韓進輝
(吉林省蛟河市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,吉林蛟河 132500)
雞減蛋綜合征的現(xiàn)場診斷、實驗室檢驗及防制
韓進輝
(吉林省蛟河市動物衛(wèi)生監(jiān)督所,吉林蛟河 132500)
雞減蛋綜合征是20世紀70年代后期發(fā)現(xiàn)的由減蛋綜合征病毒(EDSV)引起的世界性的商品蛋雞和母雞產(chǎn)蛋下降的病毒性疾病。其臨診特征為雞群產(chǎn)蛋突然下降,大量出現(xiàn)軟皮蛋和畸形蛋,蛋殼顏色變淺。該病在世界范圍內(nèi)都有流行和發(fā)生,給養(yǎng)雞業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。
雞減蛋綜合征;實驗室檢驗;防制
(1)流行病學(xué):各種年齡的雞對本病病毒都易感,但主要侵害26~32周齡雞,35周齡以上則較少發(fā)病,幼齡雞感染后不表現(xiàn)癥狀。鴨、鵝是自然宿主。病毒經(jīng)受精卵垂直傳播是本病病毒的主要傳播方式。雞與雞之間接觸以及被病毒污染的飲水、飼料和器具,帶毒的鴨、鵝和某些野禽,也起到傳播的作用,但病毒水平傳播的速度較慢,且有時呈間斷性。雞感染本病的特征,當(dāng)病毒侵入雞體后,在性成熟前,幼雞不表現(xiàn)致病性,在產(chǎn)蛋初期由于應(yīng)激反應(yīng)致使病毒活化而使產(chǎn)蛋雞發(fā)病。
(2)臨診癥狀:病初有色蛋殼的顏色消褪,隨后可能生薄殼、軟殼和無殼蛋。發(fā)病雞群產(chǎn)蛋量下降通常突然發(fā)生于產(chǎn)蛋高峰期前后,下降幅度可達20~50%,持續(xù)期為4~10周左右。
雞產(chǎn)蛋下降綜合征檢疫常用的檢驗方去有病毒分離鑒定、血凝與血凝抑制試驗、血清中和試驗、瓊脂擴散試驗等。
(1)病毒分離鑒定:①樣品采集及處理。取減產(chǎn)母雞的輸卵管、子宮、卵巢,或咽喉部、泄殖腔棉拭子,或劣質(zhì)蛋的蛋清等,冰凍保存。全測時將病料加2~5倍的pH7.2、0.1mol/L磷酸鹽緩沖液,研磨制成懸液,凍融2~3次,以3000轉(zhuǎn)/min離心20min,取上清液,按500~2000單位(μg)/ml加入青、鏈霉素,37℃處理30min。泄殖腔拭子浸入含有青、鏈霉素沖液中充分擠壓后取出拭子,將溶液凍融2~3次,離心取上清液。蛋清則加入適量的含有青、鏈霉素的磷酸鹽緩沖液(以可暢通吸入注射器即可),37℃處理30min。
(2)病毒分離:取處理后的樣品上清液0.2ml,經(jīng)絨毛尿囊腔接種10日齡左右的無減蛋綜合征抗體的健康鴨胚,每份病料接種4枚,培養(yǎng)48~120h,收取鴨胚(棄去48h以內(nèi)死亡的鴨胚),無菌收集尿囊液,置-20℃保存,供盲傳或病毒鑒定用。
(3)病毒鑒定:采用血凝與血凝抑制試驗方法鑒定病毒。如果被檢尿囊液能凝集雞血細胞,且這種血凝活性又能夠被標準陽性血清抑制,則分離物含有本病病毒。
(2)血凝與血凝抑制試驗:本試驗用于病毒鑒定和血清抗體測定。
