李曉君，李 芳，唐海豐

（上海市普陀區(qū)疾病預(yù)防控制中心，上海 200333）

上海市普陀區(qū)2013年手足口病病原學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果分析

李曉君，李 芳，唐海豐

（上海市普陀區(qū)疾病預(yù)防控制中心，上海 200333）

目的 了解2013年上海市普陀區(qū)手足口病的病原學(xué)特點(diǎn)，為手足口病的防控提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。方法采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR對(duì)366例疑似手足口病患者的咽拭子、皰疹液和肛拭子進(jìn)行腸道病毒通用核酸(EV)、腸道病毒71型(EV71)、柯薩奇病毒A組16型(CA16)、柯薩奇病毒A組10型(CA10)和柯薩奇病毒A組6型(CA6)基因檢測(cè)。結(jié)果引起手足口病的腸道病毒主要為柯薩奇病毒A組6型(CA6)和腸道病毒71型(EV71)，366例手足口病者中腸道病毒通用核酸陽性者273例(74.59%)，柯薩奇病毒A組6型(CA6)陽性者169例(46.17%)，腸道病毒71型(EV71)陽性者58例(15.85%)，柯薩奇病毒A組16型(CoxA16)陽性者18例(4.92%)，柯薩奇病毒A組10型(CA10)陽性者8例(2.19%)。結(jié)論2013年上海市普陀區(qū)手足口病者的病原學(xué)特點(diǎn)以CA6為主，占46.17%；EV71次之，占15.85%。提示上海市普陀區(qū)手足口病病原體組成復(fù)雜，應(yīng)深入分析CA6的流行趨勢(shì)，加強(qiáng)手足口病病原譜監(jiān)測(cè)，為手足口病防治提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。

手足口??；柯薩奇病毒A組6型；腸道病毒71型；柯薩奇病毒A組10型；柯薩奇病毒A組16型

手足口病是世界范圍流行的兒童常見傳染病，除了腸道病毒71型和柯薩奇病毒A組16型是其最主要的病原體外，其他腸道病毒A組的CA2、CA4、CA5、CA6、 CA8、CA9、CA10等，腸道病毒B組的1、2、3、4、5型等，以及?？刹《镜榷伎梢鹗肿憧诓1]，特別是腸道病毒A組的CA6和CA10在引起手足口病的病原中與EV71和CA16同等重要[2]，為了解引起普陀區(qū)手足口病病原體型別和分布特征，筆者應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法對(duì)2013年采集的臨床診斷為手足口病病例標(biāo)本進(jìn)行基因檢測(cè)，現(xiàn)將其病原學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果匯總分析如下：

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品 2013年1～12月上海市普陀區(qū)4家三級(jí)醫(yī)院和10家社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)中心送檢的臨床診斷為手足口病的患者共計(jì)366例，共621份標(biāo)本，其中咽拭子345份，皰疹液58份，肛拭子218份。采集標(biāo)本置Eagle's緩沖液采樣管中，4℃冰箱暫存待用，-80℃長(zhǎng)期保存。

1.1.2 試劑 腸道病毒通用型核酸檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)：20131001)、EV71核酸檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)：20131001)、CA16核酸檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)：20131001)、CA6核酸檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)：20131001)以及CA10核酸檢測(cè)試劑盒(生產(chǎn)批號(hào)：20131001)均購(gòu)自上海之江生物科技股份有限公司。

1.1.3 儀器 ABI7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(生產(chǎn)廠家：美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司)，QIA cube核酸提純儀(生產(chǎn)廠家：德國(guó)凱杰公司)。

1.2 方法

1.2.1 RNA提取 取140 μl上述樣品按照RNA全自動(dòng)核酸提純程序?qū)?biāo)本進(jìn)行RNA提取。

1.2.2 核酸擴(kuò)增 首先對(duì)每份標(biāo)本做腸道病毒通用核酸檢測(cè)，然后再對(duì)腸道病毒通用核酸陽性標(biāo)本進(jìn)行腸道病毒EV71、CA16、CA6以及CA10實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)。根據(jù)PCR試劑盒說明書配置PCR擴(kuò)增體系，取樣品核酸、陽性對(duì)照品、DEPC-H2O各5 μl分別加入到擴(kuò)增體系中，立即進(jìn)行擴(kuò)增。推薦循環(huán)參數(shù)設(shè)置：45℃10 min；95℃15 min；循環(huán)一次，再按95℃15 s→60℃60 s，循環(huán)40次，單點(diǎn)熒光檢測(cè)在60℃，反應(yīng)體系為25 μl。

1.2.3 結(jié)果判斷 樣品Ct值≤38，且呈現(xiàn)典型的S型曲線時(shí)判斷為陽性，若Ct值為38～40，復(fù)檢一次如仍為38～40，則報(bào)告為陰性。

