劉長明 張征

（承德市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，河北 承德 067000）

壯骨止痛方無水乙醇提取A部位對(duì)去勢(shì)雌鼠骨質(zhì)疏松模型的療效分析

劉長明 張征

（承德市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，河北 承德 067000）

目的：通過建立去卵巢雌鼠骨質(zhì)疏松模型，研究壯骨止痛方無水乙醇提取A部位對(duì)骨質(zhì)疏松癥的療效。方法：選取250 g左右的SD雌性大鼠60只，按體質(zhì)量隨機(jī)分為正常組、假手術(shù)組、模型組、壯骨止痛方組與壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組。各組均于5 d拆線后給藥，連續(xù)13周。從骨密度、骨生物力學(xué)、血清雌激素（E2）、甲狀旁腺激素（PTH）、降鈣素（CT）、骨鈣素（BGP）水平及光鏡下骨小梁形態(tài)方面對(duì)其療效進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果：壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組大鼠的股骨密度與腰椎骨密度顯著高于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組大鼠的脛骨最大應(yīng)力與脛骨最大抗彎強(qiáng)度較模型組顯著增強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）。與模型組大鼠相比，壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組的血清E2有顯著增高的趨勢(shì)，而PTH，CT，BGP顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）。結(jié)論：壯骨止痛方無水乙醇提取A部位可有效改善骨韌性，提高骨骼抵抗外力沖擊的能力，對(duì)于骨質(zhì)疏松癥具有較好療效。

壯骨止痛方無水乙醇提取A部位；骨質(zhì)疏松；療效

骨質(zhì)疏松癥（osteoporosis，OP）是指以骨量減少、骨組織微細(xì)結(jié)構(gòu)破壞為主要特征，骨礦物質(zhì)和骨基質(zhì)比例減少，導(dǎo)致骨骼脆性增加的一種全身性疾病。臨床主要表現(xiàn)為腰背疼痛、易發(fā)生骨折等[1]。據(jù)統(tǒng)計(jì)我國目前女性原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病率已高達(dá)90.48%，尤其多發(fā)于絕經(jīng)后婦女。因此找到一種有效預(yù)防及治療女性骨質(zhì)疏松癥的途徑，已成為當(dāng)前亟需解決的課題[2]。壯骨止痛方為傳統(tǒng)方劑，具有補(bǔ)腎氣、溫腎陽、壯骨止痛的功效[3]。本研究對(duì)壯骨止痛方中無水乙醇提取A部位對(duì)去勢(shì)雌鼠骨質(zhì)疏松模型的骨質(zhì)影響進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分析，以探討后者對(duì)于骨質(zhì)疏松癥治療中的臨床價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

3月齡SD雌性大鼠60只，體質(zhì)量均在250 g左右，由××省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 方法

1.2.1 造模方法 適應(yīng)性飼養(yǎng)1 w，隨機(jī)分出空白組和假手術(shù)組各15只，模型組、壯骨止痛方組、壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組各10只。除空白組外，其余大鼠均用2%的戊巴比妥鈉麻醉，假手術(shù)組僅在卵巢周圍切除相應(yīng)質(zhì)量的脂肪，其余摘除雙側(cè)卵巢，縫合傷口。術(shù)后連續(xù)3 d肌注青霉素（4萬U/d）。飼養(yǎng)室溫為23～ 25℃，相對(duì)濕度為50%～70%。

1.2.2 給藥方法 各組均于5 d拆線后給藥，ig，qd，連續(xù)13 w。假手術(shù)組、空白組和模型組相應(yīng)體積冷開水和植物油ig，qd；其余各組相應(yīng)藥物（水相6 m L/kg；油相4 m L/kg）ig，qd。壯骨止痛方相當(dāng)于生藥13.2 g/kg，ig，qd，無水乙醇提取A部位0.12 g/kg，ig，qd。

1.2.3 檢測(cè)指標(biāo)及方法 ①13 w后所有大鼠均腹腔注射2%戊巴比妥鈉麻醉。取右側(cè)股骨、第2～ 4腰椎，以Unigamma骨密度儀檢測(cè)骨密度。②取左側(cè)脛骨作骨生物力學(xué)檢測(cè)，包括骨最大彈性應(yīng)力、最大抗彎強(qiáng)度等指標(biāo)。③腹部切口，分離腹主動(dòng)脈，用負(fù)壓采血管采血，離心取血清，采用放射免疫法檢測(cè)雌激素（E2），甲狀旁腺激素（PTH），降鈣素（CT），骨鈣素（BGP）等。④光鏡下觀察左側(cè)股骨骨小梁形態(tài)學(xué)變化。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 骨密度檢測(cè)比較

