歐科鵬，李尤簡(jiǎn)，郭若婷，王 穎，顧真真，劉 乙，劉小軍

(1.石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，石河子 832003； 2.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，鄭州 450002)

綿羊甲狀腺自主合成并分泌褪黑素的研究

歐科鵬1#，李尤簡(jiǎn)1#，郭若婷1，王 穎1，顧真真1，劉 乙1，劉小軍2*

(1.石河子大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，石河子 832003； 2.河南農(nóng)業(yè)大學(xué)牧醫(yī)工程學(xué)院，鄭州 450002)

本研究旨在探討綿羊甲狀腺是否表達(dá)催化褪黑素合成的關(guān)鍵酶基因AANAT、HIOMT以及褪黑素受體基因MT1，并自主合成和分泌褪黑素，為研究甲狀腺在綿羊季節(jié)性繁殖中的功能奠定基礎(chǔ)。利用RT-PCR、組織免疫熒光、細(xì)胞免疫熒光和ELISA技術(shù)，分別在基因、蛋白質(zhì)和細(xì)胞水平對(duì)綿羊甲狀腺中合成褪黑素的關(guān)鍵酶基因AANAT、HIOMT以及褪黑素受體基因MT1的表達(dá)、細(xì)胞定位以及褪黑素的合成與分泌進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：綿羊甲狀腺表達(dá)褪黑素合成酶基因AANAT、HIOMT和褪黑素受體基因MT1，并能夠自主合成和分泌褪黑素。該研究首次證實(shí)了綿羊甲狀腺具有自主合成并分泌褪黑素的功能，表明甲狀腺內(nèi)部可能存在有通過(guò)褪黑素調(diào)控甲狀腺素合成的新通路，為進(jìn)一步研究綿羊甲狀腺自主合成褪黑素的功能奠定了基礎(chǔ)。

甲狀腺；褪黑激素；AANAT；HIOMT；MT1；綿羊

褪黑素(Melatonin，MEL)是一種松果體在夜間分泌的重要吲哚胺，具有抗氧化[1]、抗衰老[2]和抗惡性細(xì)胞增殖[3]等多項(xiàng)生理功能，同時(shí)參與綿羊等哺乳動(dòng)物和其他脊椎動(dòng)物的晝夜節(jié)律控制，扮演光周期信息發(fā)射器的重要角色[4]。體內(nèi)MEL是色氨酸在一系列酶的催化下合成的。色氨酸在色氨酸羥化酶(Tryptophan hydroxylase，TPH)作用下轉(zhuǎn)變?yōu)?-羥色氨酸(5-hydroxytryptophan，5-HTP)，后經(jīng)5-羥色氨酸脫羧酶(5-hydrotryp tophen decarboxylas，5-HTPDC)催化為5-羥色氨(5-hydroxy tryptamine，5-HT)，在N-乙?；D(zhuǎn)移酶(N-acetyltransferase，NAT又稱(chēng)AANAT)作用下轉(zhuǎn)變成N-乙酰-5-羥色胺(N-acetylserotonin，NAS)[5]，NAS在羥基吲哚-氧-甲基轉(zhuǎn)移(Hydroxyindole-O-methyltransferase，HIOMT也稱(chēng)為ASMT)的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)镸EL[6]。AANAT是合成過(guò)程中的限速酶，HIMOT是全部合成過(guò)程中的關(guān)鍵酶。

松果體被認(rèn)為是MEL合成的主要場(chǎng)所，但松果體以外的許多組織也被確定能夠合成MEL，如視網(wǎng)膜[7]、哈德氏腺[8]、腸道[9]、卵巢[10]、免疫系統(tǒng)[11]、皮膚[12]和睪丸[13]等。1999年MEL就在大鼠甲狀腺被發(fā)現(xiàn)[14]，但并不清楚MEL是由其他組織合成后轉(zhuǎn)運(yùn)而來(lái)還是由甲狀腺自主合成。最近在試驗(yàn)動(dòng)物小鼠的研究中證實(shí)，甲狀腺存在合成MEL所必需的兩個(gè)關(guān)鍵酶AANAT和HIOMT，同時(shí)分布有褪黑素受體(Melatonin receptor，MT1)[15]。迄今為止，綿羊的甲狀腺是否存在MEL合成關(guān)鍵酶，是否能自主合成MEL還不清楚。本研究就是為了探討綿羊甲狀腺能否自主合成并分泌MEL，并對(duì)MT1基因的表達(dá)進(jìn)行分析，為后續(xù)研究綿羊MEL在甲狀腺中的功能打下基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 樣品采集