2 結(jié)果

2.1 一般資料分析 2013年共收集366例手足口病者的不同類型標(biāo)本共621份，其中腸道病毒通用核酸陽性者273例，陽性率為74.59%。對(duì)273例腸道病毒通用核酸陽性者進(jìn)一步分析各型腸道病毒陽性病例構(gòu)成比，其中CA6陽性者169例(陽性率為46.17%)和EV71陽性者58例(陽性率為15.85%)，CA16陽性者18例(陽性率為4.92%)和CA10陽性者8例(陽性率為2.19%)，其他腸道病毒陽性者20例(陽性率為5.46%)，表明2013年普陀區(qū)手足口病者以CA6感染為主。

2.2 時(shí)間分布 2013年全年均有病例報(bào)告，病例檢出主要集中在4～7月，8月份開始明顯減少，9月至次年1月略有增加。季節(jié)性分析結(jié)果表明上海市普陀區(qū)手足口發(fā)病呈現(xiàn)雙峰型分布(春峰、秋峰)。CA6為主要病原體，5～7月、9～11月出現(xiàn)CA6陽性檢出率高峰。EV71陽性檢出率僅次于CA6，4～6月陽性檢出率達(dá)高峰，見圖1。

圖1 2013年CA6、EV71、CV16、CA10陽性病例的月份分布

2.3 年齡分布 2013年報(bào)告的手足口病者中發(fā)病年齡為0～14歲，平均年齡3.91歲，主要集中在＜5歲年齡組，共報(bào)告發(fā)病341例，占發(fā)病總數(shù)的93.17% (341/366)。CA6陽性者主要集中在1～4歲年齡組，達(dá)到132例(78.11%)，年齡分布情況見表1。

表1 2013年上海市普陀區(qū)手足口不同年齡病例檢出情況(例)

2.4 性別分布 2013年報(bào)告的366例手足口病者中男性患者237例，女性患者129例，男女患者比例約為1.8:1。核酸陽性病例中男性患者182例，核酸陽性率為76.79%(182/237)，女性患者91例，核酸陽性率為70.54%(91/129)，陽性病例中男女比例約為2:1。

2.5 人群分布 2013年報(bào)告的366例手足口病者中散居兒童160例，幼托機(jī)構(gòu)199例，學(xué)生7例，分別占全年發(fā)病總數(shù)的43.72%、54.37%、1.91%。核酸陽性病例中散居兒童100例，核酸陽性率62.50% (100/160)，幼托機(jī)構(gòu)168例，核酸陽性率84.42%(168/ 199)，學(xué)生5例，核酸陽性率71.43%(5/7)，見表2。

表2 2013年上海市普陀區(qū)不同人群手足口病例檢測(cè)情況(例)

2.6 標(biāo)本類型 2013年收集366例手足口病者不同類型樣本共621份，其中咽拭子345份，皰疹液58份，肛拭子218份；核酸陽性393份，陽性率為63.29%。不同類型標(biāo)本檢出率肛拭子最高為77.52% (169/218)，其次是咽拭子62.03%(214/345)，再次為皰疹液17.24%(10/58)。

3 討論

對(duì)2013年上海市普陀區(qū)366例手足口病者621份標(biāo)本進(jìn)行核酸檢測(cè)分析，發(fā)現(xiàn)病原體主要為CA6和EV71，其中CA6占到所有手足口病者的46.17%，其次為CA16和CA10。近年來CA6和CA10的流行呈上升趨勢(shì)，雖然目前EV71和CA16已被廣泛認(rèn)同是導(dǎo)致手足口病流行的最主要兩種病原[3]，但是病原體優(yōu)勢(shì)毒株有向CA6和CA10轉(zhuǎn)變的趨勢(shì)，這與新加坡報(bào)道的CA6和CA10在引起手足口病的病原體中與CA16和EV71同等重要[3]相符合。在日本和臺(tái)灣CA6、CA10與皰疹性咽峽炎的暴發(fā)相關(guān)，2008年秋季芬蘭暴發(fā)的以脫甲為臨床特征的手足口疫情中，CA6和CA10是主要病原體。此外，上海市每年引起手足口病優(yōu)勢(shì)病毒型別一直都在發(fā)生變化[4]，而且不同型別在不同時(shí)期存在共循環(huán)和交替[5]，于是手足口病病原學(xué)的監(jiān)測(cè)中對(duì)腸道病毒的分型鑒定顯得尤為重要，以便更全面了解優(yōu)勢(shì)型別的變化和其病原譜的構(gòu)成。因此，CA6是引起上海地區(qū)手足口病流行的重要病原體，應(yīng)加強(qiáng)對(duì)CA6的監(jiān)測(cè)。

