王保健，朱俊揚，簡克靈，楊光友，汪 濤，賴為民，趙習(xí)彬，廖曉霞，古小彬

(四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，成都 611133)

基于線粒體12S基因分析四川地區(qū)雞異刺線蟲的種群遺傳多態(tài)性

王保健，朱俊揚，簡克靈，楊光友，汪 濤，賴為民，趙習(xí)彬，廖曉霞，古小彬*

(四川農(nóng)業(yè)大學(xué)動物醫(yī)學(xué)院，成都 611133)

為探討四川地區(qū)雞異刺線蟲的遺傳變異特點和種群遺傳結(jié)構(gòu)特征，利用PCR技術(shù)擴增了四川7個地區(qū)共58株雞源雞異刺線蟲分離株的線粒體12S基因全序列，經(jīng)測序后分析其遺傳多樣性。結(jié)果顯示，58條雞異刺線蟲12S基因全序列均為699 bp，序列中共有38個變異位點和34個單倍型(HS1-HS34)；單倍型多樣性(Hd)和核苷酸多樣性(π)分別為0.822和0.003 95。進一步分析表明，7個地理種群遺傳分化不明顯(Fst=0.007 87)，種群間基因交流較頻繁(Nm=31.52)；分子方差分析(AMOVA)表明，四川地區(qū)雞異刺線蟲的遺傳分化主要來自于種群內(nèi)部(99.21%)，種群間遺傳變異水平較低(0.79%)；單倍型網(wǎng)絡(luò)圖和NJ系統(tǒng)發(fā)育樹顯示，雞異刺線蟲7個地理種群的34個單倍型散在分布于不同種群內(nèi)，分布格局較為混雜，未形成明顯的地理分布格局。結(jié)果表明，四川地區(qū)的雞異刺線蟲遺傳多樣性較低，遺傳分化不明顯，還未形成顯著的地理遺傳結(jié)構(gòu)。

雞異刺線蟲；12S；遺傳多態(tài)性；四川

雞異刺線蟲病又稱雞盲腸線蟲病(Histomoniasis)，是由異刺科(Heterakidae)異刺屬(Heterakis)的雞異刺線蟲(Heterakisgallinarum)寄生于多種家禽和野生鳥禽類盲腸內(nèi)常見的一種腸道線蟲病[1-3]。該病呈世界范圍內(nèi)分布，常引起結(jié)節(jié)性盲腸炎，使患病動物出現(xiàn)腹瀉、消瘦、貧血、產(chǎn)蛋率下降等癥狀，嚴重時甚至引起患病雞衰竭死亡[4-5]。同時，雞異刺線蟲亦是高致病率的火雞組織滴蟲病(Histomonasmeleagridis)的傳播媒介，給養(yǎng)禽業(yè)造成嚴重的經(jīng)濟損失[6-7]。

目前，有關(guān)雞異刺線蟲的研究主要集中在形態(tài)學(xué)、流行病學(xué)以及疾病的防控等方面，在分子水平上的研究還相對較少。至今僅報道了核糖體ITS基因、18S基因與線粒體16S基因在雞異刺線蟲分子分類與系統(tǒng)發(fā)育方面的研究情況[4，8-9]。線粒體12S rRNA基因進化速度適中，具有母系遺傳、無內(nèi)含子和缺少重組等遺傳特征，常被用于寄生蟲種群遺傳和系統(tǒng)進化的研究[10-12]。目前，雞異刺線蟲遺傳多樣性的研究在國內(nèi)外還尚屬空白，然而了解寄生蟲的群體遺傳結(jié)構(gòu)對其流行病學(xué)、進化生物學(xué)、抗藥性機制等研究具有重要的指導(dǎo)意義[13-14]。

本研究中作者選用線粒體12S基因作為分子標記，分析四川地區(qū)7個地理種群共58株雞源雞異刺線蟲的遺傳多樣性及遺傳分化等特征，探討四川地區(qū)雞異刺線蟲各地理種群之間的遺傳分化程度，為該地區(qū)雞異刺線蟲病的分子診斷和分子流行病學(xué)研究奠定基礎(chǔ)，亦為雞異刺線蟲病和火雞組織滴蟲病的防控提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

