陳穎 朱明華

·述評(píng)·

液態(tài)活檢技術(shù)的發(fā)展及腫瘤領(lǐng)域的應(yīng)用

陳穎 朱明華★

廣義而言，液態(tài)活檢是指以血液為主的體液標(biāo)本中細(xì)胞及核酸的檢測(cè)，包括了循環(huán)腫瘤細(xì)胞和游離DNA兩大類。液態(tài)活檢屬于新型的無創(chuàng)性分子病理檢測(cè)方式，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景；對(duì)于傳統(tǒng)病理學(xué)而言，液態(tài)活檢的出現(xiàn)既是機(jī)遇也是挑戰(zhàn)。本文主要從分子檢測(cè)技術(shù)以及臨床應(yīng)用價(jià)值這兩方面綜合闡述了液態(tài)活檢作為一種新的非侵入式的檢測(cè)方法在臨床腫瘤早期診斷、篩查等領(lǐng)域的發(fā)展前景及面臨的挑戰(zhàn)。

液態(tài)活檢；非侵入式檢測(cè)；分子檢測(cè)

組織病理學(xué)是在顯微鏡下直接觀察病變組織的形態(tài)學(xué)改變，因而病理診斷被譽(yù)為是疾病診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，在臨床診斷中具有不可動(dòng)搖的地位［1］。隨著分子生物學(xué)研究日益發(fā)展，人類對(duì)疾病的認(rèn)識(shí)也不再局限于表型和形態(tài)學(xué)，根據(jù)腫瘤發(fā)生的分子機(jī)制，形成了分子病理學(xué)。分子病理學(xué)的研究對(duì)象十分廣泛，包含了組織、細(xì)胞和體液，而“液態(tài)活檢”（liquid biopsy）就是其中的重要分支之一。

“液態(tài)活檢”這一概念最早在1974年由Sorrells等［2］提出，當(dāng)時(shí)指關(guān)節(jié)腔的滑液分析用于診斷滑膜疾病。液態(tài)活檢的標(biāo)本來源主要為以血液為主的體液，其中包括胸水、腹水等其他體液成分，而血液是最容易獲得的臨床標(biāo)本。本文詳細(xì)總結(jié)了液態(tài)活檢的對(duì)象、方法和應(yīng)用領(lǐng)域，旨在為腫瘤的診斷和治療提供新的手段，為病人的預(yù)后和轉(zhuǎn)歸提供新的依據(jù)。

1 液態(tài)活檢的研究對(duì)象

液態(tài)活檢的研究對(duì)象主要包括外周血循環(huán)中存在的循環(huán)腫瘤細(xì)胞（circulating tumor cells，CTCs）和游離DNA（cell-free DNA，cfDNA）兩大類。

1.1 循環(huán)腫瘤細(xì)胞

CTCs的概念雛形最早于1869年由Ashworth提出［3］。當(dāng)時(shí)Ashworth設(shè)想，血液循環(huán)中可能存在與原發(fā)病灶性質(zhì)相同的腫瘤細(xì)胞，而這正是患者體內(nèi)腫瘤的播散機(jī)制。越來越多的研究證實(shí)腫瘤患者的外周循環(huán)中存在以小簇、團(tuán)狀形式存在的腫瘤細(xì)胞，現(xiàn)在認(rèn)為CTCs是惡性腫瘤出現(xiàn)血路轉(zhuǎn)移的主要生物學(xué)基礎(chǔ)，其數(shù)量的多少與患者的預(yù)后關(guān)系密切［4］。早期關(guān)于CTCs的研究主要集中于乳腺癌，30％～40％左右的乳腺癌患者的外周血或骨髓中可以檢測(cè)到CTCs，尤其在缺乏明確淋巴結(jié)及遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移、臨床分期早期患者的體內(nèi)就存在，是預(yù)測(cè)患者未來發(fā)生轉(zhuǎn)移的獨(dú)立預(yù)后因素［5］。隨著腫瘤特異性標(biāo)記物應(yīng)用的廣泛開展和檢測(cè)敏感性的提高，在許多惡性腫瘤如肺癌［6］、胰腺癌［7］、前列腺癌［8］、膀胱癌［9］、大腸癌［10］等中均能發(fā)現(xiàn)CTCs，而且檢出率也要遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于上述的比例，甚至還有學(xué)者將CTCs形容為實(shí)體瘤的“白血病樣”階段（leukem ic phase）［11］。腫瘤進(jìn)展過程中，腫瘤細(xì)胞通過基因突變或表觀遺傳學(xué)改變等而獲得了更具侵襲能力的生物表型或干細(xì)胞特性，其中上皮－間葉轉(zhuǎn)化（epithelial tomesenchymal transition，EMT）被認(rèn)為是CTCs出現(xiàn)的主要機(jī)制之一［12］。由此看來，CTCs與其起源的原發(fā)病灶中的腫瘤細(xì)胞雖然相似，但是兩者之間并不存在完全相同基因譜或表達(dá)譜系。大量的臨床試驗(yàn)均證實(shí)，CTCs具有很強(qiáng)的預(yù)后判斷和轉(zhuǎn)移預(yù)測(cè)價(jià)值［13］，因此通過研究CTCs的生物學(xué)和遺傳學(xué)特性相較于原發(fā)灶具有更豐富的臨床指導(dǎo)意義。

