姜作玲 高 莉 王 輝 趙俊梅 梅 潁

(1 上海醫(yī)藥集團(tuán)青島國風(fēng)藥業(yè)股份有限公司,青島,266071; 2 南京市市級機(jī)關(guān)醫(yī)院中醫(yī)科,南京,210018)

養(yǎng)心氏片對大鼠冠脈結(jié)扎致心肌缺血模型的影響

姜作玲1高 莉1王 輝1趙俊梅1梅 潁2

(1 上海醫(yī)藥集團(tuán)青島國風(fēng)藥業(yè)股份有限公司,青島,266071; 2 南京市市級機(jī)關(guān)醫(yī)院中醫(yī)科,南京,210018)

目的:研究養(yǎng)心氏片對冠脈結(jié)扎致心肌缺血大鼠的影響作用。方法:將90只健康SD大鼠隨機(jī)分為6組,分別為假手術(shù)組、模型組、硝苯地平對照組、養(yǎng)心氏片高、中、低劑量組,連續(xù)給藥10 d后,行冠脈左前降支結(jié)扎術(shù)制備大鼠心肌缺血模型,檢測心肌力學(xué)變化,測定各組血清中肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量變化,并用氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法測定心肌梗死面積。結(jié)果:養(yǎng)心氏片能明顯減少心肌梗死范圍,同時(shí)可以改善心肌缺血大鼠CK、LDH等血清心肌酶學(xué)及心電圖狀況等指標(biāo)的異常(P<0.05)。結(jié)論:養(yǎng)心氏片對冠脈結(jié)扎致大鼠心肌缺血有保護(hù)作用。

養(yǎng)心氏片;心肌缺血;保護(hù)

養(yǎng)心氏片是由黃芪、黨參、丹參、葛根、淫羊藿、人參、甘草等十三味藥材組成,采用現(xiàn)代先進(jìn)工藝制成的中藥制劑。其功能主治為益氣活血,化瘀止痛。用于氣虛血瘀所致的胸痹,癥見心悸氣短、胸悶、心前區(qū)刺痛;冠心病心絞痛見于上述證候者。

本研究通過觀察養(yǎng)心氏片對大鼠冠脈結(jié)扎致心肌缺血前后心肌梗死范圍、心肌力學(xué)、心電圖狀況、血清生化等指標(biāo)的影響,探討了養(yǎng)心氏片對抗大鼠心肌缺血的影響作用。實(shí)驗(yàn)采用手術(shù)開胸結(jié)扎冠脈左前降支導(dǎo)致大鼠急性心肌缺血模型,通過觀察心肌缺血前后心電圖、心肌力學(xué)、心肌梗死范圍、血清酶學(xué)等指標(biāo),來評價(jià)養(yǎng)心氏片對心肌梗死、心絞痛、冠心病等疾病的治療作用。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動物 SD大鼠,雌雄各半,體重180～200 g,90只,由吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供,許可證號:SCXK-(吉)2007-0015。

1.2 藥品及試劑 養(yǎng)心氏片,由青島國風(fēng)藥業(yè)股份有限公司提供,批號:080501;該藥成人日擬用劑量為10～15丸/次,3次/d,0.05 g/丸,即成人每日每千克體重用量為0.037 5 g(成人均以60 kg體重計(jì)算),實(shí)驗(yàn)時(shí)用蒸餾水配制。硝苯地平片:由山西云鵬制藥有限公司生產(chǎn),批準(zhǔn)文號:國藥準(zhǔn)字H4020798,產(chǎn)品批號:C080502。成人日用量為30 mg。紅四氮唑(TTC)C19H15N4Cl=334.81,中國惠世生化試劑有限公司,上海,批號:070708(避光保存)。CK檢測試劑盒;LDH檢測試劑盒;SOD黃嘌呤氧化酶法檢測試劑盒;MDA硫代巴比妥酸法檢測試劑盒;NO硝酸還原酶法檢測試劑盒(以上試劑盒均來自南京建成生物工程研究所,批號:20091002)。

1.3 儀器 醫(yī)用臺式離心機(jī)(TDL80-2B型,Anke,上海安亭科學(xué)儀器廠生產(chǎn));BP121S型電子天平(SARTORIUS,上海良平儀器儀表有限公司);WH-2微型旋渦混合儀(上海瀘西分析儀器廠),HX-300動物呼吸機(jī)(成都泰盟科技有限公司);BL-420E+生物功能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)及其配套軟件(成都泰盟科技有限公司)。