選擇發(fā)育良好、健康的10月齡中國(guó)美利奴新疆軍墾型綿羊5只，屠宰后將采集到的新鮮甲狀腺剪塊，一部分置于裝有RNAfixer(天根，北京)的無(wú)RNase離心管(天根，北京)迅速放入液氮中，另一部分用4%的多聚甲醛(Paraformaldehyde，PFA)固定，同時(shí)采集完整的甲狀腺組織置于冰上保存的磷酸鹽緩沖液中，迅速帶回實(shí)驗(yàn)室備用。

1.2 引物設(shè)計(jì)與合成

通過(guò)NCBI查找到綿羊HIOMT(GenBank：KC290950.1)、AANAT(GenBank：KC290949.1)、MT1 (GenBank：NM_001009725.1)和持家基因β-actin(GenBank：NM_001009784.1)4個(gè)基因的mRNA序列，用BLAST-Primer在線(xiàn)軟件設(shè)計(jì)引物。引物均由北京六合華大基因科技有限公司合成。引物序列見(jiàn)表1。

表1 PCR引物信息

Table 1 Primers information

基因Gene引物序列(5'-3')Primersequences退火溫度/℃Annealingtemperature產(chǎn)物長(zhǎng)度/bpSizeofproductsHIOMTF:GCTGTACTCGCTGAACATGCR:CTGCCCAAGACTGCATCGTA58142AANATF:GTCCACTGCCTGAAACCCTCR:TCTCCTCATCCCACAGGGAG58292MT1F:AGATACGGCAAGCTGTATAGCR:TTAAACGGAGTCCACCTTTACTAG58654β-actinF:GTGGATCAGCAAGCAGGAGTR:CGAGGCCAATCTCATCTCGT58141

1.3 綿羊甲狀腺組織總RNA的提取和cDNA第一鏈的合成

按照 Trizol(Invitrogen，USA)試劑盒說(shuō)明書(shū)提取總RNA，用RNase-free DNase I消化可能含有的基因組DNA，并用1% Tris-乙酸緩沖液瓊脂糖凝膠電泳及紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA的質(zhì)量和濃度。 在完整性良好且A260nm/A280nm>1.8的RNA樣品中，取1 μg做為cDNA合成的模板，按照Quantscript RT Kit(天根，北京)說(shuō)明書(shū)反轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一鏈。

1.4 PCR擴(kuò)增

以cDNA為模板，進(jìn)行特異基因PCR擴(kuò)增，反應(yīng)體系：2×PCR Master Mix(康為，北京)10 μL，10 μmol·L-1的上下游引物各1 μL，cDNA 500 ng，補(bǔ)足RNase-Free Water到20 μL。反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性5 min；94 ℃變性20 s，58 ℃退火20 s，72 ℃延伸20 s，共30個(gè)循環(huán)，72 ℃延伸10 min。用2%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)。

1.5 免疫熒光法檢測(cè)HIOMT和MT1基因在甲狀腺組織中的表達(dá)

將固定在4% PFA中的綿羊甲狀腺組織，按照常規(guī)石蠟切片的處理步驟依次進(jìn)行，切片厚度為5 μm。切片經(jīng)脫蠟下行入蒸餾水孵育5 min；PBS(pH7.4)浸泡5 min；切片置于0.01 mol·L-1枸櫞酸鈉緩沖溶液，微波最大功率加熱30 min，進(jìn)行抗原修復(fù)；PBS清洗2次，每次5 min；接著用3% H2O2去離子水37 ℃孵育10 min；PBS清洗2次，每次5 min；然后用10%正常羊血清(厚普生，江蘇)室溫封閉1 h，棄封閉液，勿洗；按1∶100的稀釋比例分別加入HIOMT(厚普生，江蘇)和MT1(博奧森，北京)抗體，置濕盒4 ℃過(guò)夜；復(fù)溫20 min，PBS清洗2次，每次5 min；按1∶200稀釋比例加FITC標(biāo)記羊抗兔IgG二抗(厚普生，江蘇)，室溫避光孵育2 h；PBS清洗2次，每次5 min；PI和DAPI(厚普生，江蘇)分別復(fù)染細(xì)胞核5 min；PBS清洗2次，每次5 min；抗淬滅封片劑封片。熒光顯微鏡觀察，拍片。

