劉 虹 陳 燕 趙海鵬

（濰坊市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東 濰坊 261205）

高效液相色譜法測(cè)定藥品有關(guān)物質(zhì)時(shí)的操作要點(diǎn)

劉 虹 陳 燕 趙海鵬

（濰坊市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，山東 濰坊 261205）

高效液相色譜法，通常能夠非常準(zhǔn)確的實(shí)現(xiàn)藥品中有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定。其實(shí)驗(yàn)較為精密，結(jié)果較為準(zhǔn)確，所以該方法被廣泛的應(yīng)用于藥品的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定。本文主要對(duì)該方法使用時(shí)的操作要點(diǎn)來進(jìn)行討論。

高效液相色譜法；藥品有關(guān)物質(zhì)；操作要點(diǎn)

有關(guān)物質(zhì)是指在藥物的制備和貯存過程中引入的有機(jī)雜質(zhì)，它直接影響了藥物的純度，使得藥物的療效降低，還會(huì)產(chǎn)生其他不良反應(yīng)，因此，檢測(cè)有關(guān)物質(zhì)、控制純度是確保用藥安全、有效，保證藥物質(zhì)量的一個(gè)重要方面。由于有關(guān)物質(zhì)的含量較少，所以選擇專屬性強(qiáng)、靈敏度高、重現(xiàn)性好的檢測(cè)方法至關(guān)重要。目前常用的方法是高效液相色譜法，本文主要討論高效液相色譜法測(cè)定藥品有關(guān)物質(zhì)時(shí)的操作要點(diǎn)。

1 溶液的配置

主成分自身對(duì)照法通常情況下配置1份對(duì)照及供試溶液即可。雜質(zhì)對(duì)照品的外標(biāo)法最好配置2份溶液，特別是邊緣產(chǎn)品，要多次進(jìn)樣。

2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

該實(shí)驗(yàn)是藥品中有關(guān)物質(zhì)測(cè)定中的重要步驟，只有符合相關(guān)要求的系統(tǒng)適用性，才能夠使得測(cè)定的結(jié)果科學(xué)而準(zhǔn)確。系統(tǒng)適用性通常有4個(gè)相關(guān)的參數(shù)，其中拖尾因子、分離度、是較為重要的2個(gè)參數(shù)，在這里將進(jìn)行詳細(xì)的描述。

2.1 拖尾因子：通過反相HPLC法來進(jìn)行藥品中的有關(guān)物質(zhì)測(cè)定的時(shí)候，通常都會(huì)使用峰面積，而忽視拖尾因子，但是如果拖尾因子較大，實(shí)際上是不僅導(dǎo)致峰面積不準(zhǔn)確，而且還會(huì)影響雜質(zhì)峰的檢出，所以應(yīng)對(duì)其加以關(guān)注并進(jìn)行控制。

2.2 分離度：該項(xiàng)是藥品中有關(guān)物質(zhì)測(cè)定時(shí)的重要指標(biāo)，除藥品標(biāo)準(zhǔn)中有特殊要求外，一般情況下的主成分峰和附近雜質(zhì)峰分離度應(yīng)該＞1.5，否則峰面積的積分會(huì)不準(zhǔn)確。

3 溶劑峰

溶劑峰是指高效液相色譜檢測(cè)出的溶解樣品所用的溶劑的峰。通常情況下供試品溶液和對(duì)照溶液都會(huì)出現(xiàn)這樣的峰。判斷是否溶劑峰，可以在基線平穩(wěn)的情況下，單獨(dú)進(jìn)溶劑，在溶劑出峰的位置，供試品溶液是不作為雜質(zhì)峰計(jì)算的。

4 色譜圖記錄時(shí)間

色譜圖記錄的時(shí)間分為兩種情況，一種是按照各品種項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定時(shí)間。另一種則是沒有做相應(yīng)的時(shí)間規(guī)定，在此情況下就要根據(jù)主成分的保留時(shí)間來確定，其中溶劑與供試品溶液的時(shí)間記錄是相同的，應(yīng)該是主成分色譜峰保留時(shí)間的2倍。

5 檢測(cè)靈敏度

高效液相色譜分兩種數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。第一種便是積分儀，積分儀是一種較為傳統(tǒng)的方式，因?yàn)橛涗泝x的最大量程是一個(gè)固定值，所以要調(diào)節(jié)峰高達(dá)到滿量程的范圍，才可以實(shí)現(xiàn)靈敏度的監(jiān)測(cè)。另外一種則是現(xiàn)在常用的色譜工作站，因?yàn)橛涗泝x的量程是可變化的，所以調(diào)節(jié)量程和靈敏度的關(guān)系不大。其只不過是對(duì)圖譜進(jìn)行了放大，可以按照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的要求調(diào)節(jié)，通過放大的圖譜能夠更為清晰的辨別供試液中的雜質(zhì)峰。

6 積分參數(shù)

對(duì)于積分參數(shù)，通常情況下是按照標(biāo)準(zhǔn)的規(guī)定舍去很小的峰。（如＜0.05的峰）。如果是沒有相關(guān)的要求，那么比相應(yīng)的對(duì)照溶液的主峰面積小得多的峰，通常是可以忽略不計(jì)的，其最小積分參數(shù)的確定，可以通過兩種方法來進(jìn)行。第一種是利用紫外線、可見光檢測(cè)儀來進(jìn)行，以0.0005AU作為基線要求，三倍的信噪比作為濃度的檢測(cè)限，那么對(duì)＜0.0015AU峰高的則不用進(jìn)行積分，否則的話是要進(jìn)行積分的。但是此種方法往往會(huì)產(chǎn)生一定的偏差，并不是十分的準(zhǔn)確，所以可以采用下面的一種方法。第二種方法便是稀釋對(duì)照溶液，通過相應(yīng)溶液的配置來進(jìn)行色譜系統(tǒng)監(jiān)測(cè)限的確定，其檢測(cè)限確定所使用的信噪比為3∶1，通過檢測(cè)限的峰面積來確定積分的限值。

7 計(jì) 算

有關(guān)雜質(zhì)限量要求通常有兩種情況，一種是自身對(duì)照，一種是已知雜質(zhì)的外標(biāo)法計(jì)算。自身對(duì)照的表達(dá)通常有兩種，就是“雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積”，和“雜質(zhì)峰面積不得大于對(duì)照溶液主峰面積的n倍（n%），”這兩種都是用峰面積直接比較即可。外標(biāo)法的雜質(zhì)限量一般是要進(jìn)行計(jì)算，根據(jù)其峰面積和濃度計(jì)算出雜質(zhì)為標(biāo)示量的n%，從而跟限度進(jìn)行比較。

8 結(jié) 語

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)于藥物的安全性要求越來越高，而藥品中有關(guān)物質(zhì)的測(cè)定，能保證人們用藥的安全有效。高效液相色譜法是藥品中有關(guān)物質(zhì)測(cè)定的一種常用而準(zhǔn)確的方法，但是準(zhǔn)確的前提是，人們?cè)谶M(jìn)行測(cè)定實(shí)驗(yàn)時(shí)能夠嚴(yán)格按照相關(guān)操作要點(diǎn)來進(jìn)行。在上文中進(jìn)行了多個(gè)測(cè)試操作要點(diǎn)的分析討論，希望可以在相關(guān)的實(shí)驗(yàn)上起到一定的指導(dǎo)作用。

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