①器材準備:96孔U型微量板、微型振蕩器、50μl移液器??乖㈥栃院完幮詷藴恃逵芍付▎挝惶峁?。1%雞紅細胞懸液:采集成年雞血,用20倍體積的生理鹽水洗滌3~4次,每次以2000轉(zhuǎn)/min離心3~4min,反復(fù)吸棄上層血漿及白細胞。最后一次離心5min,棄去上清液,加入生理鹽水制成1%的紅細胞懸液。②血凝試驗(抗原血凝效價測定)在血凝板上每孔加入50μl生理鹽水,取抗原或被檢物尿囊液(病毒鑒定)加入每排第一孔,每孔50μl,混合后取50μl加入第二孔,從左至右依次倍比稀釋至第十一孔,從第十一孔中吸50μl棄去,第十二孔為紅細胞對照。每孔加入1%雞紅細胞懸液50μl,置微量振蕩器震蕩1min,放置室溫下(18~20℃)作用30min,觀察血凝圖像。每排第十二孔紅細胞對照應(yīng)不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象。以紅細胞出現(xiàn)完全凝集的抗原最大稀釋度為該抗原的血凝價。測定抗原的血凝價時應(yīng)并列做四排,取四排平均值確定。③血凝抑制試驗:A.計算出含4個血凝單位的抗原濃度:抗原稀釋倍數(shù)=血凝滴度(血凝價)/4。B.在微量板上每排第一孔加入生理鹽水50μl,第二孔加入濃度為8個血凝單位的抗原50μl;第三至十一孔加入濃度為4個血凝單位的抗原50μl。C.每排第一孔分別加被檢血清50μl,混勻后吸取50μl加入第二孔,依次倍比稀釋至第十一孔,混勻后棄去50μl。D.每孔加入1%紅細胞懸液50μl,振蕩后室溫靜置10min,然后進行結(jié)果判定。④結(jié)果判定:當(dāng)被檢血清孔和紅細胞對照孔的紅細胞全部沉于孔底,陰性血清對照孔凝集紅細胞,抗原對照孔出現(xiàn)凝集現(xiàn)象,陽性血清對照孔抑制滴度≥1:16,抗原對照孔出現(xiàn)紅細胞凝集時,本試驗成立。以完全抑制紅細胞凝集的最大稀釋度,為該血清的血凝抑制抗體滴度。被檢血清抗體滴度≥1:16,判為陽性。
本病是一種腺病毒,可經(jīng)種蛋垂直傳播,用0.5%的福爾馬林處理即喪失感染性。控制本病的有效方法是疫苗接種。疫苗有雞減蛋綜合征油乳劑滅活苗、雞減蛋綜合征蜂膠苗等,一般于雞產(chǎn)蛋前2~4周注射,劑量按使用說明。治療可采用利巴韋林原粉飲水,1g加水10kg,連用3~5d。配合使用復(fù)方增蛋靈,每袋250g拌料80kg,連用7~10d。同時飼料中應(yīng)添加適量的蛋白質(zhì)和微量元素,提高雞群的抗病能力,可以防止其他感染發(fā)生。重癥酌情加量,預(yù)防劑量減半。
中藥治療:黃連、黃柏、黃芩、金銀花、大青葉、板蘭根、甘草各50g,黃藥子、白藥子各30g,混合加水5000ml,煎二次,合并后加白糖1000g,可供500只雞飲用。一日一劑,連用3~5d。注意,喂前要禁水、禁食半天,這樣可提高治療效果。
預(yù)防措施,應(yīng)加強飼養(yǎng)管理及衛(wèi)生管理等措施。加強種雞和產(chǎn)蛋雞的免疫,配合中草藥進行預(yù)防,對肉雞采用“全進全出的”的養(yǎng)殖方法,空舍后進行清理并徹底消毒,空置一段時間后再進雞。
[1] 胡青海,謝三星.雞減蛋綜合癥實驗室診斷技術(shù)研究進展[J].中國動物檢疫,1994,(4):26-28.
韓進輝(1977—),男,大學(xué),助理獸醫(yī)師,主要從事工作動物衛(wèi)生監(jiān)督工作。