58個雞異刺線蟲樣品分別采集于成都(CD1-CD6)、達州(DZ1-DZ7)、廣元(GY1-GY7)、綿陽(MY1-MY8)、西昌(XC1-XC8)、雅安(YA1-YA10)及自貢(ZG1-ZG12)7地，從雞盲腸分離得到蟲體后，用滅菌生理鹽水清洗干凈，經(jīng)形態(tài)學(xué)鑒定[15]后保存于-20 ℃冰箱待用。

1.2 樣品基因組DNA的提取

基因組DNA的提取參照《分子克隆實驗指南》[16]，稍作改進。取凍存于-20 ℃的各地雞異刺線蟲1條置于預(yù)冷研缽中，加入適量DNA裂解緩沖液碾碎蟲體，隨后加入5 μL蛋白酶K(20 μg·L-1)消化至澄清，采用酚/氯仿法提取DNA，樣品于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 引物設(shè)計及12S序列的擴增

根據(jù)GenBank上已發(fā)表的雞蛔蟲(JX624728)、鴿蛔蟲(JX624729)和鸚鵡蛔蟲(JX624730)的線粒體基因組相關(guān)序列的保守區(qū)域，應(yīng)用Primer Premier5軟件設(shè)計一對引物。P1：5′-AGTTTATGAAG-AATGTTTGTTTTTGGTGC-3′；P2：5′-CCACCA-AAATCATACCTAACATACTC-3′。引物序列由上海英駿生物技術(shù)有限公司合成。

PCR 反應(yīng)體系(25 μL)：2×TaqPCR MasterMix 12.5 μL，上下游引物(20 pmol)各1 μL，模板DNA 1 μL，dd H2O 9.5 μL 。試劑混合以后進行瞬時離心混勻。PCR擴增反應(yīng)條件：94 ℃預(yù)變性5 min； 94 ℃變性30 s，53 ℃復(fù)性45 s，72 ℃延伸1 min，共35個循環(huán)；最后72 ℃延伸10 min。同時以dd H2O代替DNA模板作為空白對照。反應(yīng)結(jié)束后取5 μL擴增產(chǎn)物用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測其大小純度及亮度，隨后將陽性PCR產(chǎn)物送往英濰捷基生物技術(shù)有限公司進行正反雙向測序以保證測序結(jié)果的準確性。

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

測序結(jié)果返回后根據(jù)峰圖進行人工校對，以DNAman5.2.10軟件(Lynnon BioSoft，Quebec，Canada)對序列進行比對、拼接和剪切生成對應(yīng)的12S全序列文件。將這些序列輸入MEGA 5.0軟件[17]后運用Clustal W程序比對核苷酸序列，統(tǒng)計四川地區(qū)雞異刺線蟲12S基因的變異位點，并計算各個堿基(A、T、C、G)組成的含量和種群間遺傳距離(基于Kimura-2-parameter模型)。采用DNAsp 5.0軟件[18]計算種群的多態(tài)位點數(shù)、單倍型數(shù)(haplotypes)、核苷酸多樣性(Nucleotide diversity，Pi)、單倍型多樣性(Haplotypes diversity，Hd)、平均核苷酸差異指數(shù)(K)和核苷酸分歧度(Dxy)。采用Tcs 1.21軟件[19]構(gòu)建單倍型簡約網(wǎng)絡(luò)圖。以雞蛔蟲(Ascaridiagalli)(GenBank No.：JX624728)作為外群，采用NJ法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，并進行重復(fù)1 000次的自舉檢驗(bootstrap test)。用Arlequin 3.5軟件[20]中的分子變異分析(AMOVA)和種群間的遺傳差異分析(Fst)了解四川地區(qū)的遺傳結(jié)構(gòu)，基因流(Nm)由Nm=1/4(1/Fst-1)計算而得，并對各種群進行中性檢驗(Tajima’sD和Fu’sFs)。

2 結(jié) 果

2.1 12S基因的序列組成及單倍型分布

58條測序結(jié)果經(jīng)編輯和比對后均得到長為699 bp的12S基因全序列(登錄號：KR153880～KR153937)。經(jīng)MEGA 5.0軟件分析，12S序列的A、T、C、G堿基的平均含量分別為30.2%、39.3%、8.9%和21.6%，A+T堿基含量為69.5%，顯著高于C+G的堿基含量(30.5%)，表現(xiàn)出明顯的AT偏倚性。DNAsp 5.0軟件顯示58條序列中共有38個變異位點(占5.44%)，包括20個單變異位點和18個簡約信息位點，無堿基插入和缺失。其中35個轉(zhuǎn)換位點，3個顛換位點(圖1)。

