陳靜 陳德明 徐玉玲/四川省興文縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心

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動(dòng)物血液樣品采集制備與保存的方法

陳靜 陳德明 徐玉玲/四川省興文縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心

隨著國際國內(nèi)動(dòng)物疫病形式復(fù)雜多變，我國養(yǎng)殖業(yè)集約化程度不斷提升，廣大基層畜牧獸醫(yī)工作者做好轄區(qū)內(nèi)動(dòng)物疫病監(jiān)測(cè)對(duì)保障畜牧業(yè)健康發(fā)展具有十分重要的意義。其中最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)是樣品采集，樣品質(zhì)量的好壞直接決定監(jiān)測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確與否，而在基層采集數(shù)量最多的則是各種家畜家禽的血液樣品。本文對(duì)幾種常見畜禽血液樣品的采集、制備及保存的方法作了闡述,供同仁參考。

一、常見畜禽血液樣品的采集

（一）家禽的采血方法

1.心臟采血。

對(duì)于雛雞，采血者可獨(dú)立完成，仰臥保定，左手抓雞，右手持采血針，平行頸椎從胸腔前口插入，回抽見有回血時(shí)，即把針芯向外拉使血液流入采血針。成年禽的心臟采血可采用側(cè)臥法和仰臥法。側(cè)臥法：助手抓住禽兩翅及兩腿，右側(cè)臥保定，采血者在觸及心搏動(dòng)明顯處，或胸骨脊前端至背部下凹處連線的1/2處消毒，垂直進(jìn)針2～3 cm，回抽見有回血時(shí)，針芯外拉收集血液。仰臥法：助手仰臥保定禽，采血者用手指壓離嗉囊，露出胸前口，用裝有長針頭的注射器，將針頭沿其鎖骨俯角（既胸骨前端與兩側(cè)鎖骨融合形成“V”字的地方）刺入，順血針的穩(wěn)定性，進(jìn)針不宜過深，針頭的切口面應(yīng)向上，先刺入皮下再刺入血管。如刺破血管，皮下很快血腫，則采血失敗。抽血速度要慢，因?yàn)殪o脈血管回血流速較慢，過快容易導(dǎo)致血管內(nèi)壓突然降低造成血管壁塌陷而阻塞針頭，影響采血量。如需反復(fù)采血，應(yīng)自遠(yuǎn)離心臟端開始,以免發(fā)生栓塞而影響整條靜脈的采血。除此以外，家禽血液樣品采集的方法還有雞冠采血法、頸靜脈采血法、跖骨內(nèi)側(cè)靜脈采血法等。

(二)豬的采血方法

1.耳緣靜脈采血。

適用40 kg以上的中大豬或種豬，采集少量的血液。動(dòng)物站立或橫臥保定，助手用力在耳根捏壓靜脈近心端，或用酒精棉球反復(fù)涂擦耳靜脈使血管怒張。采血者左手拉平耳朵并使采血部位稍高，右手持注射器或采血針，針頭與豬耳水平面呈10～15度角進(jìn)針，如見回血再將針頭順血管向內(nèi)送入1cm，松開捏壓，緩慢抽取血液或接入真空采血管。黑色皮膚豬的耳靜脈不易看清，可用手電筒照射耳腹面。此法也可用于采集家兔的血液。

2.前腔靜脈采血。

公母豬和中大豬，站立保定，助手讓豬前肢剛好站立在地面上，使豬的頭頸與水平面呈30度角，露出右腋窩。采血著體中線方向水平穿行，刺入心臟抽取血液。如刺入心臟，采血者可感到心臟跳動(dòng)，稍回抽針芯可見回血，否則，應(yīng)將針頭稍拔出調(diào)整角度再刺入直至抽出血液。生產(chǎn)實(shí)踐中，由于家禽品種和個(gè)體大小不同進(jìn)針位置和深度也會(huì)有細(xì)微的不同，操作時(shí)需作適當(dāng)調(diào)整。