股骨密度檢測(cè)結(jié)果顯示，空白組與模型組比較，t=19.96，P＜0.001；假手術(shù)組與模型組比較，t=9.69，P＜0.001；壯骨止痛方組與模型組比較，t=14.11，P＜0.001；壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組與模型組比較，t=10.27，P＜0.001。腰椎骨密度檢測(cè)結(jié)果顯示，空白組與模型組比較，t=11.70，P＜0.001；假手術(shù)組與模型組比較，t= 15.54，P＜ 0.001；壯骨止痛方組與模型組比較，t= 10.13，P＜ 0.001；壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組與模型組比較，t=9.56，P＜ 0.001。壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組大鼠的股骨密度與腰椎骨密度顯著高于模型組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）；空白組與模型組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）。見表1。

2.2 骨生物力學(xué)檢測(cè)比較

脛骨最大應(yīng)力檢測(cè)結(jié)果顯示，空白組與模型組比較，t=9.19，P＜ 0.001；假手術(shù)組與模型組比較，t=9.44，P＜0.001；壯骨止痛方組與模型組比較，t=13.77，P＜0.001；壯骨止痛方無水乙醇提取 A部位組與模型組比較，t=13.32，P＜0.001。脛骨最大抗彎強(qiáng)度檢測(cè)結(jié)果顯示，空白組與模型組比較，t=7.84，P＜0.001；假手術(shù)組與模型組比較，t=6.25，P＜0.001；壯骨止痛方組與模型組比較，t=7.39，P＜ 0.001；壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組與模型組比較，t=9.86，P＜0.001。壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組大鼠的脛骨最大應(yīng)力與脛骨最大抗彎強(qiáng)度較模型組顯著增強(qiáng)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜ 0.05）?？瞻捉M與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表1 骨密度檢測(cè)比較

表2 骨生物力學(xué)檢測(cè)比較

2.3 血清E2，PTH，CT，BGP水平比較

血清E2檢測(cè)結(jié)果顯示，空白組與模型組比較，t=12.77，P＜ 0.001；假手術(shù)組與模型組比較，t=20.61，P＜0.001；壯骨止痛方組與模型組比較，t=8.57，P＜ 0.001；壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組與模型組比較，t=5.67，P＜ 0.001。PTH檢測(cè)結(jié)果顯示，空白組與模型組比較，t=7.58，P＜0.001；假手術(shù)組與模型組比較，t= 8.82，P＜0.001；壯骨止痛方組與模型組比較，t=7.20，P＜ 0.001；壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組與模型組比較，t=4.13，P＜ 0.001。CT檢測(cè)結(jié)果顯示，空白組與模型組比較，t=4.78，P＜ 0.001；假手術(shù)組與模型組比較，t=2.36，P=0.028；壯骨止痛方組與模型組比較，t=4.93，P＜ 0.001；壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組與模型組比較，t=6.19，P＜0.001。BGP檢測(cè)結(jié)果顯示空白組與模型組比較，t=5.17，P＜ 0.001；假手術(shù)組與模型組比較，t=4.59，P＜ 0.001；壯骨止痛方組與模型組比較，t=3.65，P＜ 0.001；壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組與模型組比較，t= 3.26，P=0.004。與模型組大鼠相比，壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組的血清E2增高，而PTH，CT，BGP顯著下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）?？瞻捉M與模型組比較，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 血清E2，PTH，CT，BGP水平比較

3 討論

骨質(zhì)疏松癥最突出的臨床表現(xiàn)即為骨脆性增加導(dǎo)致骨折風(fēng)險(xiǎn)增高[4]。女性在絕經(jīng)后由于雌激素水平低下，大量骨礦物質(zhì)丟失，發(fā)生骨小梁變細(xì)、穿孔甚至消失等退行性改變，骨體積下降[5-7]。同時(shí)骨礦物含量的減少也造成了骨小梁本身材料性能的改變，骨小梁正常的生物力學(xué)結(jié)構(gòu)和性能遭到破壞，強(qiáng)度下降，特定的承載部位如股骨頸等無法承受正常載荷，輕微外力作用即可發(fā)生骨折[8-10]。

壯骨止痛方無水乙醇提取A部位為補(bǔ)骨脂和女貞子的提取物。補(bǔ)骨脂具有較強(qiáng)的雌激素作用[11]。有文獻(xiàn)報(bào)道，補(bǔ)骨脂95%乙醇提取物具有增強(qiáng)成骨細(xì)胞的增殖以及堿性磷酸酶（ALP）活性的作用，可明顯增進(jìn)成骨細(xì)胞的生長以及ALP的分泌，從而發(fā)揮有效的防治骨質(zhì)疏松的作用[12-13]。此外女貞子具有促成骨細(xì)胞增殖作用[14]。研究發(fā)現(xiàn)，女貞子在促成骨細(xì)胞增殖方面作用比淫羊藿更強(qiáng)，提示以女貞子為代表的補(bǔ)腎陰類藥物對(duì)骨質(zhì)疏松癥同樣有較好的治療作用[15]。

