ming，KE Guo-lin，YANG Kong-chao.The Second Affiliated Hospital ofWangnan Medical College Dermatology，AnhuiWuhu，241000

Transplantion ofmelanocytes is one of the methods in the treatment of vitiligo at stable stage，including cultured melanocyte transplantation and epidermal cells suspension transplantation.Co－culturing of melanocyteswith adipose－derived stem cells may be a potential substitute for co－culturing with keratinocytes.The efficiency of autologousmelanocytes transplantation in vitiligo patientsmay be predicted by perilesional skin－h(huán)oming CD8＋T cell activities and the dermalmesenchymal stem cellsmight be used as auxiliary agent to improve the efficacy.The progress on transplantion ofmelanocytes in the treatment of vitiligo is reviewed.

vitiligo；melanocytes；transplantion

皖南醫(yī)學院第二附屬醫(yī)院皮膚性病科，安徽蕪湖，241000