黃海亮

丹參的化學(xué)成分分離及其抗氧化活性研究

黃海亮

研究丹參的化學(xué)成分分離與抗氧化活性, 對丹參的化學(xué)成分進行溶液分離, 使用Fenton體系和還原體系對丹參中化學(xué)成分的抗氧化活性進行研究。丹參中所含化學(xué)成分的抗氧化性和還原能力強。丹參具有較強的抗氧化活性, 能夠有效預(yù)防心腦血管疾病發(fā)展、擴張血管, 具有防止腦血栓等藥用價值。

丹參；化學(xué)成分分離；抗氧化活性

丹參主要能夠入藥的部位是其干燥根和根莖, 丹參由于外觀為紅色又被稱做赤參, 在我國大部分地區(qū)都能夠種植丹參。丹參能夠緩減患者的痛感、消除淤血、疏通經(jīng)絡(luò)、促進氣血活動、恢復(fù)患者神智及緩解疲勞的功效, 可以用于治療胸悶、心絞痛、腹脹腹痛、四肢麻痹、失眠、月經(jīng)失調(diào)及經(jīng)痛、浮腫及潰瘍等癥狀。本文主要闡述了丹參的化學(xué)成分分離的方法及以其抗氧化活性的研究, 現(xiàn)分析如下。

1 丹參化學(xué)成分及其抗氧化活性

丹參的化學(xué)成分主要分為兩大類, 脂溶性化學(xué)成分和水溶性化學(xué)成分。丹參中的脂溶性化學(xué)成分中二萜醌類化學(xué)成分占最大比重, 其中又以橙黃色的丹參酮和橙紅色的隱丹參酮為主［1］。丹參中水溶性化學(xué)成分中以酚酸類水溶性化學(xué)成分居多, 酚酸類水溶性化學(xué)成分中主要有丹參素、迷迭香酸、丹酚酸、原兒茶醛等化學(xué)成分［2］。醫(yī)學(xué)界目前對于丹參中的水溶性化學(xué)成分的研究中, 掌握準確的化學(xué)成分主要有丹參素、迷迭香酸、原兒茶醛、丹酚酸A、B、C、D、E、F、G等［3］。丹參素是由2個HO分子、1個OH分子及以1個CH2分子和COOH分子構(gòu)成, 迷迭香酸是由2個O分子、2個HO分子和2個OH分子及1個COOH分子構(gòu)成。

2 丹參的化學(xué)成分分離

將丹參碾成粉狀, 使用4倍分量70%濃度的乙醇浸泡提取4次, 將丹參溶液濃縮至100 L, 然后提取溶液, 在常溫中放置24 h后, 使用清液將溶液中的乙醇去除, 將溶液加熱至室溫, 將溶液的pH值調(diào)至3, 將乙醇濃度壓縮至80%醇沉,將溶液中的乙醇過濾提取致無醇狀態(tài), 將溶液的pH值調(diào)至5,使用乙酸乙酯對溶液萃取3次, 將溶液濃縮得到提取物45 L,后添入45 L石油醚, 將溶液中的沉淀物溶于乙酸乙酯中, 得到無水硫酸溶液, 將其脫水, 最終分離出含丹酚酸類化合物的樣品4.01 L。

將富含丹酚酸類化合物的樣品放置燒杯中, 使用硅膠進行第1次正相分離, 放置8 h后, 使用正己烷或乙酸乙酯進行第2次洗脫, 后分成6份樣品, 分別為Fr1、Fr2、Fr3、Fr4、Fr5、Fr6。將Fr2樣品使用SephadexLH-20柱層析, 然后使用比例為40：9的甲醇進行水梯度對Fr2樣品洗脫, 得到含有迷迭香酸的樣品, 接著使用CG161柱層析, 再使用比例為40：9的甲醇進行水梯度對含有迷迭香酸的樣品洗脫,最終得到迷迭香酸。將Fr4樣品使用SephadexLH-20柱層析,然后使用比例為60：13的甲醇進行水梯度對Fr4樣品洗脫,得到含有丹酚酸B的樣品, 接著使用CG161柱層析, 再使用比例為60：13的甲醇進行水梯度對含有丹酚酸B的樣品洗脫, 最終得到丹酚酸B。將Fr5樣品在常壓下使用硅膠柱層析,后使用正己烷或乙酸乙酯進行梯度洗脫, 后得到25 g的樣品,對25 g樣品使用SephadexLH-20柱層析, 然后使用比例為50：17的甲醇進行水梯度對25 g樣品洗脫, 得到含有丹酚酸A的樣品, 接著使用CG161柱層析, 再使用比例為50：17的甲醇進行水梯度對含有丹酚酸A的樣品洗脫, 最終得到丹酚酸A。