1.6 原代細(xì)胞培養(yǎng)

將新鮮的甲狀腺組織用pH為7.4的磷酸鹽緩沖液徹底清洗后，在無(wú)菌條件下去除甲狀腺組織包膜，用眼科剪將組織剪成1 mm3的勻漿狀，加入多于5～10倍的0.125%胰蛋白酶和130 U·mL-1的膠原酶Ⅰ(Sigma，美國(guó))混合液37 ℃消化2 h分離細(xì)胞，期間每15 min搖動(dòng)一次。血清終止消化后，離心并棄掉消化液；經(jīng)DMEM重旋并用200目細(xì)胞篩過(guò)濾，再次收集濾液于離心管中，離心去上清。用含15% 胎牛血清(Gbico，美國(guó))、1 U·L-1牛促甲狀腺素、5 mg·L-1氫化可的松、5 mg·L-1轉(zhuǎn)鐵蛋白、10 mg·L-1胰島素、0.3 g·L-1L-谷氨酰胺、105U·L-1青霉素和100 mg·L-1鏈霉素(以上試劑均購(gòu)自Sigma，美國(guó)) 的DMEM(Gbico，美國(guó))培養(yǎng)基反復(fù)吹打懸浮細(xì)胞，接種到細(xì)胞培養(yǎng)板上，并預(yù)先放入蓋玻片以備細(xì)胞免疫熒光檢測(cè)所用，置于37 ℃，含5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

1.7 免疫熒光檢測(cè)甲狀腺球蛋白(Thyroglobulin，Tg)表達(dá)

當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)鋪滿(mǎn)培養(yǎng)板底80%左右，用1.5 mL Eppendorf管收集培養(yǎng)液置于-80 ℃?zhèn)溆谩㈤L(zhǎng)有細(xì)胞的蓋玻片從培養(yǎng)板中取出，用PBS清洗2次，每次5 min；接著用冷丙酮液固定15 min，空氣干燥5 min；用PBS清洗2次，每次3 min，；然后用10%正常山羊血清室溫封閉1 h，棄封閉液，勿洗； 按1∶100稀釋比例加Tg(厚普生，江蘇)抗體，置濕盒4 ℃過(guò)夜； 然后再用PBS清洗2次，每次3 min；按1∶200稀釋比例加FITC標(biāo)記羊抗兔IgG二抗(厚普生，江蘇)，室溫避光孵育2 h；PBS清洗2次，每次3 min；PI復(fù)染細(xì)胞核5 min，PBS清洗2次，每次3 min；抗淬滅封片劑封片。 熒光顯微鏡觀察，拍片。

1.8 MEL檢測(cè)

將1.7收集的細(xì)胞培養(yǎng)液，按照綿羊MEL ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，測(cè)定其中MEL的含量，并以DMEM和含血清的DMEM為對(duì)照。用標(biāo)準(zhǔn)品得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程：y(Melationin)=-0.000 2×(OD450 nm)+0.295 5，按此方程計(jì)算各組樣品中MEL濃度。試驗(yàn)重復(fù)3次。

1.9 統(tǒng)計(jì)分析

利用SPSS軟件，對(duì)試驗(yàn)組和對(duì)照組中MEL濃度進(jìn)行單因素水平方差分析，P<0.05表明差異顯著，P<0.01表明差異極顯著。

2 結(jié) 果

2.1 PCR結(jié)果

以松果體或垂體組織為陽(yáng)性對(duì)照，用RT-PCR在綿羊甲狀腺cDNA中獲得了與預(yù)期相同的MEL合成關(guān)鍵酶AANAT、HIOMT和MT1基因的片段(圖1)。序列分析表明，擴(kuò)增獲得的片段為綿羊AANAT、HIOMT和MT1基因。