心臟采血可大量采血，但容易造成死亡，不宜連續(xù)使用。特別是對(duì)雛禽，常因針頭刺破心臟或傷及肺臟導(dǎo)致出血過多而死亡，而且心臟的修復(fù)能力特別差，對(duì)畜禽后期生長發(fā)育影響較大。為此，采血時(shí)，我們要找準(zhǔn)采樣部位，跟著心臟的跳動(dòng)頻率緩慢抽取血液，切忌抽血過快。

2.禽翅靜脈采血。

翅靜脈采血法是家禽采血方法中最常用的一種。助手側(cè)臥保定禽只，使翅膀展開，露出腋窩部。拔掉該處羽毛，可見由翼根進(jìn)入腋窩的翼根靜脈，其遠(yuǎn)心端則是較細(xì)的翼下靜脈。采血者左手拇指壓迫血管近心端，待血管怒張后，用裝有細(xì)針頭的注射器，由翼根向翅方向平行刺入靜脈，即可緩慢抽取血液。選擇的采血部位可是翼根靜脈，也可是翅中部較直的一段翅下靜脈。

由于禽類翼下表皮很薄，血管較細(xì)，采血時(shí)要保證禽只和手持采針對(duì)準(zhǔn)頸部最低凹陷處，用針垂直刺入，回抽針管內(nèi)芯，若針頭扎中前腔靜脈，可見血液流出。如果抽不到血液，說明針頭沒有扎中，可上下輕微移動(dòng)針頭，直到針管中見到血液為止。20 kg以下的小豬，采血部位選擇豬兩前肢與氣管交匯處（即兩側(cè)第一對(duì)肋骨與胸骨結(jié)合處的前側(cè)方呈兩個(gè)明顯的凹窩）。助手仰臥保定豬，把前肢向后方拉直。采血者使用裝有長針頭的注射器采血，針刺方向?yàn)橄蚝髢?nèi)方與地面呈60度角刺入2～3 cm，當(dāng)進(jìn)入約2 cm時(shí)可一邊刺入一邊回抽針管內(nèi)芯；刺入血管時(shí)即可見血液進(jìn)入針管內(nèi)。

需要注意的是，豬前腔靜脈的粗細(xì)及位置的深淺與豬的體重大小、肥瘦程度有關(guān)，此血管越往頭部越淺，但也越細(xì)；越靠胸部越粗，但也越深，所以，采血應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)牟课?，一般小豬應(yīng)稍靠后，中大豬和種母豬，應(yīng)略靠前。同時(shí)，我們還應(yīng)選用合適的針頭，建議100 kg以上的大豬，選擇14#×38 mm針頭，40 kg～100 kg的育肥豬，選擇12#×30 mm針頭，10～40 kg小豬，選擇12#×25 mm針頭；10 kg以下乳豬，選擇9#×20 mm針頭?？傊i前腔靜脈采血進(jìn)針的部位、深度、角度因豬只的不同而有細(xì)微差異，初學(xué)者需要通過不斷的實(shí)踐才能熟練掌握采血技巧。

(三)牛、羊的采血方法

1.頸靜脈采血。

將動(dòng)物站立保定，使其頭部稍前伸并稍微偏向?qū)?cè)，采血者站于頸側(cè)，在頸靜脈溝上1/3與中1/3交界處剪毛消毒，左手拇指（或食指與中指）壓迫采血部位下方頸靜脈血管，使其充盈怒張。右手持采血針頭，沿靜靜脈溝與皮膚呈45度角，由下向上方刺入，血液順器壁流入容器內(nèi)，防止氣泡產(chǎn)生。結(jié)合實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)，牛的皮膚較厚，采血刺入時(shí)應(yīng)用手腕的彈撥力瞬間刺入；采血時(shí)一定要等血管充分怒張后才進(jìn)針，且采血期間按壓的手指不宜放松，否則，針頭易滑落。