1.4 試驗(yàn)方法 按性別、體重和手術(shù)時(shí)間將大鼠隨機(jī)分為以下6組,每組15只動物,雌雄各半,分組及劑量見表1。

表1 大鼠實(shí)驗(yàn)分組和劑量設(shè)計(jì)一覽表

注:藥物經(jīng)蒸餾水配制成適宜濃度后,按10 mL/kg(體重)的給藥體積灌胃給藥。

健康SD大鼠,按“表1實(shí)驗(yàn)動物與分組”項(xiàng)下相關(guān)內(nèi)容進(jìn)行分組,各組動物實(shí)驗(yàn)順序按時(shí)間交叉進(jìn)行,連續(xù)給藥10 d(假手術(shù)組、模型對照組給予等容積溶媒),末次給藥后1 h,ip 40 mg/kg戊巴比妥鈉麻醉,將動物仰臥位固定,行氣管插管術(shù)[1],接人工呼吸器(頻率為55次/min,調(diào)節(jié)潮氣量16,吸∶呼=1∶2),穩(wěn)定5 min,記錄一段正常Ⅱ?qū)?lián)心電圖(ECG)。于第3、4肋間打開胸腔,剪破心包膜,于左冠狀動脈前降支下穿線以備結(jié)扎[2]。穩(wěn)定10 min記錄一段ECG,剔除穩(wěn)定后ECG仍不正常者。行冠脈結(jié)扎術(shù),阻斷血流30 min,迅速關(guān)閉胸腔,記錄結(jié)扎后5 min、10 min、15 min、30 min、45 min、60 min的Ⅱ?qū)?lián)心電圖(并讀出ST段(J點(diǎn))、T波值)及10 min、30 min、45 min、60 min、90 min心率(HR)值,最后一次ECG記錄完后,即刻取血、取心臟,測定CK、LDH、SOD活力和MDA、NO含量等生化指標(biāo)及心肌缺血與梗死范圍等形態(tài)學(xué)指標(biāo)[3-4]。假手術(shù)組大鼠手術(shù)過程中除不結(jié)扎外,其余同上[5-8]。

2 結(jié)果

2.1 對心肌梗死范圍影響 梗死范圍用TTC染色法。處死動物,立即取出心臟,用生理鹽水沖洗干凈心臟內(nèi)余血,用濾紙吸去水分,稱重,順房室溝將心肌平行切成厚度約1 mm的片狀,置1%TTC緩沖溶液中37 ℃水浴中充分反應(yīng)7 min,正常心肌染成為紅色,梗死區(qū)心肌不著色。將未染色部分心肌切下稱重,計(jì)算梗死區(qū)心肌重量占左心室重量的百分比[10-15]。

結(jié)果表明,與假手術(shù)組比較,模型組大鼠心肌出現(xiàn)顯著的缺血梗死區(qū)域(P<0.01)。與模型組比較,硝苯地平組、養(yǎng)心氏片高、中劑量組梗死區(qū)域明顯減少(P<0.05)。養(yǎng)心氏片低劑量組心肌梗死區(qū)域的減少與模型組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。與硝苯地平組比較,養(yǎng)心氏片高、中劑量組降低心肌梗死面積的強(qiáng)度與之差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),其中以養(yǎng)心氏片高劑量組作用最強(qiáng)。各組對心肌缺血大鼠心肌梗死范圍的影響見表2。

表2 養(yǎng)心氏片對冠脈結(jié)扎致心肌缺血大鼠心肌梗死范圍的影響±s)

注:與模型對照組比較,*P<0.05，**P<0.01。

2.2 各組對血清生化指標(biāo)的影響 與假手術(shù)組比較,結(jié)扎大鼠冠脈后,模型動物血清中CK、LDH的活力明顯升高,SOD活力明顯下降，MDA含量明顯升高,NO含量明顯下降(P<0.01)。與模型組比較,硝苯地平、養(yǎng)心氏片高劑量能明顯改善心肌缺血大鼠各血清心肌酶學(xué)等指標(biāo)的異常(P<0.05);養(yǎng)心氏片中劑量組能明顯降低心肌缺血大鼠血清MDA的含量,升高超氧化物歧化酶的活力(P<0.05);養(yǎng)心氏片低劑量能明顯降低心肌缺血大鼠血清MDA的含量(P<0.05)。結(jié)果詳見表3[11]。

2.3 各組對心率的影響 與假手術(shù)組比較,結(jié)扎冠脈后大鼠的心率變化率明顯升高(P<0.05)。與模型組比較,硝苯地平能明顯降低心肌缺血大鼠心率升高(P<0.05);養(yǎng)心氏片高劑量組能明顯降低心肌缺血大鼠心率升高(P<0.05);養(yǎng)心氏片中、低劑量組能分別降低結(jié)扎后30、10 min時(shí)大鼠心率(P<0.05);對心率的影響結(jié)果詳見表4。