哥們兒朝洛蒙沒有騎自行車，徒步走著出門去。太陽已經(jīng)西斜，天不怎么熱了。街上的小商小販們都從屋里或樹蔭下鉆出來，伸伸懶腰，跺跺腳跟，放個響屁，開始到街邊尋找自己的攤位。把鞋子襪子或百貨用具一件一件從板車上的布袋里往外拿，擺到屬于自己的領(lǐng)地上去。理發(fā)店門口的彩條燈轉(zhuǎn)起來，商店和小吃鋪也都放響音樂。夜生活的序幕徐徐地拉開了。

四川地區(qū)雞異刺線蟲的58個樣品共檢測出34個單倍型(HS1-HS34)(表1)，HS1、HS9和HS14為共享單倍型；其中單倍型HS1出現(xiàn)的頻率最高(20/58)，由7個地理種群共享，所占比率為34.5%。單倍型HS9由DZ7和YA11共享，單倍型HS14由GY6和XC5共享，其余均為各群體特有的單倍型。

2.2 種群遺傳多樣性與種群擴張

從表1可見，四川各種群的單倍型多樣性(Hd)范圍為0.786(西昌種群)～1.000(廣元種群)，四川整體種群單倍型多樣性(Hd)為0.882，表明四川雞異刺線蟲種群單倍型多樣性(Hd)較為豐富。西昌種群的核苷酸多樣性(π)最低(0.002 86)，達州種群的核苷酸多樣性(π)最高(0.005 31)，四川整體核苷酸多樣性(π)為0.003 95(表1)，表明四川雞異刺線蟲種群核苷酸多樣性(π)較低。四川各種群的平均核苷酸差異指數(shù)(K)范圍為2.000(西昌種群)～3.714(達州種群)(表1)。

HS1～HS34為單倍型；小圓點代表堿基相同；上方的數(shù)字代表變異位點HS1-HS34 are haplotypes；A small dot indicates the same base as the first line；Numbers on top of the figure represent variable sites圖1 雞異刺線蟲34個單倍型12S基因核苷酸變異Fig.1 Nucleotide substitutions of mitochondrial 12S gene in 34 haplotypes of Heterakis gallinarum

從表2可見，四川各地理種群間的核苷酸分歧度(Dxy)相差較小(0.315%～0.492%)，其中雅安種群和西昌種群間核苷酸分歧度(Dxy)最小(0.315%)，達州種群和自貢種群間的核苷酸分歧度(Dxy)最大(0.492%)。四川各種群間的核苷酸分歧度表現(xiàn)為達州和其它種群的核苷酸分歧度較大。四川雞異刺線蟲各種群間的遺傳距離為0.317%～0.496%，以雅安種群和西昌種群間遺傳距離最小(0.317%)，達州種群和自貢種群間的遺傳距離最大(0.496%)(表2)，與核苷酸分歧度結(jié)果一致。四川整體種群的平均遺傳距離為0.004。

從中性檢驗值來看，7個地理種群的Tajima’sD值和Fu’sFs值均為負值(-1.975 83～-0.496 05；-4.265 77～-0.282 27)，廣元種群和雅安種群的Tajima’sD值和Fu’sFs值為負值且差異顯著(P<0.05)(表1)。四川整體種群的Tajima’sD值和Fu’sFs值均為負值(-1.252 13，P>0.05和-1.913 42，P>0.05)(表1)。由此可見，四川地區(qū)的雞異刺線蟲種群歷史中可能出現(xiàn)過擴張現(xiàn)象。

2.3 種群分化和遺傳結(jié)構(gòu)

根據(jù)AMOVA分子變異分析，種群內(nèi)遺傳變異占總變異的99.21%，而僅有0.79%的變異發(fā)生在種群間(表3)，可見種群內(nèi)分子遺傳變異是總變異的主要來源。四川整體種群的總Fst值為0.007 87，7個地理種群間的Fst值為-0.059 82～0.061 65(表4)，其中成都與西昌種群間的Fst最高為0.061 65。四川7個地理種群間基因流Nm為-49.269 6～120.522 9，四川整體種群的總基因流Nm為31.52，表明種群間存在較大的基因交流。

