趙艷等

摘要：從海南省4個(gè)縣（市）的香蕉基地采集的香蕉根結(jié)線蟲病的32份土樣和87份根樣中鑒定出根結(jié)線蟲屬（Meloidogyne spp.）、腎形線蟲屬（Rotylenchulus spp.）、短體線蟲屬（Pratylenchus spp.）、莖線蟲屬（Ditylenchus spp.）、螺旋線蟲屬（Helicotylenchus spp.）、矮化線蟲屬（Tylenchorhynchus spp.）、真滑刃線蟲屬（Aphelenchu，spp.）7個(gè)屬。其中根結(jié)線蟲屬和腎形線蟲屬分布較廣，種群數(shù)量也較高，在各采樣區(qū)中均有發(fā)生，是目前海南省香蕉生產(chǎn)中面臨的最主要的病原線蟲。

關(guān)鍵詞：香蕉；根結(jié)線蟲；海南地區(qū)；優(yōu)勢(shì)種群；根結(jié)線蟲屬；腎形線蟲屬

中圖分類號(hào)： S436.68+1文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2015）02-0128-02

收稿日期：2014-04-14

基金項(xiàng)目：海南大學(xué)青年基金（編號(hào)：qnjj1201）；海南省自然科學(xué)基金（編號(hào)：312060）。

作者簡(jiǎn)介：趙艷（1981—），女，山西太谷人，博士，講師，主要從事微生物相關(guān)研究。E-mail：yanbo315@126.com。

通信作者：張曉波，博士，副教授，研究方向?yàn)椴萜汗芾硐嚓P(guān)研究。E-mail：23065041@qq.com。根結(jié)線蟲（Meloidogyne spp.）是一類在植物上危害極為嚴(yán)重的寄生線蟲，是植物線蟲中種類最多、分布最廣和危害最嚴(yán)重的類群之一。海南省作為我國(guó)香蕉主產(chǎn)區(qū)，香蕉栽培面積不斷擴(kuò)大，取得了顯著的經(jīng)濟(jì)效益[1-2]。近年來(lái)，由于氣候條件及栽培管理等的影響，海南省香蕉根結(jié)線蟲病的發(fā)生越來(lái)越嚴(yán)重，在許多國(guó)家，由線蟲危害造成的香蕉產(chǎn)量損失達(dá)30%～60%[3-4]。目前，由于許多種植戶對(duì)該線蟲病原缺乏了解，盲目利用化學(xué)藥劑和抗病品種防治根結(jié)線蟲病原，不僅效果不理想，而且易造成土壤污染。因此，首先對(duì)根結(jié)線蟲進(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定成為防治該病的前提條件，本研究主要對(duì)海南省不同地區(qū)香蕉根結(jié)線蟲進(jìn)行初步鑒定，以期為該病害的有效防治提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1采樣地點(diǎn)

土壤采集于海南省儋州（木棠鎮(zhèn)）、臨高（紅華農(nóng)場(chǎng)）、澄邁（黃竹、福山、老城、金江、紅光農(nóng)場(chǎng)）及樂東縣（萬(wàn)鐘基地）4個(gè)香蕉種植產(chǎn)區(qū)，主要位于海南省的北部和南部地區(qū)。

1.2植株及土壤樣品的采集

在上述不同試驗(yàn)區(qū)分別選取種植年限為1、2、3、4年的香蕉園，共采集32份土樣和87份根樣。取樣時(shí)每塊地按5點(diǎn)采樣法隨機(jī)選定5 點(diǎn)，每點(diǎn)5株，分別挖取具有根結(jié)的植株根系，土樣取幾個(gè)取樣點(diǎn)表土下5～20 cm處植株根圍的土壤，充分混勻后取出約500 g土，放入大塑料袋中，再放入標(biāo)簽注明采集時(shí)間、地點(diǎn)和采集人，封口后帶回實(shí)驗(yàn)室及時(shí)分離。

1.3癥狀觀察

對(duì)采集的根樣及時(shí)進(jìn)行癥狀觀察。根據(jù)根結(jié)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)（表1）計(jì)算根結(jié)指數(shù)[5]：

根結(jié)指數(shù)=∑各級(jí)病級(jí)數(shù)×樣本數(shù)總樣本數(shù)×最高級(jí)數(shù)×100%。

表1香蕉根結(jié)線蟲病評(píng)價(jià)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)

病級(jí)根結(jié)情況0級(jí)根系健康完整，無(wú)侵染1級(jí)嚴(yán)格檢查才能發(fā)現(xiàn)極少數(shù)的小根結(jié)2級(jí)根結(jié)像1級(jí)大小，但數(shù)量稍多，較易見3級(jí)大量小結(jié)癭，有時(shí)長(zhǎng)在一起，根功能受損不嚴(yán)重4級(jí)大量小根結(jié)，有一些大根結(jié)，大多數(shù)根仍具功能5級(jí)25%根系嚴(yán)重根結(jié)和喪失功能6級(jí)50%根系嚴(yán)重根結(jié)和喪失功能7級(jí)75%根系嚴(yán)重根結(jié)和喪失能力8級(jí)無(wú)健康根，植株?duì)I養(yǎng)中斷9級(jí)根系全部根結(jié)和腐爛，植株垂死