從2013年全年監(jiān)測(cè)情況來看，手足口病好發(fā)于夏秋季節(jié)，呈現(xiàn)明顯的春秋兩峰分布，而CA6感染病例的月份分布基本上與手足口病的流行時(shí)間保持一致，也呈現(xiàn)出春、秋季兩個(gè)高峰，與張曉玲等[6]研究中CA6感染例數(shù)有隨月份而增加的趨勢(shì)有差異。0～5歲兒童是手足口病的高發(fā)人群，CA6感染也主要集中在1～4歲年齡組，可能與該類人群的抗體陽性率低有關(guān)[7]。此外，HFMD有明顯的幼托機(jī)構(gòu)集聚現(xiàn)象，54.4%的病例為幼托兒童，性別構(gòu)成中男性多于女性，與很多報(bào)道的結(jié)果一致[8-9]。標(biāo)本類型中肛拭子的檢出率最高，皰疹液的檢出率反而低，可能是由于皰疹液采樣困難，未能真正采集到皰疹液而導(dǎo)致其陽性率反而低于肛拭子和咽拭子。

總之，近年來手足口病發(fā)病率有增高的趨勢(shì)，應(yīng)繼續(xù)加強(qiáng)對(duì)手足口病的監(jiān)測(cè)工作，為手足口病的預(yù)防和防治提供科學(xué)依據(jù)，更加有效地控制手足口病的暴發(fā)流行。

[1]許華茹,成洪旗,常彩云.2007～2009年濟(jì)南市手足口病疫情分析[J].中國(guó)病原生物學(xué)雜志,2010,5(12):935-937.

[2]陳智偉,姚 栩,陳霄璐,等.福州地區(qū)2012年柯薩奇A6型腸道病毒分子特征分析[J].中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào),2013,29(11): 1124-1126.

[3]Ang LW,Koh BK,Chan KP,et al.Epidemiology and control of hand,foot and mouth disease in Singapore,2001-2007[J].Ann A Cad Med Singapore,2009,38:106-112.

[4]胡海赟,喬 蓉,沈 琦,等.2009-2011年上海市手足口病病原學(xué)檢測(cè)及其臨床特點(diǎn)分析[J].中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志,2012,26 (5):341-343.

[5]曲 梅,李 潔,賈 蕾,等.北京市2009年手足口病的病原構(gòu)成及柯薩奇A組16型病毒基因特征分析[J].病毒學(xué)報(bào),2010,26(6): 432-436.

[6]張曉玲,俞慧菊,余 曜,等.2010年上海部分地區(qū)440例手足口病病例的病原譜及分子流行病學(xué)分析[J].微生物與感染,2011,6 (4):214-224.

[7]張 穎,和 鵬,陳 純,等.廣州市2011年柯薩奇病毒A組6型的分子流行病學(xué)特征[J].中華流行病學(xué)雜志,2014,35(1): 103-104.

[8]陳德穎,林向利,楊正輝.利用國(guó)家疾病監(jiān)測(cè)信息管理系統(tǒng)開展手足口病監(jiān)測(cè)報(bào)告[J].疾病監(jiān)測(cè),2006,21(8):435-438.

[9]常昭瑞,張 靜,孫軍玲,等.中國(guó)2008-2009年手足口病報(bào)告病例流行病學(xué)特征分析[J].中華流行病學(xué)雜志,2011,32(7):676-680.

Analysis on the monitoring results of etiological characteristics of hand,foot and mouth disease in Putuo District of Shanghai in 2013.

LI Xiao-jun,LI Fang,TANG Hai-feng.Shanghai Putuo District Center for Disease Control and Prevention,Shanghai 200333,CHINA

ObjectiveTo investigate the etiological characteristics of hand,foot and mouth disease(HFMD) in Putuo District of Shanghai in 2013,so as to provide the laboratory basis for prevention and control of HFMD.MethodsReal-time fluorescent quantitative PCR was used for detecting the nucleic acid of universal entervirus (EV),Enterovirus 71(EV71),Coxsackie virus A16(CA16),Coxsackievirus A10(CA10)and Coxsackievirus A6 (CA6)in throat swabs,herpes fluid and anal swabs from 366 patients with suspected HFMD.ResultsCA6 was detected most frequently,followed by EV71.There were 273 EV-positive cases(74.59%),169 CA6-positive cases (46.17%),58 EV71-positive cases(15.85%),18 CA16-positive cases(4.92%),and 8 CA10-positive cases(2.19%).ConclusionThe etiological characteristics of HFMD in Putuo District of Shanghai in 2013 showed the mostly detected pathogen was CA6(accounting for 46.17%),followed by EV71(accounting for 15.85%).It suggested that the pathogen composition of HFMD in Putuo District of Shanghai is complex.Further research on trends of CA6 and monitor on HFMD pathogen spectrum should be strengthened,so as to provide experimental evidence for prevention and treatment of HFMD.

HFMD;CoxsackievirusA6;Enterovirus 71;CoxsackievirusA10;CoxsackievirusA16

R51

A

1003—6350（2015）05—0755—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.05.0270

2014-08-08)

李曉君。E-mail：296030226@qq.com