2.4 系統(tǒng)發(fā)育樹與單倍型網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

從構(gòu)建的NJ樹來看(圖2)，34個雞異刺線蟲的單倍型構(gòu)成一個大的分支，顯著區(qū)分于作為外群的雞蛔蟲(Ascaridiagalli)。各單倍型并沒有按照地理來源的不同分成幾個明顯的簇，單倍型的出現(xiàn)沒有一定的規(guī)律可循，尚未形成顯著的地理種群結(jié)構(gòu)。

圖2 基于12S基因的34個單倍型構(gòu)建的NJ樹Fig.2 Neighbor-Joining(NJ) tree constructed by using 34 12S haplotypes

單倍型網(wǎng)絡(luò)圖顯示單倍型HS1位于網(wǎng)絡(luò)圖的中心呈輻射狀分布，相鄰單倍型之間的突變從1步到5步不等(圖3)。網(wǎng)絡(luò)圖中各單倍型的聚類情況與NJ樹的聚類情況非常相似，同樣未形成顯著的地理種群結(jié)構(gòu)。

3 討 論

本研究首次成功擴增了雞異刺線蟲線粒體12S基因全序列，并分析了四川七個地區(qū)雞異刺線蟲的種群遺傳多態(tài)性和種群遺傳結(jié)構(gòu)。寄生蟲種群遺傳結(jié)構(gòu)受特殊地理環(huán)境和宿主因素的影響[21]。四川省位于長江上游，地跨青藏高原、橫斷山脈、云貴高原、秦巴山地和四川盆地等幾大地貌單元，地勢西高東低，地形復(fù)雜多樣，境內(nèi)高山峽谷、江河湖泊較多這些自然屏障在地理隔離中具有重要的作用[22]。本研究中雞異刺線蟲分離株的來源地達州、廣元、綿陽、西昌、雅安和自貢屬于成都平原或秦巴山系、大涼山系等山系，這些山系不僅具有各自不同的生態(tài)環(huán)境，且各山系間被山脈、河流分隔開來。四川從東到西依次有渠江、嘉陵江、涪江、岷江和大渡河等，這些流域的存在進一步將以上各地區(qū)隔離開。這些高山峽谷以及大江大河的存在從客觀上構(gòu)成了四川七個雞異刺線蟲群體間基因交流屏障，但是從本研究結(jié)果來看，四川雞異刺線蟲各地理種群間基因交流頻繁，造成這一現(xiàn)象的原因很可能是由于雞異刺線蟲的宿主的遷移和其他的人為因素。本文從種群遺傳多樣性、遺傳分化水平、種群遺傳結(jié)構(gòu)和系統(tǒng)發(fā)育樹等方面對四川地區(qū)雞異刺線蟲群體遺傳多態(tài)性進行了討論分析。

表3 四川雞異刺線蟲12S 序列變異分子方差分析

Table 3 Analysis of molecular variance ofH.gallinarumpopulations from Sichuan base on mitochondrial 12S gene

變異來源Sourceofvariation自由度df平方和Sumofsquares方差組分Variancecomponents方差比率Percentageofvariation群體間Amongpopulations68．7590．01087Va0．79群體內(nèi)Withinpopulations5269．8961．37502Vb99．21合計Total5878．6551．38139

表4 四川雞異刺線種群間線粒體12S基因的遺傳分化度(Fst)(下三角)和基因流(Nm)(上三角)

Table 4 Pairwise fixation index(Fstvalues)(below diagonal) and gene flow(Nm)(above diagonal) ofH.gallinarumpopulations among the seven different geographical regions in Sichuan，inferred from the 12S mitochondrial gene

種群Population成都(CD)達州(DZ)廣元(GY)綿陽(MY)西昌(XC)雅安(YA)自貢(ZG)成都(CD)—6．7022-10．5001-49．26963．805210．619616．1434達州(DZ)0．03596—-8．40134．973613．366629．90684．4360廣元(GY)-0．02439-0．03067—120．5229-6．5711-4．4292-9．5196綿陽(MY)-0．005100．047680．00207—7．470820．54874．6443西昌(XC)0．06165?0．01836-0．039550．03238—-5．41219．0264雅安(YA)0．023000．00829-0．059820．01202-0．04843—-20．1070自貢(ZG)0．015250．05335-0．026970．05108?0．02695-0．01259—