1.4根結(jié)線蟲的分離

將根樣用篩蔗糖離心法分離[6]，將有明顯根結(jié)的植株用自來(lái)水沖洗干凈，用1%過氧化氫表面消毒2 min，再用無(wú)菌水沖洗2次，將根系剪成1～2 cm長(zhǎng)度的根段并加入適量的無(wú)菌水，用豆?jié){機(jī)打碎5 s后，倒入雙層濕篩（160和400目）中并用無(wú)菌水沖洗3～5次，收集下層篩的2齡幼蟲，并用38%蔗糖溶液離心后獲得大量根結(jié)線蟲，在解剖鏡下用移液器吸取一定數(shù)量的線蟲備用。土樣利用貝爾曼漏斗法收集大量2齡幼蟲[7]。

1.5線蟲計(jì)數(shù)

將從根系及土壤樣品中分離得到的根結(jié)線蟲制成懸浮液，并置于底部畫有刻度線的計(jì)數(shù)皿（直徑為6 cm）中，在光學(xué)解剖鏡下觀察計(jì)數(shù)。

1.6殺死、固定及鑒定

收集所分離的2齡幼蟲，65 ℃恒溫?zé)釟⑺篮笥玫攘?%甲醛溶液固定液進(jìn)行固定，最后制成臨時(shí)玻片，在高級(jí)顯微鏡下觀察線蟲形態(tài)特征，參考相關(guān)資料鑒定線蟲種類[8-11]。

1.7數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析采用Excel 2003軟件完成。

2結(jié)果與分析

2.1香蕉根結(jié)癥狀

海南省儋州、臨高、澄邁、樂東地區(qū)不同種植年限香蕉園共采集到87份根樣進(jìn)行病癥觀察，香蕉根結(jié)指數(shù)見表2，可以看出，隨著年限的增加，不同地區(qū)香蕉根結(jié)指數(shù)逐漸增加，其中臨高和澄邁地區(qū)香蕉根結(jié)指數(shù)較高，說明根結(jié)線蟲危害較嚴(yán)重，而樂東地區(qū)香蕉根結(jié)線蟲危害比較輕。

2.2線蟲發(fā)生種類及種群數(shù)量

從海南省儋州、臨高、澄邁、樂東地區(qū)采集的32份土樣和87份根樣中共分離得到7個(gè)屬的寄生線蟲，經(jīng)鑒定分別為根結(jié)線蟲屬（Meloidogyne spp.）、腎形線蟲屬（Rotylenchulus spp.）、短體線蟲屬（Pratylenchus spp.）、莖線蟲屬（Ditylenchus spp.）、螺旋線蟲屬（Helicotylenchus spp.）、矮化線蟲屬（Tylenchorhynchus spp.）、真滑刃線蟲屬（Aphelenchus spp.）。從表3可以看出，根結(jié)線蟲屬、腎形線蟲屬分布較廣，在所有調(diào)查的縣（市）中均有分布，檢出率分別為87.5%、93.8%；而螺旋線蟲屬、矮化線蟲屬、真滑刃線蟲屬的檢出率比較低，分別為12.5%、93%、21.8%。

從表4種群數(shù)量來(lái)看，隨著年限的增加，線蟲數(shù)量也不斷增加，其中根結(jié)線蟲屬、腎形線蟲屬最高，第1年分別占總蟲數(shù)的42.8%、39.6%，第2年分別占總蟲數(shù)的33.8%、430%，第3年分別占總蟲數(shù)的45.9%、36.7%，第4年分別占總蟲數(shù)的44.8、43.1%；從表3、表4中還可以看出，有的線蟲分布較廣，但是種群數(shù)量較低，如螺旋線蟲屬分布較廣，占總樣本數(shù)的56.25%，但種群數(shù)量比較低，第1年至第4年分別占總蟲數(shù)的1.6%、2.1%、2.3%、0.9%。

