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      玉米單倍體誘導(dǎo)系JS6-2誘導(dǎo)效果的研究

      2015-02-22 08:19:01任雪嬌崔學(xué)宇慈佳賓任啟彪楊偉光吳春勝
      關(guān)鍵詞:單倍體吐絲自交系

      楊 巍 ,任雪嬌,崔學(xué)宇,慈佳賓,任啟彪,楊偉光,吳春勝

      (1 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院,吉林 長春 130118;2 吉林省種子管理總站,吉林 長春 130062)

      玉米單倍體誘導(dǎo)系JS6-2誘導(dǎo)效果的研究

      楊 巍1,任雪嬌1,崔學(xué)宇1,慈佳賓1,任啟彪2,楊偉光1,吳春勝1

      (1 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院,吉林 長春 130118;2 吉林省種子管理總站,吉林 長春 130062)

      【目的】 探討玉米單倍體誘導(dǎo)系JS6-2對(duì)不同基礎(chǔ)材料、不同授粉時(shí)期和果穗不同部位的誘導(dǎo)效果,為玉米單倍體育種技術(shù)的應(yīng)用提供理論依據(jù)?!痉椒ā?以玉米單倍體誘導(dǎo)系JS6-2為誘導(dǎo)材料,Stock6和農(nóng)大高誘1號(hào)為對(duì)照,對(duì)不同基礎(chǔ)材料進(jìn)行了雜交誘導(dǎo),同時(shí)比較了不同授粉時(shí)期、不同果穗部位對(duì)單倍體誘導(dǎo)率的影響?!窘Y(jié)果】 JS6-2對(duì)自交系及雜交種均具有誘導(dǎo)產(chǎn)生單倍體的能力,對(duì)自交系誘導(dǎo)中,JS6-2單倍體誘導(dǎo)率(8.29%)明顯高于農(nóng)大高誘1號(hào)(1.70%)和Stock6(0.66%);對(duì)雜交種誘導(dǎo)中,JS6-2單倍體誘導(dǎo)率(8.22%)同樣明顯高于其他2個(gè)誘導(dǎo)系(1.35%和0.76%)。JS6-2雜交誘導(dǎo)單倍體最佳時(shí)期為雌穗吐絲后3~8 d;果穗頂部的單倍體誘導(dǎo)率(6.87%)高于底部(5.61%)。【結(jié)論】 玉米單倍體誘導(dǎo)系JS6-2的誘導(dǎo)效果明顯好于農(nóng)大高誘1號(hào)和Stock6;Reid、No Reid材料以及Reid×DOM和No Reid×DOM雜優(yōu)模式材料的單倍體誘導(dǎo)率高;田間雜交誘導(dǎo)時(shí),建議在雌穗吐絲3~5 d整齊剪斷花絲進(jìn)行雜交誘導(dǎo),單倍體誘導(dǎo)效果好。

      玉米;單倍體誘導(dǎo)系;誘導(dǎo)效果

      玉米單倍體育種(Haploid Breeding)技術(shù)是傳統(tǒng)育種技術(shù)的革命,與分子育種技術(shù)、轉(zhuǎn)基因技術(shù)形成了現(xiàn)代玉米育種技術(shù)的新體系[1-4]。國內(nèi)外各大公司、科研院所和高等院校相繼開展了玉米單倍體育種,以加速培育玉米優(yōu)良自交系、育成新品種步伐,并應(yīng)用于玉米育種實(shí)踐[5]。然而玉米單倍體育種受兩個(gè)因素限制:一是難以獲得足夠數(shù)量的單倍體,即單倍體誘導(dǎo)率低,Stock6僅為3%[6-9];二是單倍體二倍化困難,即加倍率低,單倍體植株的自然加倍率僅在0.4%~1.2%[10]。玉米單倍體誘導(dǎo)效率的提高可以大大提升單倍體育種的效率,同時(shí)可以節(jié)約育種成本[11-12]。因此,如何提高單倍體誘導(dǎo)效率一直是人們探索的重要課題。研究表明,單倍體誘導(dǎo)率的高低與不同基礎(chǔ)材料及雜交組合的雙親有關(guān);同一父本誘導(dǎo)系對(duì)不同母本雜交誘導(dǎo)產(chǎn)生的單倍體頻率均存在著顯著差異[6,9]。本研究以自選單倍體誘導(dǎo)系JS6-2為父本,Stock6和農(nóng)大高誘1號(hào)為對(duì)照,研究誘導(dǎo)系JS6-2對(duì)玉米不同母本基因型材料、不同授粉時(shí)期、果穗不同部位的誘導(dǎo)效果,以期為玉米單倍體育種奠定基礎(chǔ)。