2.牛尾靜脈采血。

將牛引其自鎖頸枷內(nèi)，借以保定，采血者左手抬起牛尾往上翹與水平面呈45度角。右手在離尾根10 cm左右，第 4、5尾椎骨交界中點(diǎn)凹陷處消毒，將采血針針頭垂直刺人約0.5～1 cm深。如針頭觸及尾骨則需略微退點(diǎn)再進(jìn)行抽血。此法與牛頸靜脈采血相比，有易操作，用工少，應(yīng)激小等優(yōu)點(diǎn)，可普遍推廣。

二、血液樣品的制備與保存

（一）抗凝血的制備

抗凝血常用作細(xì)菌學(xué)或病毒學(xué)的樣品檢驗(yàn)。采血前，應(yīng)預(yù)先在真空采血管或其他容器內(nèi)按比例加抗凝劑濕潤內(nèi)壁，并放置在45℃～60℃干燥箱中烘干備用。常用的抗凝劑有0.1%肝素或3.8%檸檬酸鈉，血液每10 ml需要抗凝劑的量為1 ml。也可直接購買抗凝試管。血液注入容器后，立即輕輕搖動(dòng)試管，使血液和抗凝劑混勻。這樣的抗凝血即為全血。抗凝血如經(jīng)過靜置或2 000～3 000 rpm離心10 min（血樣采集后半小時(shí)之內(nèi)進(jìn)行）使血細(xì)胞下沉，其上清液則為血漿。

(二)非抗凝血的制備

即不加抗凝劑采血，等血液凝固后析出的血清常用來作血清學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)。血清的制備，首先是將血液室溫（20℃～25℃）傾斜45～60度角放置2～3 h，血清將自然析出；或?qū)⒀菏覝貎A斜靜置半小時(shí)以上，2 000～3 000 rpm低速離心10 min；也可將凝固的血液傾斜放置4℃冰箱約1 h，然后3 000～4 000 rpm離心3～5 min。如果是用一次性注射器采血分離血清，應(yīng)針芯后拉抽入少量空氣，便于凝血。

（三）樣品制備的注意事項(xiàng)

為了避免溶血，血液存放的容器（如試管）必須清潔無菌；血清未離前，血樣應(yīng)避免震蕩，血液凝固后方可轉(zhuǎn)移至冷藏箱，送往實(shí)驗(yàn)室。同時(shí)，還應(yīng)注意消毒采血部位后，要等酒精干后才能采血。偶爾也會(huì)遇到采集的血液離心后呈膠凍狀，這是血液中的纖維蛋白原不能完全參與凝血，血清變?yōu)槟z凍狀的纖維蛋白凝塊。造成的原因可能是采血時(shí)動(dòng)物剛進(jìn)食不久，飲水過少，或者脂肪堆積過多，以及血液靜置時(shí)間不夠，血液纖維蛋白收縮不完全就離心。要避免此種現(xiàn)象，建議空腹采血，采血后靜置時(shí)間充足。確實(shí)出現(xiàn)這種情況時(shí)，也可用滅菌的針頭或用槍頭將膠凍物挑出，再離心或靜止也能提取出少量血清。

（四）血液樣品的保存

采集的血樣經(jīng)分裝密封后做好標(biāo)記，立即4℃冷藏送往實(shí)驗(yàn)室。而不同溫度下血液樣品保存時(shí)間長短則不同，所以我們應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)時(shí)間的安排，選擇恰當(dāng)?shù)谋４鏃l件。病毒檢測(cè)樣品：- 20℃以下保存。細(xì)菌檢測(cè)樣品：4℃保存，不宜冷凍。一般情況下，20℃～25℃血液樣品的保存時(shí)間不超過8 h；4℃全血或血漿的保存不超過48 h，血清的保存不超過一周。血液樣品如需長時(shí)間保存，應(yīng)采集完畢后立即- 40℃快速冷凍后再轉(zhuǎn)移到- 20℃或- 70℃下保存，均不可超過三個(gè)月。為了保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，各類血液樣品解凍時(shí)應(yīng)先放置4℃條件下溶解1 d，再移入室溫，切忌反復(fù)凍融。