3 丹參化學(xué)成分的抗氧化活性研究

目前對于化學(xué)成分的抗氧化活性研究方式主要是使用Fenton體系、鄰苯三酚自氧化體系、還原體系、DPPH體系、抗卵黃脂質(zhì)過氧化體系進行分析和研究［4］。本文使用其中兩種方式分析丹參化學(xué)成分的抗氧化活性。

3.1 Fenton體系 Fenton體系主要是對于丹參中化學(xué)成分進行OH清除, 其工作原理是在Fenton與丹參中的化學(xué)成分發(fā)生化學(xué)反應(yīng), 產(chǎn)生OH, 由此可得出丹參中化學(xué)成分的OH數(shù)量［5］。

檢測方式：使用2.5 ml的乙酸乙酯溶液(7 mmol/L), 然后加入1.5 ml硝酸鈉溶解劑(pH 7.6；0.3 mmol/L), 攪拌均勻后加入2.5 ml磷酸鹽溶液(含二乙烯三胺；2.8 mmol/L), 充分攪拌后加入純凈水, 于常溫中放置, 后測得丹參中化學(xué)成分的OH數(shù)量。見表1。

3.2 還原體系 實驗使用高錳酸鉀比色法則判斷丹參中化學(xué)成分的還原能力, 當(dāng)Fe3+分子與丹參中化學(xué)成分發(fā)生反應(yīng)還原成Fe2+時, 與高錳酸鉀發(fā)生反應(yīng)形成有色溶液, 溶液的顏色越深, 表示化學(xué)成分的還原能力越強［6］。

實驗方法：在試管中放入2 ml的丹酚酸A樣品, 加入3 ml硫酸亞鐵緩沖溶液(pH 6.7；0.3 mmol/L), 3 ml高錳酸鉀溶液, 攪拌均勻, 在常溫中放置2 h, 后加入純凈水3 ml, 測得丹酚酸A的還原能力。見表2。

表1 丹酚酸B對OH分子的清除率(%)

表2 丹酚酸A的還原能力

4 討論

丹參是一種唇形科鼠尾草屬植物, 我國中醫(yī)學(xué)對于丹參在病理治療方面有著獨特的研究, 是傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)中經(jīng)常使用的一種藥材, 且丹參中所含的化學(xué)成分非常豐富, 能夠制成抗氧化劑, 并廣泛應(yīng)用于治療各種疾病中。醫(yī)學(xué)界目前對于水溶性酚酸類化學(xué)成分的研究有許多新發(fā)現(xiàn), 其中表面丹參中的化學(xué)成分具有較強的抗氧化活性效果, 有著非常好的藥用價值。

丹參能夠效預(yù)防心腦血管疾病, 能夠發(fā)揮擴張血管、防止腦血栓作用。而丹參有特殊的化學(xué)成分, 有較強的抗氧化活性, 具有能夠有效預(yù)防心腦血管疾病發(fā)展、擴張血管、防止腦血栓等藥用價值。丹參中的化學(xué)成分廣泛應(yīng)用在臨床治療心腦血管疾病中的藥物制作中, 如復(fù)發(fā)丹參丸、丹參注射液、復(fù)方丹參口服液等。本文主要討論了丹參的化學(xué)成分分離以及丹參化學(xué)成分抗氧化活性的實驗, 實驗證實了丹參具有很好的抗氧化活性作用。

［1］余世春, 琚小龍, 段廣勛. 丹參的化學(xué)成分和藥理活性研究概況(綜述). 安徽衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院學(xué)報, 2002, 1(2):43-47.

［2］梁曉原. 云南丹參酚酸類成分水醇法制備工藝的初步研究. 云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2001, 24(4):6-8.

［3］王志平, 范晉勇.丹參提取液的樹脂吸附及醇沉工藝對比研究.離子交換與吸附, 2013, 19(6):554-560.

［4］任德成, 杜冠華, 張均田.總丹酚酸對腦缺血再灌注性損傷的保護作用.中國藥理學(xué)通報, 2002, 18(2):275-277.

［5］杜冠華, 裘月, 張均田.丹酚酸 A 對大鼠心肌缺血再灌注性損傷的保護作用.藥學(xué)學(xué)報, 1995, 30(10):731-735.

［6］劉穎琳, 劉耕陶.丹酚酸 A 體外對人血清低密度脂蛋白氧化修飾的抑制作用.藥學(xué)學(xué)報, 2002, 37(2):81-85.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.21.209

2015-07-13］

462000 漯河市第二人民醫(yī)院藥劑科