文│金遵 趙宗勝 袁聰 于要升 曹少奇 雷小萍（新疆石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院）

MBL對(duì)綿羊肺炎支原體抗性的影響

文│金遵 趙宗勝 袁聰 于要升 曹少奇 雷小萍（新疆石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院）

甘露糖結(jié)合凝集素（MBL）屬于凝集素家族，是機(jī)體先天性免疫的重要成分，有激活補(bǔ)體系統(tǒng)、調(diào)理吞噬等作用，并與許多免疫相關(guān)性疾病有關(guān)。為了揭示湖羊不同MBL基因型與綿羊肺炎支原體抗性的相關(guān)性，本研究在對(duì)中國(guó)美利奴羊MBL基因多態(tài)性分析的基礎(chǔ)上，利用ELISA方法檢測(cè)湖羊的綿羊支原體肺炎抗體水平，通過(guò)t檢驗(yàn)對(duì)湖羊MBL基因外顯子1同一基因型在綿羊支原體肺炎陽(yáng)性和陰性的個(gè)體中的基因型頻率進(jìn)行差異顯著分析。

一、材料和方法

1.試驗(yàn)樣品。湖羊血樣采自新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)第九師某羊場(chǎng)共105只。使用一次性肝素鈉抗凝采血管頸靜脈采血5毫升，-20℃保存。采用一次性真空采血管（不加抗凝劑）采血3毫升分離血清。

2.試驗(yàn)方法。

（1）綿羊支原體肺炎抗體ELISA血清學(xué)檢測(cè)。按ELISA試劑盒（美國(guó)ADL公司）說(shuō)明操作，進(jìn)行湖羊MBL支原體抗體檢測(cè)。

（2）綿羊MBL基因外顯子1基因分型。根據(jù)電泳圖譜，依照文獻(xiàn)報(bào)道的分型方法對(duì)各條帶帶型進(jìn)行分析。

3.數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析。湖羊MBL基因外顯子1同一基因型在綿羊支原體肺炎陰性和陽(yáng)性個(gè)體上基因頻率的顯著性差異比較，采用t檢驗(yàn)；用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，以P＜0.05代表差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果和分析

1.湖羊綿羊支原體肺炎抗體檢測(cè)。經(jīng)綿羊支原體肺炎ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果表明，105只湖羊中綿羊支原體肺炎陰性為35只，陽(yáng)性為70只，但陽(yáng)性抗體水平比較低。

2.綿羊MBL基因外顯子1基因分型。根據(jù)電泳圖譜，依照之前報(bào)道的分型方法對(duì)各條帶帶型進(jìn)行分析。MB外顯1的SSCP分型，出現(xiàn)了4種基因型，由3種等位基因控制。基因型為：AA、BB、CC和BC，由A、B、C三種等位基因控制。

3.湖羊MBL基因外顯子1多態(tài)性與綿羊支原體肺炎的抗性關(guān)聯(lián)分析。MBL基因外顯子1在綿羊支原體肺炎陽(yáng)性和陰性的湖羊個(gè)體中會(huì)出現(xiàn)一致的基因型，將它們之間的基因型頻率進(jìn)行差異顯著分析（t檢驗(yàn)）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，湖羊中，CC型在健康組中較多（P＜0.01），推測(cè)是綿羊支原體肺炎的抗性基因型。AA和BB在綿羊支原體肺炎組中較多（P＜0.01），提示是綿羊支原體肺炎的易感基因型。

三、結(jié)論與討論

綿羊支原體肺炎呈流行性，接觸傳染性疾病，以冬春季節(jié)發(fā)病較多。發(fā)病率高，死亡率低，可耐過(guò)，但增重緩慢。自2000年新疆引進(jìn)大批湖羊后，大范圍爆發(fā)，導(dǎo)致湖羊死亡，并傳染給其他品種，且康復(fù)的羊也是長(zhǎng)期帶菌者，該病不易消滅和清除，嚴(yán)重影響了新疆養(yǎng)羊業(yè)的生產(chǎn)和發(fā)展。MBL屬于凝集素家族，是機(jī)體先天性免疫的重要成分，有激活補(bǔ)體系統(tǒng)、調(diào)理吞噬等作用，并與許多免疫相關(guān)性疾病有關(guān)。近年來(lái)MBL作為天然免疫第一線的一種防御分子在各種感染性疾病中的作用倍受關(guān)注。

目前，用于檢測(cè)綿羊支原體的方法主要包括分離培養(yǎng)法、電鏡法、血清學(xué)方法和分子生物學(xué)方法。血清學(xué)方法因簡(jiǎn)單、靈敏、快速、不出現(xiàn)假陽(yáng)性等優(yōu)點(diǎn)，因此被國(guó)內(nèi)外廣泛使用。本研究對(duì)采集回來(lái)的湖羊血清樣品進(jìn)行綿羊支原體肺炎ELISA抗體水平檢測(cè)，67%的湖羊呈陽(yáng)性，但抗體水平不高，可能所采集的個(gè)體曾經(jīng)感染過(guò)綿羊肺炎支原體，為隱性感染，抗體檢測(cè)陽(yáng)性，但并未發(fā)病，無(wú)臨床癥狀出現(xiàn)。

湖羊外顯子1不同基因型與血清水平的相關(guān)性表明，MBL基因不同的基因型決定不同的MBL血清水平表達(dá)，而本試驗(yàn)證實(shí)MBL基因不同基因型對(duì)綿羊支原體肺炎的易感性不同，建立了湖羊MBL不同基因型，MBL血清水平及綿羊支原體肺炎三者之間的關(guān)系。初步得出結(jié)論，AA型和BB型，血清水平較低，與綿羊支原體肺炎易感性相關(guān)；CC型，血清水平較高，與綿羊支原體肺炎抗性相關(guān)。