2.4 各組對心肌缺血模型大鼠標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)心電圖(T波、S-T段(J點(diǎn)))指標(biāo)的影響 硝苯地平組、養(yǎng)心氏片高、中劑量組能明顯降低冠脈結(jié)扎致大鼠各時(shí)間點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)S-T段(J點(diǎn))的抬高(P<0.05),各給藥組均能明顯降低冠脈結(jié)扎致大鼠各時(shí)間點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)T波的抬高(P<0.05),改善心肌缺血時(shí)大鼠的心電圖狀況。結(jié)果詳見表5、表6中所示。

表3 養(yǎng)心氏片對冠脈結(jié)扎致心肌缺血大鼠血清生化指標(biāo)的影響±s,n=10)

注:模型對照組比較,*P<0.05,**P<0.01。

表4 養(yǎng)心氏片對冠脈結(jié)扎致心肌缺血大鼠心率(HR)的影響±s,n=10)

注:與模型對照組比較,*P<0.05,**P<0.01。

表5 養(yǎng)心氏片對冠脈結(jié)扎致心肌缺血大鼠標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)S-T段(J點(diǎn))的影響±s,n=10)

注:與模型對照組比較,*P<0.05,**P<0.01。

表6 養(yǎng)心氏片對冠脈結(jié)扎致心肌缺血大鼠標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)?lián)T波的影響±s,n=10)

注:與模型對照組比較,*P<0.05,**P<0.01。

3 討論

心臟是機(jī)體血液循環(huán)的“泵”器官,是保證全身供血、供氧的重要組織,而心臟本身做功所需要的能量和營養(yǎng)物質(zhì)幾乎唯一地由冠脈循環(huán)提供。當(dāng)心肌缺血時(shí),使冠脈血流量不足,導(dǎo)致心肌氧的供需平衡失調(diào),心肌缺血缺氧會導(dǎo)致心肌細(xì)胞代謝過程紊亂,尤其是能量物質(zhì)生成銳減,正常心功能難以維持,心肌收縮及舒張功能障礙;又因血流中斷,有害產(chǎn)物難以清除,心肌細(xì)胞和血清中各種酶等發(fā)生改變,造成心肌細(xì)胞損傷。同時(shí)由于心功能的下降,導(dǎo)致心肌力學(xué)和血流動力學(xué)各項(xiàng)指標(biāo)發(fā)生不同程度的改變。心肌細(xì)胞內(nèi)含有豐富的酶,如肌酸激酶等,心肌細(xì)胞損傷死亡后,酶隨著細(xì)胞膜通透性的增高而入血。隨著血流的減少,缺血心肌處于缺血缺氧狀態(tài),脂質(zhì)極易發(fā)生過氧化反應(yīng),形成脂質(zhì)過氧化物。由于缺氧所致過氧化物和自由基的增多,心肌細(xì)胞膜受損更甚,外漏之血液中的肌酸激酶等的增多[11,12,14]。

養(yǎng)心氏片通過降低心肌缺血大鼠的HR,抑制大鼠冠脈結(jié)扎所致T波升高的作用,明顯減小心肌壞死百分比%,使得心肌耗氧量降低,改善缺血心肌氧供需失衡的狀況。同時(shí)養(yǎng)心氏片能減少心肌酶的漏出,降低血清中CK、LDH活性;降低因脂質(zhì)過氧化而升高的MDA含量,升高SOD活性,提高缺血心肌細(xì)胞的抗氧化能力,減少脂質(zhì)過氧化引起的自由基損傷,又能升高血清NO含量,保護(hù)受損心肌細(xì)胞,降低心肌受損程度[5-6]。

綜上所述,養(yǎng)心氏片抗心肌缺血主要作用機(jī)制可能是,穩(wěn)定保護(hù)缺血心肌細(xì)胞,增加冠脈供血,減少心肌受損程度,減少梗死面積;改善心肌力學(xué),降低心肌耗氧量。養(yǎng)心氏片經(jīng)過現(xiàn)代先進(jìn)工藝提取、純化,制成片劑后,其有效成分含量提高,通過對大鼠冠脈結(jié)扎致心肌缺血模型的實(shí)驗(yàn)研究,表明養(yǎng)心氏片具有明顯的抗心肌缺血的作用,其中以片劑高劑量作用最強(qiáng),為臨床廣泛應(yīng)用于心血管疾病治療提供了試驗(yàn)依據(jù)[12-14]。

[1]徐叔云,卞如濂,陳修,等.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].3版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002:941-1059.