1.2 循環(huán)腫瘤DNA

1948年Mandel和Metais［14］在人類血循環(huán)中發(fā)現(xiàn)了游離DNA的存在，稱之為“Cell-free DNA”（cfDNA）。此后，cfDNA的檢測(cè)開始增多，尤其是作為無創(chuàng)性檢測(cè)手段（non-invasive prenatal testing，NIPT）應(yīng)用于高危孕婦的產(chǎn)前診斷，比如唐氏綜合癥［15］、先兆子癇［16］等。

目前發(fā)現(xiàn)腫瘤患者的外周血中也能檢測(cè)到游離核酸（cell-free nuclear acids，cfNAs）的存在［17］，認(rèn)為是由腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生的，其中以基因組和線粒體DNA成分為主，也被稱為循環(huán)腫瘤DNA（circulating tumor DNA，ctDNA），其他還包括RNA和m icroRNA。腫瘤細(xì)胞可以是來自組織中的病灶，也可以來自外周血或骨髓中存在的微轉(zhuǎn)移癌栓或CTCs［18］。腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生ctDNA主要通過被動(dòng)和主動(dòng)機(jī)制2種途徑來完成。被動(dòng)機(jī)制是指凋亡和壞死的細(xì)胞會(huì)釋放出細(xì)胞核和線粒體DNA進(jìn)入血液循環(huán)［19］。在正常生理情況下，釋放的DNA數(shù)量不多，單核巨噬細(xì)胞能及時(shí)清除壞死和凋亡細(xì)胞的碎片，因此正常人群外周血中的游離DNA含量幾乎測(cè)不出來。而腫瘤患者體內(nèi)由于腫瘤細(xì)胞生長快速，壞死和凋亡的細(xì)胞數(shù)目明顯增加，釋放的DNA數(shù)量也多，再加上腫瘤免疫功能的紊亂，不能及時(shí)清除，因而造成較多的ctDNA進(jìn)入外周血循環(huán)［20］。主動(dòng)機(jī)制則是指腫瘤細(xì)胞能主動(dòng)釋放DNA到外周循環(huán)之中。研究發(fā)現(xiàn)，在前列腺癌［18］、肺癌［21］、乳腺癌［22］、大腸癌［23］、肝癌［24］、膀胱癌［25］、宮頸癌［26］、胰腺癌［27］、卵巢癌［28］等人類惡性腫瘤中均能檢測(cè)到ctDNA。外周血中提取得到的ctDNA包含了編碼和非編碼DNA，可以用于腫瘤相關(guān)基因的遺傳學(xué)和表觀遺傳學(xué)研究，如基因突變、異常擴(kuò)增、雜合性缺失（loss of heterozygosity，LOH）、微衛(wèi)星不穩(wěn)定性（m icrosatellite instability，MSI）、特異性靶點(diǎn)標(biāo)記、表達(dá)譜分析、m iRNA研究、染色體分析以及甲基化等，用于指導(dǎo)臨床用藥、判斷預(yù)后、化療效果評(píng)估、耐藥性檢測(cè)、監(jiān)測(cè)病程進(jìn)展以及復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的預(yù)測(cè)等方面。

2 常用檢測(cè)技術(shù)