      1 材料與方法

      供試材料為吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)2007年以Stock6/吉高誘3為基礎(chǔ)材料,采取南北穿梭育種,于2010年育成的誘導(dǎo)率高、遺傳標(biāo)記明顯的高頻率單倍體誘導(dǎo)系JS6-2。Stock6和農(nóng)大高誘1號(hào)(Cau ho 1)為外引誘導(dǎo)系。本試驗(yàn)共進(jìn)行如下3方面處理。

      1.1 不同母本基礎(chǔ)材料對(duì)單倍體誘導(dǎo)率的影響

      用于誘導(dǎo)的基礎(chǔ)材料包括自交系和雜交種2種,其中,10個(gè)骨干自交系為2011年由中國東北春玉米區(qū)選擇,10個(gè)雜交組合為10個(gè)自交系以不同雜種優(yōu)勢模式組配而成(表1)。

      注:DOM為旅大紅骨群+塘四平頭群。表2同。

      Note:DOM stands for Lüda Red Cob and Tangsipingtou germplasms.The same for table 2.

      2012年夏,于吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)種子工程玉米育種基地,以基礎(chǔ)材料為母本,JS6-2、Stock6、農(nóng)大高誘1號(hào)為父本,于母本吐絲后3~4 d后進(jìn)行雜交誘導(dǎo)。每個(gè)基礎(chǔ)材料10~20穗,收獲后挑選無色胚芽尖、紫色粒頂?shù)淖蚜闇?zhǔn)單倍體。2012年冬,于吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)海南育種基地,結(jié)合植株標(biāo)記進(jìn)行進(jìn)一步的田間鑒定。依據(jù)田間鑒定結(jié)果統(tǒng)計(jì)單倍體誘導(dǎo)率。單倍體誘導(dǎo)率=(準(zhǔn)單倍體粒數(shù)/雜交總粒數(shù))×100%。

      1.2 不同授粉時(shí)期對(duì)單倍體誘導(dǎo)率的影響

      2012年和2013年,于吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)海南育種基地,以鄭單958、吉農(nóng)玉833、農(nóng)華101、吉農(nóng)玉719為母本,父本誘導(dǎo)系為JS6-2,選擇不同授粉時(shí)期進(jìn)行授粉。根據(jù)母本雌穗吐絲后的時(shí)間進(jìn)行授粉時(shí)期的劃分:剪開苞葉授粉定義為0 d,剛吐絲時(shí)定義為1 d,依次往后記錄吐絲后的時(shí)間。具體分為以下3個(gè)處理:早期授粉0~2 d,中期授粉3~5 d,晚期授粉6~8 d。單倍體統(tǒng)計(jì)與鑒定同1.1節(jié)。

      1.3 不同果穗部位單倍體誘導(dǎo)率的差異

      2012年冬,選用5個(gè)雜交種鄭單958、先玉335、利民33、農(nóng)華101、吉農(nóng)玉833,種植于吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)海南三亞育種基地,其遺傳基礎(chǔ)見表2。以誘導(dǎo)系JS6-2為父本,雜交誘導(dǎo)各雜交種30穗。收獲后選擇結(jié)實(shí)性好的果穗,按底部(約為果穗長度的1/2)和頂部(同上)分開脫粒。脫粒后根據(jù)籽粒遺傳標(biāo)記進(jìn)行單倍體的初步鑒定。2013年夏,在吉林長春對(duì)單倍體進(jìn)行進(jìn)一步的種植鑒定,具體鑒定方法同1.1節(jié)。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 單倍體誘導(dǎo)系JS6-2對(duì)不同玉米基礎(chǔ)材料的誘導(dǎo)效果

      2.1.1 誘導(dǎo)系JS6-2對(duì)不同自交系的誘導(dǎo)效果 誘導(dǎo)系JS6-2、Stock6和農(nóng)大高誘1號(hào)對(duì)不同玉米自交系的誘導(dǎo)效果見表3。由表3可知,誘導(dǎo)系JS6-2、Stock6和農(nóng)大高誘1號(hào)對(duì)玉米自交系均具有產(chǎn)生孤雌生殖單倍體的能力,其中JS6-2的平均單倍體誘導(dǎo)率為8.29%,農(nóng)大高誘1號(hào)的平均單倍體誘導(dǎo)率為1.70%,Stock6的平均單倍體誘導(dǎo)率最低,為0.66%。JS6-2的單倍體誘導(dǎo)率極顯著高于其他2個(gè)誘導(dǎo)系,而農(nóng)大高誘1號(hào)與Stock6的單倍體誘導(dǎo)率無顯著差異。

      注:不同大寫字母表示0.01水平下差異極顯著,不同小寫字母表示0.05水平下差異顯著。下表同。

      Note:Capital letters stand for significant difference at 0.01 level,while small letters stand for significant difference at 0.05 level.The same below.