*.P< 0.05

圓圈的大小與單倍型的分布頻率成正比；不同顏色代表不同樣品來源The circle sizes are proportional to the number of isolates；Different colors represent different sample sources圖3 基于34個單倍型構(gòu)建的單倍型網(wǎng)絡(luò)圖Fig.3 A network map of the 34 12S haplotypes in H.gallinarum

3.1 遺傳多樣性分析

遺傳多樣性不僅是形成生物多樣性的基礎(chǔ)，也是物種進化潛能的保證。遺傳多樣性的降低或喪失對于生活在多變環(huán)境中的物種群體是一個極大的威脅[23]。通常單倍型多樣性(Hd)和核苷酸多樣性(π)是衡量一個物種或群體遺傳多樣性的2個重要指標[24]。本研究中的58株雞異刺線蟲分離株共有34個單倍型，其Hd達0.882，表明四川地區(qū)雞異刺線蟲的單倍型多樣性較為豐富。但四川地區(qū)雞異刺線蟲種群總核苷酸多樣性僅為0.003 95，表現(xiàn)出較低的核苷酸多樣性水平。這種高Hd值、低π值的現(xiàn)象反映了雞異刺線蟲種群在歷史中可能出現(xiàn)過瓶頸效應(yīng)，隨后經(jīng)歷了快速的種群擴張，種群通過變異迅速的形成了較高的單倍型多樣性，但還未能積累較高的核苷酸多樣性水平[25]。這種高Hd、低π的現(xiàn)象常發(fā)現(xiàn)于大多數(shù)具有較大的母系有效種群和較強繁殖能力的無脊椎動物中[26-27]。此外，Tajima’sD和Fu’sFs檢驗也同樣證明了雞異刺線蟲群體在歷史上可能出現(xiàn)過群體擴張事件。

3.2 遺傳分化和遺傳結(jié)構(gòu)分析

遺傳分化系數(shù)(Fst)和基因流(Nm)是兩個最能反映遺傳分化的指標[28]，從四川地區(qū)雞異刺線蟲遺傳分化指數(shù)(Fst)來看，種群間的遺傳分化指數(shù)為-0.059 82～0.061 65，種群總的遺傳分化指數(shù)為0.007 87，均表現(xiàn)出較低的遺傳分化水平。而種群的總基因流達到31.52，說明四川雞異刺線蟲種群間存在廣泛的基因交流。這種廣泛的基因交流很可能是由于宿主的移動造成的，目前已有許多關(guān)于宿主移動對寄生蟲基因流影響的相關(guān)報道[29-30]。此外，雞異刺線蟲是多宿主寄生蟲，它不僅可以寄生在多種家禽體內(nèi)也可寄生于多種野生鳥禽類動物。這種多宿主的寄生蟲一般比單一宿主的寄生蟲具有更低的遺傳分化水平與更高的基因交流水平[21，31]。這是因為雞異刺線蟲蟲卵隨糞便排出后，可能會污染飲水和飼料，蚯蚓及一些陸生甲殼類動物也可以作為雞異刺線蟲的存儲宿主。當雞或其他鳥禽吞食污染的飼料飲水或者存儲宿主后就會造成雞異刺線蟲在不同宿主之間傳播，由于宿主的遷移進而引起雞異刺線蟲在不同地域之間傳播，從而形成廣泛的基因交流，弱化了種群間遺傳分化。從種群間的遺傳距離來看，四川雞異刺線蟲七個地理種群之間遺傳距離較小(0.003～0.005)。AMOVA分析結(jié)果也顯示，變異主要發(fā)生在種群內(nèi)部(99.21%)，種群間變異較小(0.79%)。這些結(jié)果均表明四川雞異刺線蟲各地理種群間存在頻繁的基因交流，遺傳分化水平較低。