2.2 細(xì)胞培養(yǎng)與鑒定

倒置顯微鏡下觀測(cè)結(jié)果表明(圖2)，綿羊甲狀腺組織經(jīng)雙酶消化后呈大小不等、折光性較強(qiáng)的濾泡細(xì)胞[16]。在培養(yǎng)的第2天，甲狀腺濾泡細(xì)胞已逐漸貼壁，有一定的三維結(jié)構(gòu)。培養(yǎng)第6 天，鋪成單層細(xì)胞，形態(tài)變化較大且不規(guī)則。培養(yǎng)第10天，細(xì)胞覆蓋滿(mǎn)培養(yǎng)皿。

M.DNA marker Ⅱ(天根，北京)；1.甲狀腺；2.垂體；3.松果體。A.持家基因β-actin在松果體、垂體和甲狀腺表達(dá)；B.HIOMT在松果體和甲狀腺表達(dá)；C.AANAT在松果體和甲狀腺表達(dá)；D.MT1在垂體和甲狀腺表達(dá)；N.無(wú)底物cDNA陰性對(duì)照M.DNA marker Ⅱ；1.Thyroid gland；2.Pituitary gland；3.Pineal gland.A.mRNA expression of housekeeping gene β-actin in sheep pineal，pituitary and thyroid gland；B.mRNA expression of HIOMT in pineal and thyroid gland；C.mRNA expression of AANAT in pineal and thyroid gland；D.mRNA expression of MT1 in sheep pituitary and thyroid gland；N.The negative control in which cDNA is replaced with distilled water圖1 RT-PCR檢測(cè)AANAT、HIOMT和MT1的表達(dá)Fig.1 Expression of AANAT，HIOMT and MT1 by RT-PCR

A.剛消化的甲狀腺濾泡細(xì)胞；B.培養(yǎng)第2天的甲狀腺細(xì)胞；C.培養(yǎng)第10 天的甲狀腺細(xì)胞A.Newly digested thyroid follicular cells；B.Thyroid cells cultured for 2 days；C.Thyroid cells cultured for 10 days圖2 甲狀腺原代細(xì)胞形態(tài)觀察 200×Fig.2 The morphological changes of cultured cells under light microscope 200×

2.3 免疫熒光分析

組織免疫熒光分析表明，HIOMT表達(dá)于綿羊甲狀腺濾泡細(xì)胞質(zhì)，MT1則表達(dá)于濾泡細(xì)胞膜與細(xì)胞質(zhì)(圖3)。

甲狀腺球蛋白是由甲狀腺細(xì)胞合成并分泌的特征性糖蛋白，通過(guò)對(duì)該蛋白的檢測(cè)，不但可以對(duì)所獲得的原代培養(yǎng)細(xì)胞是否是甲狀腺細(xì)胞做出更準(zhǔn)確的判斷，而且可以同時(shí)對(duì)其功能健全與否做出客觀的評(píng)判[17]。對(duì)培養(yǎng)第8天的細(xì)胞爬片進(jìn)行以抗甲狀腺球蛋白抗體為第一抗體的免疫熒光檢測(cè)，圖4結(jié)果表明，在原代培養(yǎng)的甲狀腺細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中有甲狀腺球蛋白的表達(dá)，由此表明所獲得的原代培養(yǎng)細(xì)胞是功能性的綿羊甲狀腺細(xì)胞。

A.HIOMT抗體胞漿陽(yáng)性；B.PI復(fù)染細(xì)胞核；C.A和B合并；D.PBS替代HIOMT抗體做陰性對(duì)照；E.PI復(fù)染細(xì)胞核；F.D和E合并；G.MT1抗體胞膜胞漿均為陽(yáng)性；H.DAPI復(fù)染細(xì)胞核；I.G和H合并；J.PBS替代MT1抗體做陰性對(duì)照；K.DAPI復(fù)染細(xì)胞核；L.J和K合并A.Immunopositivities for HIOMT were detected in thyroid tissue；B.Nucleus stained with PI；C.Merge A and B；D.Negative control；E.Nucleus stained with PI；F.Merge D and E；G.Immunopositivities for MT1 were detected in thyroid tissue ；H.Nucleus stained with DAPI；I.Merge G and H；J.Negative control；K.Nucleus stained with DAPI；L.Merge J and K圖3 免疫組織熒光檢測(cè)HIOMT和MT1基因的表達(dá)與定位 200×Fig.3 Immunolocalization of HIOMT and MT1 in sheep by immunofluorescence 200×