      不同母本基礎(chǔ)材料的單倍體誘導(dǎo)率存在顯著差異。JS6-2對(duì)自交系材料誘導(dǎo)中,PH4CV的單倍體誘導(dǎo)率最高,為9.86%,吉853的單倍體誘導(dǎo)率最低,為5.69%,變異幅度4.17%。Stock6對(duì)自交系材料誘導(dǎo)中,鄭58的單倍體誘導(dǎo)率最高,達(dá)到1.64%,吉853、S122的單倍體誘導(dǎo)率最低,為0,變異幅度1.64%。農(nóng)大高誘1號(hào)對(duì)自交系材料誘導(dǎo)中,鄭58和PH4CV的單倍體誘導(dǎo)率較高,達(dá)到3.19%和3.18%,吉853的單倍體誘導(dǎo)率最低,為0,變異幅度3.19%。

      2.1.2 誘導(dǎo)系JS6-2對(duì)不同雜交組合的誘導(dǎo)效果 單倍體誘導(dǎo)系JS6-2、Stock6和農(nóng)大高誘1號(hào)對(duì)不同雜交組合的誘導(dǎo)效果見表4。由表4可知,3個(gè)誘導(dǎo)系中對(duì)雜交組合的平均單倍體誘導(dǎo)率同樣以JS6-2最高,為8.22%;其次是農(nóng)大高誘1號(hào),為1.35%;Stock6最低,為0.76%。JS6-2的單倍體誘導(dǎo)率同樣極顯著高于其他2個(gè)誘導(dǎo)系,其他2個(gè)誘導(dǎo)系的單倍體誘導(dǎo)率無顯著差異。

      JS6-2對(duì)不同雜交材料誘導(dǎo)中, PH6WC×S122、PH4CV×PHB1M、PHB1M×丹340的單倍體誘導(dǎo)率較高,分別為10.13%,9.93%和9.79%,PHGJ4×丹340最低,單倍體誘導(dǎo)率為4.97%,變異幅度5.16%。Stock6單倍體誘導(dǎo)率最高的組合為PHB1M×丹340,誘導(dǎo)率1.33%,最低的PHB1M×S122,誘導(dǎo)率0,變異幅度1.33%。農(nóng)大高誘1號(hào)單倍體誘導(dǎo)率最高的組合為PHB1M×丹340,誘導(dǎo)率2.71%,最低的組合為PHB1M×S122,誘導(dǎo)率0.81%,變異幅度1.90%。

      綜上所述,單倍體誘導(dǎo)系JS6-2對(duì)母本基礎(chǔ)材料的誘導(dǎo)率極顯著高于其他2個(gè)誘導(dǎo)系。不同基礎(chǔ)材料存在差異,自交系中,Reid、No Reid材料誘導(dǎo)率高,而DOM則低;雜交種中,Reid×DOM、No Reid×DOM以及Reid、No Reid群內(nèi)誘導(dǎo)率高,而DOM則低。因此,選用適當(dāng)基礎(chǔ)材料對(duì)提高單倍體誘導(dǎo)率有一定作用。

      2.2 不同授粉時(shí)期對(duì)單倍體誘導(dǎo)率的影響

      不同授粉時(shí)期JS6-2對(duì)不同材料單倍體誘導(dǎo)率的影響結(jié)果見表5。由表5可以看出,不同授粉時(shí)期JS6-2雜交誘導(dǎo)單倍體以雌穗吐絲后3~5 d、6~8 d的單倍體誘導(dǎo)率較高,分別為8.56%和8.75%,極顯著高于0~2 d的單倍體誘導(dǎo)率(5.19%)。說明JS6-2雜交誘導(dǎo)單倍體最佳時(shí)期為雌穗吐絲后3~8 d。此時(shí)雌穗花絲基本全部吐出,便于整齊剪斷進(jìn)行雜交。由于雌穗吐絲3~5 d單倍體結(jié)實(shí)率較6~8 d高,推薦雌穗吐絲3~5 d進(jìn)行雜交誘導(dǎo)。不同品種(雜交組合)在不同雜交誘導(dǎo)授粉時(shí)期誘導(dǎo)率沒有顯著差異。