[2]陳奇.中藥藥理研究方法學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1993:494-495,534-536.

[3]沈曉飛,李佳川,曾勇,等.益心通絡(luò)顆粒對大鼠急性心肌缺血和血液流變學(xué)的影響[J].中藥藥理與臨床,2010(5):110-112.

[4]周文武,林玲,陳軍,等.冠脈結(jié)扎法制做大鼠心肌缺血模型[J].中國實(shí)驗(yàn)動物學(xué)報(bào)，2005,12(4):226-230.

[5]賀海波,許佳,徐媛青,等.竹節(jié)參總皂苷預(yù)處理對冠脈結(jié)扎致大鼠急性心肌缺血損傷的影響[J].中藥材,2012,35(5):744-749.

[6]余燕,龍子江,金花榮,等.心舒滴丸對冠脈結(jié)扎所致大鼠長期心肌缺血模型的影響[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2010,16(3):109-111.

[7]牟艷玲,王福文,張強(qiáng),等.甲胺鳶尾素對冠脈結(jié)扎致急性心肌缺血大鼠心功能的影響[J].中國藥學(xué)雜志,2014,49(2):126-128.

[8]楊勇.益心康泰膠囊對冠狀動脈結(jié)扎所致心肌缺血大鼠模型的保護(hù)作用[J].中外醫(yī)學(xué)研究,2012,10(16):13-14.

[9]李麗,梁緒國,劉錫強(qiáng),等.迷迭香酸對冠脈結(jié)扎大鼠心肌缺血損傷的保護(hù)作用[J].中國醫(yī)學(xué)創(chuàng)新,2009,6(22):18-20.

[10]魏征人,李紅,楊世杰.蒺藜皂苷對大鼠在體結(jié)扎冠脈造成的急性心肌缺血損傷的保護(hù)作用[J].吉林大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2005,31(1):1-4.

[11]李金華,姚小軍,王丹,等.加味黃連解毒湯抗心肌缺血作用[J].分子診斷與治療雜志,2014(2):117-120.

[12]朱盛,楊斌,劉建勛.祛痰化瘀通脈顆粒對急性心肌缺血大鼠血管新生的影響及機(jī)制研究[J].中華中醫(yī)藥雜志,2013,28(8):2290-2293.

[13]江文德,陳玉華,王迎平,等.丹參素及另兩種水溶性丹參成分抗心肌缺血和對冠狀動脈作用的研究[J].上海第一醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1982,9(1):13.

[14]黃秀蘭,王偉,周亞偉.淫羊藿總黃酮注射液對大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌缺血的保護(hù)作用[J].中國中西醫(yī)結(jié)合雜志,2006,26(1):68-71.

(2014-04-26收稿 責(zé)任編輯：王明)

The Effects of Yangxinshi Tablet on Myocardial Ischemia in Rats

Jiang Zuoling1, Gao Li1， Wang Hui1, Zhao Junmei1, Mei Ying2

(1ShanghaiPharmaceuticalGroupQingdaoGrowfulPharmaceuticalCo.Ltd，Qingdao266071，China；2NanjingGovernmentalHospital,Nanjing210018，China)

Objective:To study the effects of Yangxinshi tablet on myocardial ischemia induced by ligation of the coronary artery in rats.Methods:Ninety rats were randomly divided into six groups: sham group，model group，Yangxinshi tablet high dose group，medial dose group，low dose group and Nifedipine group. After 10 days of continuous administration，rat myocardial ischemia model was induced by ligation of the left anterior descending branch of the coronary artery, then the changes in myocardial mechanics were detected. The activities of creatine kinase(CK)，lactate dehydrogenase (LDH)，superoxide dismutase(SOD), malonaldehyde(MDA), nitric oxide(NO) were determined in each groups. Myocardial infarction sizes were measured after triphenyl tetrazolium chloride (TTC) staining.Results:Yangxinshi tablet significantly reduced myocardial infarction size, obviously decreased activities of CK, LDH and other Serum Myocardial Enzyme and improved abnormalities of ECG(P<0.05).Conclusion:Yangxinshi tablet shows protective effects on myocardial ischemia.

Yangxinshi tablet；Myocardial ischemia；Protective effects

“十一五”國家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(編號:2006BA106A18-12)

梅潁(1960.12—),女,主任中醫(yī)師,研究方向:老年病,E-mail:meiyingy1@163.com

R285.5

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.04.021