A.Tg在細(xì)胞質(zhì)表達(dá)；B.細(xì)胞核；C.A和B完整合并到一起A.Cells stained with Tg antibody；B.Nucleus；C.Merge A and B圖4 免疫熒光顯示甲狀腺特異抗原 400×Fig.4 Thyroid specific antigen Tg expression were detected by immunofluorescence 400×

2.4 MEL的檢測(cè)

收集的細(xì)胞培養(yǎng)液中MEL的濃度與DMEM培養(yǎng)基和含血清的DMEM培養(yǎng)基兩陰性對(duì)照中MEL的濃度進(jìn)行比較，圖5可以看出，盡管含血清的培養(yǎng)基中有一定濃度的MEL(來(lái)自血清本身)，通過(guò)SPSS方差分析，細(xì)胞培養(yǎng)液中MEL含量均高于兩陰性對(duì)照組，差異極顯著(P<0.01)，證明了綿羊甲狀腺具有自主合成和分泌MEL的能力。3次重復(fù)試驗(yàn)均證明了相同的結(jié)果。

1.DMEM中MEL含量；2.加血清的DMEM中MEL含量；3.細(xì)胞培養(yǎng)液中MEL含量，差異極顯著(**P<0.01)1.Melatonin was measured in culture medium without cells and FBS；2.Melatonin was measured in culture medium with FBS but without cells；3.Amounts of melatonin in cell culture medium，**P<0.01 圖5 褪黑素的ELISA檢測(cè)Fig.5 Melatonin determination in culture medium

3 討 論

MEL雖然主要在動(dòng)物松果體合成，但其他組織也有一定量的合成，具有廣泛的生理功能。在小鼠上的研究表明，MEL以及其它激素和非激素藥物可以調(diào)節(jié)和控制甲狀腺功能及體內(nèi)平衡[18]。同時(shí)，在體內(nèi)和體外試驗(yàn)中也發(fā)現(xiàn)了MEL對(duì)促甲狀腺激素釋放的抑制作用[19]。一方面，MEL通過(guò)濾泡細(xì)胞合成可能在抗氧化過(guò)程中保護(hù)甲狀腺細(xì)胞免受氧化影響起作用。有研究者認(rèn)為MEL在甲狀腺的生理和病理過(guò)程中對(duì)氧化侵害起保護(hù)作用[20]。活性氧分子 (ROS)涉及甲狀腺的細(xì)胞活動(dòng)進(jìn)程，在其他器官中同樣發(fā)生。例如，氫過(guò)氧化物參與甲狀腺中激素合成、Wolff-Chaikoff效應(yīng)和碘過(guò)量導(dǎo)致的甲狀腺功能減退的不同階段[21]。另一方面，小鼠甲狀腺核濾泡細(xì)胞表達(dá)MT1。MEL通過(guò)對(duì)甲狀腺自分泌和旁分泌的影響，可能參與甲狀腺激素合成或氧化還原反應(yīng)的體內(nèi)平衡。本研究結(jié)果表明，綿羊甲狀腺組織存在有MEL生物合成的關(guān)鍵酶基因AANAT和HIOMT，可以自主合成和分泌甲狀腺素，同時(shí)甲狀腺組織中也有MEL受體MT1的表達(dá)，表明綿羊甲狀腺中存在有MEL信號(hào)傳導(dǎo)的通路，但其具體的生理功能還有待進(jìn)一步研究。