      2.3 果穗不同部位對(duì)單倍體誘導(dǎo)率的影響

      由表6可知,鄭單958、先玉335和吉農(nóng)玉833等3個(gè)雜交種果穗頂部的單倍體誘導(dǎo)率均明顯高于底部,其中鄭單958果穗頂部和底部的單倍體誘導(dǎo)率分別為7.93%和5.45%,先玉335果穗頂部和底部的單倍體誘導(dǎo)率分別為8.05%和5.31%,吉農(nóng)玉833果穗頂部和底部的單倍體誘導(dǎo)率分別為8.31%和6.15%。而利民33和農(nóng)華101果穗頂部的單倍體誘導(dǎo)率低于底部,其中利民33果穗頂部和底部的單倍體誘導(dǎo)率分別為4.80%和5.02%,農(nóng)華101果穗頂部和底部的單倍體誘導(dǎo)率分別為5.72%和 6.11%;但底部與頂部的單倍體誘導(dǎo)率相差不大。綜合5個(gè)品種果穗頂部與底部來看,果穗頂部的單倍體誘導(dǎo)率(6.87%)高于底部(5.61%)。

      綜合整個(gè)果穗平均單倍體誘導(dǎo)率同樣發(fā)現(xiàn),不同品種(不同基礎(chǔ)材料)的單倍體誘導(dǎo)率存在差異。本研究中吉農(nóng)玉833最高,為7.23%,利民33最低,為4.91%,差異顯著。前者雜優(yōu)模式是Reid×DOM,后者雜優(yōu)模式是Reid×No Reid。

      3 討 論

      3.1 單倍體誘導(dǎo)系JS6-2的誘導(dǎo)效果

      自1956年Coe育成單倍體誘導(dǎo)系Stock6,Chang提出玉米單倍體育種的流程之后,國內(nèi)外育種單位與機(jī)構(gòu)相繼開展了玉米單倍體育種工作。如杜邦先鋒、孟山都等國際公司已經(jīng)大規(guī)模運(yùn)用,實(shí)現(xiàn)了“工廠化”,但在主要技術(shù)上存在嚴(yán)重缺陷,其中,單倍體誘導(dǎo)率及加倍率低是限制玉米單倍體育種的瓶頸。

      2010年吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)對(duì)Stock6進(jìn)行了遺傳改良,從中選育出新的單倍體誘導(dǎo)系JS6-2。本研究在2012年至2013年,以玉米單倍體誘導(dǎo)系JS6-2為材料,Stock6和農(nóng)大高誘1號(hào)為對(duì)照,研究了誘導(dǎo)系JS6-2對(duì)不同基因型材料的誘導(dǎo)效果,結(jié)果表明,JS6-2對(duì)玉米自交系及雜交種均具有誘導(dǎo)產(chǎn)生單倍體的能力,JS6-2的誘導(dǎo)率(8.22%~8.29%)明顯高于農(nóng)大高誘1號(hào)和Stock6。JS6-2誘導(dǎo)率高,農(nóng)藝性狀優(yōu)良,抗玉米大斑病強(qiáng),花粉量大,為較好的單倍體誘導(dǎo)系。該誘導(dǎo)系的育成,對(duì)玉米單倍體育種將具有一定作用。

      3.2 玉米單倍體育種中母本基因型的選擇

      不同母本基礎(chǔ)材料的單倍體誘導(dǎo)率和加倍率存在顯著差異[2-3,13]。本研究結(jié)果表明,不同母本基因型材料間單倍體誘導(dǎo)率差異顯著,自交系中,Reid、No Reid群誘導(dǎo)率高;雜交種中,Reid×DOM、No Reid×DOM 雜優(yōu)模式誘導(dǎo)率高。這與Rober等[14]、劉志增等[15]的研究結(jié)果相一致。Chase[16]認(rèn)為這種影響源于母本基因型所產(chǎn)生的雌配子中有害基因頻率的不同。

      3.3 雜交誘導(dǎo)授粉時(shí)期和授粉部位的選擇

      本研究結(jié)果表明,在雌穗吐絲中期(3~5 d)、晚期(6~8 d)雜交授粉的單倍體平均誘導(dǎo)率高。 Chase[17]、Seaney[18]的研究結(jié)果均表明,通過延遲授粉的手段可以提高單倍體的誘導(dǎo)率。田間雜交實(shí)踐表明,中期授粉的結(jié)實(shí)率常高于中后期授粉的結(jié)實(shí)率,因此認(rèn)為田間雜交誘導(dǎo)時(shí),雌穗吐絲后3~4 d整齊剪斷花絲,4~5 d進(jìn)行雜交誘導(dǎo),效果更好。