本實(shí)驗(yàn)中所采用的由雌鼠去勢(shì)造成絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥模型的方法已被國內(nèi)外所公認(rèn)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與空白組和假手術(shù)組相比，模型組大鼠的股骨和腰椎骨密度顯著下降（P＜ 0.05），血清學(xué)檢測(cè)血清E2水平亦較正常組與假手術(shù)組顯著降低（P＜ 0.05），說明絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥病理模型造模成功。給藥后，與模型組比較，壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組的骨密度顯著增加（P＜0.05），同時(shí)脛骨最大應(yīng)力與脛骨最大抗彎強(qiáng)度顯著增強(qiáng)（P＜ 0.05），說明壯骨止痛方無水乙醇提取A部位增加了大鼠的骨量，提高了骨的機(jī)械性能，增強(qiáng)了骨的承載能力，提高了骨的生物力學(xué)性能和骨強(qiáng)度。此外與模型組大鼠相比，壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組的血清E2有顯著增高的趨勢(shì)，而PTH，CT，BGP顯著下降，提示壯骨止痛方無水乙醇提取A部位具有促進(jìn)骨形成，降低骨轉(zhuǎn)換，抑制骨吸收的作用。

光鏡下顯示，正常組與假手術(shù)組大鼠骨小梁分布均勻，梁髓比正常；模型組骨小梁稀疏，骨髓腔擴(kuò)大，梁髓比明顯下降。壯骨止痛方無水乙醇提取A部位組骨小梁密度分布比較均勻，梁髓比基本正常，鏡下可見成骨細(xì)胞，提示壯骨止痛方無水乙醇提取A部位能有效逆轉(zhuǎn)骨質(zhì)疏松模型雌大鼠的骨組織病理改變。

總之，壯骨止痛方無水乙醇提取A部位可有效增加骨密度和骨強(qiáng)度，其作用機(jī)制或許在于發(fā)揮雌激素樣作用，可在一定程度上改善由于雌激素缺乏所造成的激素代謝紊亂現(xiàn)象，通過調(diào)節(jié)細(xì)胞因子起到降低轉(zhuǎn)換，促進(jìn)骨形成的作用，從而增加去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠的骨密度和骨強(qiáng)度。文獻(xiàn)報(bào)道指出[16]，無水乙醇提取 A部位已被證實(shí)為是壯骨止痛方的主要藥效部位，除此之外，壯骨止痛方還含有無水乙醇提取B部位、石油醚提取A部位、水提A部位、水提B部位、乙酸乙酯提取A部位等有效部位。

綜上所述，證實(shí)壯骨止痛方無水乙醇提取A部位可有效改善骨韌性，提高骨骼抵抗外力沖擊的能力，對(duì)于骨質(zhì)疏松癥具有較好療效。

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Curative Effects Analysis of Zhuangguzhitong Formula Anhydrous Ethanol Extract A Position on Osteoporosis M odel of Ovariectom ized Female Rats

Liu Changm ing，Zhang Zheng （Chengde Food and Drug Inspection and Testing Center,Hebei Chengde 067000, China）

Objective:To study the curative effects of osteoporosis by zhuangguzhitong formula anhydrous ethanol extract A position through building an osteoporosis model of ovariectom ized female rats.Methods:Sixty SD female rats about 250 g each were selected and divided into normal group,control group,model group,zhuangguzhitong formula group,and zhuangguzhitong formula and anhydrous ethanol extract A group based on the rat weights.All groups were given medicines 5 days later after taking out stitches and lasted for 13 weeks.The curative effects were evaluated from bone m ineral density,bone biomechanics,serum levels of estrogen （E2）,parathyroid hormone（PTH）,calcitonin（CT）,osteocalcin（BGP）levels,and trabecular bone morphology.Results:The bone mineral density of zhuangguzhitong formula and anhydrous ethanol extract A group was significantly higher than those of model group,w ith statistically significant difference （P＜ 0.05）.The maximum stress and bending resistance of the shinbone of zhuangguzhitong formula and anhydrous ethanol extract A group was significantly stronger than those of model group,w ith statistically significant difference （P＜ 0.05）.Compared w ith the modelgroup,E2of zhuangguzhitong and anhydrous ethanol extract A group was significantly higher,while PTH,CT,and BGP were significantly lower,w ith statistically significant difference （P＜ 0.05）.Conclusion:Zhuangguzhitong formula and anhydrous ethanol extract A position can effectively improve the bone toughness,improve the ability of bone to resist external shocks and proved a good curative effect on osteoporosis.

Zhuangguzhitong Formula Anhydrous Ethanol Extract A Position；Osteoporosis；Curative Effect

10.3969/j.issn.1672-5433.2015.07.007

2015-03-17）

劉長明，女，主管藥師。研究方向：藥理藥效學(xué)。E-mail：cdliuchangm ing@126.com