近年來(lái)的研究表明，季節(jié)性繁殖動(dòng)物的生殖活動(dòng)受下丘腦-垂體-性腺軸(Hypothalamic-pituitary-gonadal axis，HPGA)系統(tǒng)的調(diào)控[22]。而 HPGA 分泌生殖激素的季節(jié)性變化又受到光照周期的調(diào)控[23]。光照刺激作用于視網(wǎng)膜并轉(zhuǎn)化為神經(jīng)沖動(dòng)，神經(jīng)沖動(dòng)經(jīng)由下視丘及動(dòng)物體內(nèi)主要的生物鐘視交叉上核(Suprachiasmatic nucleus，SCN)作用于松果體。綿羊松果體分泌的MEL再通過(guò)垂體結(jié)節(jié)部(PT)高濃度表達(dá)的MT1調(diào)節(jié)PT特異性細(xì)胞中促甲狀腺激素β亞基(TSHB)表達(dá)[24]，再通過(guò)下丘腦內(nèi)側(cè)基底部伸展細(xì)胞的促甲狀腺激素受體(Thyroid stimulating hormone receptor，TSHR)激活3′，5′-環(huán)一磷酸腺苷(3′，5′-cyclica denosine monophosphate，cAMP)信號(hào)通路，調(diào)節(jié)Ⅱ型甲狀腺素脫碘酶(DIO2)和Ⅲ型甲狀腺素脫碘酶(DIO3)在下丘腦的比率從而調(diào)節(jié)下丘腦中三碘甲腺原氨酸(T3)和四碘甲腺原氨酸(T4)的濃度來(lái)調(diào)控繁殖活動(dòng)[25]。該通路連接了MEL光周期分泌信號(hào)和甲狀腺素合成釋放以實(shí)現(xiàn)對(duì)季節(jié)性繁殖的生理調(diào)控?？梢钥闯鯩EL是季節(jié)性繁殖動(dòng)物生殖行為隨光周期變化的中心信號(hào)分子，是哺乳動(dòng)物繁殖節(jié)律系統(tǒng)中重要環(huán)節(jié)[26]。本研究結(jié)果表明，綿羊甲狀腺組織可以自主合成和分泌甲狀腺素，也可表達(dá)MT1，但甲狀腺內(nèi)部是否存在有通過(guò)MEL調(diào)控甲狀腺素合成的新通路，以及甲狀腺組織中MEL的合成是否也與松果體一樣受光周期的調(diào)控，進(jìn)而參與綿羊季節(jié)性繁殖的調(diào)控，還有待于進(jìn)一步研究。

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(編輯 程金華)

Investigation into Synthesis and Secretion of Melatonin in Thyroid Gland in Sheep

OU Ke-peng1#，LI You-jian1#，GUO Ruo-ting1，WANG Ying1，GU Zhen-zhen1，LIU Yi1，LIU Xiao-jun2*

(1.CollegeofAnimalScienceandTechnology，ShiheziUniversity，Shihezi832003，China；2.CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，HenanAgriculturalUniversity，Zhengzhou450002，China)

The objectives of present study were to investigate whether two key genes of enzymes for melatonin biosynthesis，arylalkylamine N-acetyltransferase (AANAT) and hydroxyindole-O-methyltransferase (HIOMT)，and melatonin receptorMT1 were expressed in thyroid gland in sheep，and whether melatonin could be independently synthesized and secreted in the gland.The expression ofAANAT，HIOMTandMT1 was firstly detected by using RT-PCR，and was then confirmed by immunofluorescenct histochemical assay in tissues of thyroid gland of sheep.The specificity of cultured primary thyroid gland cells was characterised by immunofluorescenct cytochemical assay.The synthesis and secretion of melatonin in sheep thyroid gland cells were analysed using ELISA.The results showed thatAANAT，HIOMTandMT1 mRNAs were expressed in sheep thyroid tissue.Immunofluorescence assays confirmed thatHIOMTandMT1 protein were localized on follicular cells in thyroid gland.Meanwhile，ELISA assay demonstrated that the thyroid gland of sheep could synthesize and secret melatonin autonomously.The present study evidenced，for the first time，that the melatonin synthesizing enzymes and melatonin receptor were presented in the thyroid tissue，and thyroid gland was able to synthesize and secret melatonin autonomously in sheep.The data provided new evidence for a putative novel intrathyroidal regulatory pathway that melatonin might be involved in thyroid-hormone synthesis.

thyroid gland；melatonin；AANAT；HIOMT；MT1；sheep

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.04.010

2014-10-28

教育部高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專(zhuān)項(xiàng)科研基金(博導(dǎo)類(lèi))( 20126518110004)

歐科鵬(1990-)，男，重慶江津人，碩士生，主要從事動(dòng)物遺傳育種與繁殖研究，E-mail:oukepeng@gmail.com；李尤簡(jiǎn)(1990-)，女，湖南岳陽(yáng)人，碩士生，主要從事動(dòng)物疾病病理學(xué)研究。歐科鵬和李尤簡(jiǎn)為并列第一作者

*通信作者：劉小軍，教授，E-mail：xjliu2008@hotmail.com

S826.2

A

0366-6964(2015)04-0576-07