      本研究亦發(fā)現(xiàn)果穗頂部籽粒的單倍體誘導(dǎo)率高于底部。這與Sarkar等[19]、Chalyk[20]、Rotarenco等[21]的研究結(jié)果相類似。推測位于果穗頂部的未成熟卵細(xì)胞較果穗下部的成熟卵細(xì)胞在未受精的情況下更容易發(fā)育成單倍體幼胚[20]。玉米花絲是逐步伸長的,由于在生長過程中花絲直徑增大,授粉后在下部花絲中可能有更多的花粉管通向胚囊,盡管誘導(dǎo)系花粉的精子與極核結(jié)合形成單授精,可能有其他花粉的精子進(jìn)入胚囊作為補(bǔ)償精子與卵細(xì)胞結(jié)合,進(jìn)而形成異核受精而完成雙授精,這可能造成果穗下部誘導(dǎo)率較果穗上部低。

      4 結(jié) 論

      1)玉米單倍體誘導(dǎo)系JS6-2對(duì)玉米自交系及雜交種均具有誘導(dǎo)產(chǎn)生單倍體的能力,其誘導(dǎo)效果明顯高于農(nóng)大高誘1號(hào)和Stock6。

      2)不同基因型材料間的單倍體誘導(dǎo)率存在顯著差異,自交系中,Reid、No Reid群誘導(dǎo)率高;雜交種中,Reid×DOM、No Reid×DOM雜優(yōu)模式的單倍體誘導(dǎo)率高。

      3)雌穗吐絲后3~5 d的中期授粉,單倍體誘導(dǎo)率高于早期授粉。因此建議田間雜交誘導(dǎo)時(shí),雌穗吐絲后3~4 d整齊剪斷花絲,3~5 d進(jìn)行雜交,單倍體誘導(dǎo)效果更好。

      4)果穗頂部的單倍體誘導(dǎo)率高于底部。

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      Induced rate of maize haploid inducer JS6-2

      YANG Wei1,REN Xue-jiao1,CUI Xue-yu1,CI Jia-bin1,REN Qi-biao2,YANG Wei-guang1,WU Chun-sheng1

      (1CollegeofAgronomy,JilinAgricultureUniversity,Changchun,Jilin130118,China;2JilinSeedAdministrationStation,Changchun,Jilin130062,China)

      【Objective】 Induction effects of maize haploid inducer JS6-2 with different germplasms,artificial pollination times and sites were studied to improve maize haploid breeding.【Method】 Using JS6-2 as inducing line and Stock6 and Cau ho 1 as control,induction rates between inbred lines and hybrids with different artificial pollination times and sites of ear were compared.【Result】 JS6-2 had the ability of inducing inbred lines and hybrids.The induction rates of JS6-2 for inbred lines and hybrids were higher than Cau ho 1 and Stock6.The average induction rates for inbred lines were 8.29%,1.70% and 0.66%,while those for hybrids were 8.22%,1.35% and 0.76%,respectively.【Conclusion】 JS6-2 was much more efficient than Cau ho 1 and Stock6 in induction of inbred and hybrid lines.Reid,No Reid,Reid×DOM,and No Reid×DOM had high induction rates.Optimal artificial pollination period for inducer JS6-2 was 3-5 d after silking at top site of ear.

      maize;haploid induce lines;effect of induction

      2014-11-11

      吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)科研啟動(dòng)基金項(xiàng)目(201204);國家“863計(jì)劃”項(xiàng)目(2011AA10A103);農(nóng)業(yè)部948項(xiàng)目(2011-G1-21);國家農(nóng)轉(zhuǎn)資金項(xiàng)目(2014GB2B100006);吉林省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系項(xiàng)目(2013001J-1);國家轉(zhuǎn)基因重大專項(xiàng)(2014ZX800305B);國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2014BAD01B01)

      楊 巍(1981-),男,吉林白山人,助理研究員,博士,主要從事玉米遺傳育種及作物栽培研究。 E-mail:davidyoung588@126.com

      楊偉光(1960-),男,吉林梨樹人,教授,博士生導(dǎo)師,主要從事玉米遺傳育種研究。E-mail:ywg789@126.com

      時(shí)間:2015-06-10 08:40

      10.13207/j.cnki.jnwafu.2015.07.004

      S335.4;S513.035.2

      A

      1671-9387(2015)07-0089-06

      網(wǎng)絡(luò)出版地址:http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1390.S.20150610.0840.004.html

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