3.3 系統(tǒng)發(fā)生樹和單倍型網(wǎng)絡(luò)圖分析

根據(jù)D.Posada等[32]的理論，本研究中的單倍型HS1可能為最古老的單倍型。單倍型網(wǎng)絡(luò)圖也顯示單倍型HS1是四川地區(qū)雞異刺線蟲種群的起源中心，其余單倍型都由此演化而來。此外，種群間的低遺傳分化，單倍型關(guān)系不符合地理分布也進一步說明四川地區(qū)雞異刺線蟲各種群可能起源于一個近期的大種群，然后再擴散到其他區(qū)域[33]。系統(tǒng)發(fā)育樹的拓撲結(jié)構(gòu)顯示，四川地區(qū)雞異刺線蟲各種群的系統(tǒng)發(fā)生關(guān)系與其分布的地理區(qū)域沒有直接相關(guān)性，并沒有形成顯著的地理遺傳結(jié)構(gòu)，單倍型HS1在所有地理種群中均存在，且來自于同一地理種群的不同單倍型并沒有聚成一簇，這也進一步表明四川地區(qū)雞異刺線蟲各地理種群間交流較為頻繁，遺傳分化水平較低。

從本研究的結(jié)果來看，四川雞異刺線蟲各地理種群之間存在廣泛的基因交流，在此過程中火雞組織滴蟲也可能隨著雞異刺線蟲的傳播而流行。此外，雞異刺線蟲種群間頻繁的基因交流也會導(dǎo)致寄生蟲耐藥基因的彼此傳遞，從而使寄生蟲產(chǎn)生耐藥性[29]。

4 結(jié) 論

對采自我國四川地區(qū)雞體內(nèi)的58株雞異刺線蟲的線粒體12S基因進行了全序列測定以及種群遺傳多態(tài)性分析。發(fā)現(xiàn)四川地區(qū)雞異刺線蟲的遺傳多樣性較低，各種群間基因交流較為頻繁，遺傳分化水平較低，還未形成顯著的地理遺傳結(jié)構(gòu)。

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(編輯 白永平)

Population Genetic Polymorphisms ofHeterakisgallinarumin Sichuan Base on Mitochondrial 12S Gene

WANG Bao-jian，ZHU Jun-yang，JIAN Ke-ling，YANG Guang-you，WANG Tao，LAI Wei-min，ZHAO Xi-bin，LIAO Xiao-xia，GU Xiao-bin*

(CollegeofVeterinaryMedicine，SichuanAgriculturalUniversity，Chengdu611133，China)

To study the population genetic diversity and genetic structure ofHeterakisgallinarumpopulation in Sichuan，the complete sequence of mitochondrial 12S gene of 58H.gallinarumisolates from 7 different geographical regions in Sichuan were amplified and analyzed the genetic diversity.The results showed that the complete lengths of mitochondrial 12S gene sequenced from 58H.gallinarumisolates in this study were all 699 bp.These sequences contained 38 variable sites and were classified into 34 haplotypes(HS1-HS34).The values of haplotypes diversity(Hd) and nucleotide diversity(π) were 0.822 and 0.003 95，respectively.Genetic diversity with Fst and Nm furtherly showed that there were no significant genetic differentiation and frequent gene flow among the seven populations(Fst=0.007 87，Nm=31.52).An analysis of molecular variance(AMOVA) estimated that 99.21% of the genetic variation was partitioned within the population，and only 0.79% occurred among populations.NJ phylogenetic tree and haplotype network were both revealed that 34 haplotypes from 7 different geographical regions dispersed different geographical populations，and haplotypes did not cluster according to their geographical location.The results indicated that theH.gallinarumpopulation in Sichuan had a low level of genetic diversity and no significant genetic differentiation，it have not formed significant geographical genetic structure.

Heterakisgallinarum；12S gene；genetic polymorphisms；Sichuan

10.11843/j.issn.0366-6964.2015.12.019

2015-04-07

國家自然科學(xué)基金青年基金項目(31402188)；四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)科“雙支計劃”(03570422)

王保健(1990-)，男，湖北隨州人，碩士生，主要從事動物寄生蟲病學(xué)研究，E-mail：wangbaojian900325@163.com

*通信作者：古小彬，副教授，碩導(dǎo)，主要從事動物寄生蟲與寄生蟲病學(xué)研究，E-mail：guxb121@126.com

S852.731

A

0366-6964(2015)12-2264-09