王 培，覃婷婷，白海嬌

(天津市藥品檢驗所，天津 300070)

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HPLC法測定腸內(nèi)營養(yǎng)乳劑中煙酰胺的含量

王 培，覃婷婷，白海嬌

(天津市藥品檢驗所，天津 300070)

目的：建立腸內(nèi)營養(yǎng)乳劑中煙酰胺的含量測定方法。方法：采用Shodex RSpak DE-613色譜柱，以0.12 mmol/L磷酸溶液為流動相，流速：0.95 ml/min，檢測波長：261 nm。結(jié)果：煙酰胺在1.0～3.5 μg/ml的濃度范圍內(nèi)和峰面積呈良好的線性關(guān)系(r=0.999 8)。結(jié)論：本方法操作簡單、靈敏度高、重現(xiàn)性好，可用于腸內(nèi)營養(yǎng)乳劑中煙酰胺的含量測定。

腸內(nèi)營養(yǎng)乳劑，煙酰胺，HPLC法，含量測定

腸內(nèi)營養(yǎng)乳劑是由蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物、維生素、電解質(zhì)和微量元素等組成的復(fù)方制劑，口服或管飼經(jīng)胃腸道提供代謝所需營養(yǎng)物質(zhì)，現(xiàn)已成為臨床一項重要的治療措施[1]，煙酰胺是煙酸的酰胺形式，參與氧化還原反應(yīng)、干預(yù)能量代謝等生理過程，在維持細(xì)胞的正常生命活動中發(fā)揮重要作用，具有DNA修復(fù)、延緩衰老等方面的藥理作用[2]。由于制劑中煙酰胺含量很低(約為2.50 mg/100 ml)，其他成分干擾其檢測，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)未對煙酰胺的含量進(jìn)行控制。本研究使用蛋白質(zhì)酶解的方法，解決了樣品中蛋白質(zhì)對檢測的干擾，再采用HPLC法以聚甲基丙烯酸酯為填充劑的色譜柱使樣品中的煙酰胺與其他成分進(jìn)行有效分離。

1 儀器與試藥

島津LC-20A高效液相色譜儀；Sartorius PB-10 pH計；DN 44干燥箱；0.2 μm 膜過濾器。煙酰胺對照品(日本藥局方標(biāo)準(zhǔn)品，批號NI0313)；Nˊ-甲基煙酰胺(TCI，批號PCX01-RPGF，>98.0%)；蛋白分解酶(日本科研制藥株式會社，1百萬單位/g)；其他試劑均為分析純。腸內(nèi)營養(yǎng)乳劑(日本EN大冢制藥株式會社，批號T1204161、T1204162、T1204163)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Shodex RSpak DE-613(6.0 mm×150 mm，5 μm)；流動相：0.12 mmol/L磷酸溶；流速：0.95 ml/min；柱溫：50 ℃；檢測波長：261 nm；進(jìn)樣量：40 μl。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液的制備 精密量取本品5 ml，加入蛋白分解酶溶液(1→5 000)0.5 ml，混勻，40 ℃下靜置30 min，用高氯酸溶液(1→500)調(diào)pH至4.5，靜置15 min后轉(zhuǎn)移至50 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度。用0.2 μm微孔濾膜濾過，作為供試品溶液。

2.2.2 對照品溶液的制備 精密稱取煙酰胺對照品適量，加水溶解并稀釋制成每1 ml中約含500 μg的溶液，精密量取5 ml，置100 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，再精密量取上述溶液5 ml,置50 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為對照溶液。

2.2.3 空白溶液的制備 按照處方稱取除煙酰胺外的其他成分，照“2.2.1”項下樣品溶液的制備方法制備空白樣品溶液。

2.3 專屬性試驗 精密量取上述對照品溶液、供試品溶液和空白溶液進(jìn)樣分析，結(jié)果見圖1。供試品溶液中煙酰胺色譜峰的保留時間為16.1 min，空白樣品溶液在煙酰胺色譜峰附近沒有干擾峰出現(xiàn)。

1.煙酰胺

2.4 線性試驗 精密稱取煙酰胺對照品50.07 mg置100 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，再精密量取5 ml置100 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，作為對照品濃溶液，分別量取2.0、3.0、4.0、5.0、6.0和7.0 ml置50 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，制成6個濃度(1.0～ 3.5 μg/ml)的對照品溶液。照“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。以峰面積Y為縱坐標(biāo)，濃度X為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，線性方程為Y=65 031X-1 984(r=0.999 8)，結(jié)果表明在1.0～3.5 μg/ml濃度范圍內(nèi)煙酰胺濃度和峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 加樣回收試驗 精密量取批號為T1204161的樣品2 ml，分別加入濃度為25 μg/ml的對照溶液2、3和4 ml，照“2.2.1”項下方法制備樣品溶液，每份樣品含煙酰胺的量分別為測定量的80%、100%和120%，照“2.1”項下色譜條件進(jìn)樣分析，每份樣品測定3次。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果

2.6 精密度試驗 取對照溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄煙酰胺色譜峰面積，RSD為0.3%，表明分析結(jié)果精密度良好。

2.7 系統(tǒng)適用性試驗 精密稱取Nˊ-甲基煙酰胺和煙酰胺對照品適量，照“2.2.2”項下對照品溶液的制

備方法配制對照品混合溶液。結(jié)果Nˊ-甲基煙酰胺和煙酰胺的分離度為7.6，見圖2。

1.煙酰胺 2.Nˊ-甲基煙酰胺

2.8 樣品含量測定 取3批樣品，照“2.2.1”項下的方法制備，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，結(jié)果見表2。

表2 3批樣品的含量

3 討論

3.1 本試驗煙酰胺含量的測定濃度較低(約為2.5 μg/ml)，本產(chǎn)品的成分比較復(fù)雜，除煙酰胺外還包含其他27種成分，可能是造成加樣回收試驗回收率偏低的原因。

3.2 《中國藥典》2010年版收載了煙酰胺原料[3]及其制劑[4]的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，分別采用非水溶液滴定法和紫外-可見分光光度法測定。腸內(nèi)營養(yǎng)乳劑是多組分的復(fù)方制劑，樣品的制備過程中加入蛋白分解酶和高氯酸除去樣品中的蛋白質(zhì)和脂肪，進(jìn)而采用HPLC法測定煙酰胺。本方法操作簡單，靈敏度高，重現(xiàn)性好，可用于腸內(nèi)營養(yǎng)乳劑中煙酰胺的含量測定。

1 楊愛霞,方彩飛.我院腸內(nèi)營養(yǎng)藥物使用分析[J].中國藥師,2012,15(10):1493-1494

2 楊馳,鄭詠秋,戴敏.煙酰胺藥理作用研究進(jìn)展[J].臨床肺科雜質(zhì),2011,16(12):1914-1915

3 中國藥典[S].二部. 2010:856

4 中國藥典[S].二部. 2010:857

2014-12-10

R927.2

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1006-5687(2015)02-0027-02