3結(jié)論與討論

由本研究對(duì)海南省儋州、臨高、澄邁、樂東地區(qū)不同年限香蕉基地線蟲的調(diào)查和鑒定結(jié)果可知，危害香蕉的主要線蟲為根結(jié)線蟲屬、腎形線蟲屬、短體線蟲屬、莖線蟲屬、螺旋線蟲屬、矮化線蟲屬、真滑刃線蟲屬，其中根結(jié)線蟲屬、腎形線蟲屬為優(yōu)勢(shì)種群，分布較廣泛。鄢小寧等在廣東、廣西2省香蕉上調(diào)查到的主要線蟲種類為根結(jié)線蟲屬、腎狀線蟲屬、螺旋線蟲屬、滑刃線蟲屬、絲尾墊刃線蟲屬等，其中根結(jié)線蟲屬比腎形線蟲屬的檢出率高[4]；黎少梅在廣東、海南2省調(diào)查到的香蕉線蟲主要種類為腎狀線蟲屬、根結(jié)線蟲屬、螺旋線蟲屬和根腐線蟲屬（Pratylenchus spp.），其中腎形線蟲屬的檢出率比根結(jié)線蟲屬高[11]，與本試驗(yàn)研究結(jié)果一致，但是本試驗(yàn)未鑒定出根腐線蟲屬，增加了短體線蟲屬、莖線蟲屬、矮化線蟲屬、真滑刃線蟲屬，說明調(diào)查結(jié)果的差異可能與調(diào)查時(shí)間、寄主數(shù)量及采集地有關(guān)，而且近年來(lái)寄生線蟲種類可能也發(fā)生了變化，線蟲種類也在不斷增加；本調(diào)查中沒有發(fā)現(xiàn)有穿孔線蟲屬。

據(jù)有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，根結(jié)線蟲屬、腎形線蟲屬、螺旋線蟲屬對(duì)香蕉的危害較嚴(yán)重[13-15]。螺旋線蟲屬容易引起香蕉根部細(xì)胞壞死、衰萎和機(jī)能的變異，最終能導(dǎo)致整株香蕉衰退；根結(jié)線蟲屬主要侵染香蕉的根部，形成根結(jié)后影響香蕉根系吸收，容易造成產(chǎn)量減少；腎形線蟲屬主要侵染香蕉，進(jìn)而引起侵染點(diǎn)附近內(nèi)皮層細(xì)胞壁加厚，容易斷裂；矮化線蟲和短體線蟲屬目前危害較輕，但仍需要注意防治。

目前，香蕉根結(jié)線蟲病已經(jīng)成為海南省香蕉種植地區(qū)的重要病害，由于近年來(lái)香蕉長(zhǎng)期種植，復(fù)種率高，病原線蟲不斷增加，導(dǎo)致根結(jié)線蟲病發(fā)生越來(lái)越嚴(yán)重，造成香蕉產(chǎn)量降低。為了有效和可持續(xù)控制香蕉根結(jié)線蟲病，一方面要開展對(duì)香蕉根結(jié)線蟲種類的鑒定工作，明確其種群并制定相應(yīng)的防治措施；另一方面要加強(qiáng)微生物防治技術(shù)研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]黃秉智. 香蕉優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)栽培[M]. 北京：金盾出版社，2008：1-8.

[2]李豐年，曾惜冰，黃秉智. 香蕉栽培技術(shù)[M]. 廣州：廣東科技出版社，1999：1-10.

[3]李一農(nóng)，李芳榮，羅海燕，等. 外來(lái)入侵生物香蕉穿孔線蟲管理對(duì)策[J]. 植物保護(hù)，2006，32（6）：119-121.

[4]鄢小寧，鄭服叢，林茂松. 兩廣地區(qū)香蕉根際寄生線蟲的調(diào)查與鑒定[J]. 熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，2005，25（6）：4-8.

[5]張紹升. 植物線蟲病害診斷與治理[M]. 福州：福建科學(xué)技術(shù)出版社，1999：105.

[6]陳立杰，王旭，段玉璽，等.蔗糖離心法分離土壤線蟲的最佳條件篩選[J].沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2007，38（6）：849-851.

[7]方中達(dá).植病研究方法[M]. 3版.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1998：306-311.

[8]Eisenback J D，Hirschmann H，Sasser J N，et al.四種最常見根結(jié)線蟲分類指南[M]. 楊寶君，譯. 昆明：云南人民出版社，1986.

[9]楊寶君. 十五種根結(jié)線蟲病害的病原鑒定[J]. 植物病理學(xué)報(bào)，1984，4（2）：107-111.

[10]思彬彬，張學(xué)娟，張靠穩(wěn). 不同寄主上南方根結(jié)線蟲的 ISSR-PCR 鑒別[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（3）：35-36.

[11]劉維志. 植物線蟲志[M]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2004：39-655.

[12]黎少梅. 廣東海南兩省與香蕉有關(guān)的植物寄生線蟲[J]. 熱帶作物科技，1991（1）：43-45.

[13]黎少梅，許克林，黎春生，等. 廣東香蕉腎狀線蟲病的分布為害及病原鑒定[J]. 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1987，8（4）：9-14.

[14]李夷波，王壽華，李春敏，等. 云南河口香蕉黃化束頂病研究Ⅰ.癥狀與發(fā)病規(guī)律[J]. 植物病理學(xué)報(bào)，1995，25（2）：143-147.

[15]李迅東，翟留香，李芹.云南香蕉根際線蟲種群動(dòng)態(tài)的研究[J].華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1998，19（4）：32-35.

謝美華 李霖 李雪玲，等. 芒萁葉斑病病原菌分離鑒定和生物學(xué)特性[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015，43（2）：130-133.