2.1 CTCs分離、富集相關(guān)技術(shù)

2.1.1 免疫磁珠富集法（immunomagnetic beads separation，IMS）

IMS技術(shù)基于細(xì)胞表面的抗原與連有特異性抗體的磁珠相結(jié)合，并在外源磁場(chǎng)的作用下富集細(xì)胞，其根據(jù)分離的策略可以分為陽性富集法和陰性富集法兩大類。陽性富集法是指磁珠結(jié)合得到的細(xì)胞就是所需要的細(xì)胞。目前唯一已獲得美國食品藥品監(jiān)督局（Food and Drug Adm inistration，F(xiàn)DA）批準(zhǔn)上市的CELLSEARCH?循環(huán)腫瘤細(xì)胞檢測(cè)試劑盒就是針對(duì)細(xì)胞表面的上皮細(xì)胞粘附分子（epithelial cell adhesionmolecule，EpCAM）來分離CTCs。該試劑盒提出了具有臨床預(yù)后判斷意義的CTCs的檢出數(shù)目：轉(zhuǎn)移性乳腺癌和前列腺中，CTCs數(shù)目小于5個(gè)／7.5m L外周血表明患者預(yù)后較好；轉(zhuǎn)移性大腸癌中，CTCs數(shù)目小于3個(gè)／7.5

m L外周血表明患者預(yù)后較好。根據(jù)CTCs的含量與臨床預(yù)后的關(guān)聯(lián)其他還在研究階段的磁珠包被標(biāo)記物如廣譜標(biāo)記物（全角蛋白）和其他腫瘤類型相關(guān)標(biāo)記物如CerBb2、Mucin、AFP等。此外，用于分離CTCs的標(biāo)記物除了蛋白質(zhì)類標(biāo)記物，還包括了mRNA和端粒酶類的標(biāo)記物［29］，提高了CTCs的檢出效率。但是腫瘤相關(guān)的標(biāo)記物的種類非常繁雜，并沒有一個(gè)標(biāo)記物能“放之四海而皆準(zhǔn)”?；谶@些情況產(chǎn)生了陰性富集法。所謂陰性富集法是指磁珠結(jié)合得到的細(xì)胞不是所需要的細(xì)胞，主要應(yīng)用了針對(duì)白細(xì)胞的廣譜標(biāo)記物CD45，在磁場(chǎng)作用中剔除了有核細(xì)胞游中的白細(xì)胞，其中未被結(jié)合的細(xì)胞就是所需要的CTCs［30］，能大大增加CTCs的檢出數(shù)量。但是免疫磁珠法仍然受到標(biāo)記物的限制，由于腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞存在交叉抗原表達(dá)，并且腫瘤細(xì)胞本身存在顯著異質(zhì)性，同一個(gè)患者得到的CTCs并不會(huì)表達(dá)一致性的標(biāo)記，因此容易出現(xiàn)假陽性或假陰性的結(jié)果。

2.1.2 CTCs芯片技術(shù)

2007年，麻省總醫(yī)院開發(fā)了第一代CTCs芯片，能從外周血中分離得到CTCs［31］。第一代CTCs芯片是基于微流體學(xué)原理，以微陣距的方式將針對(duì)CTCs細(xì)胞表面標(biāo)記物——EpCAM的抗體包被在芯片上，當(dāng)血液樣本通過芯片時(shí)，就能通過抗體將其中的CTCs細(xì)胞捕獲下來。經(jīng)過驗(yàn)證，Nagrath等發(fā)現(xiàn)該芯片技術(shù)能高效地獲取99％的轉(zhuǎn)移性乳腺癌、肺癌、胰腺癌以及結(jié)腸癌患者外周血中的CTCs，捕獲的細(xì)胞數(shù)目范圍在5個(gè)～1 281個(gè)細(xì)胞／m L［31］。2010年，Stott等在第一代CTCs芯片的基礎(chǔ)上經(jīng)過改良，研發(fā)了第二代芯片，因?yàn)槠潢嚲囝愃启~骨樣，因此被稱為鯡魚骨芯片（herringbongchip，HB-chip）［32］。與第一代平板型的芯片不同，第二代根據(jù)微流體渦流原理設(shè)計(jì)了彎道型的內(nèi)槽，增加了細(xì)胞與包被抗體時(shí)間的接觸時(shí)間，顯著提高了CTCs的獲取效率。因?yàn)榈诙酒砻嬖O(shè)置的是透明的外殼，因此在芯片上還能進(jìn)行各種原位檢測(cè)，如蘇木素-伊紅染色、免疫熒光染色等，透過芯片通過顯微鏡能直觀地觀察CTCs的形態(tài)學(xué)特征和染色結(jié)果。但是由于目前報(bào)道較少，CTCs芯片尚需要得到大規(guī)模樣本的驗(yàn)證才能真正投入臨床應(yīng)用。

2.1.3 密度梯度離心法（density gradient centrigate，DGC）

DGC技術(shù)基于CTCs與有核白細(xì)胞具有不同的漂浮系數(shù)的原理，在等滲溶液中提取CTCs。商品化的等滲溶液有LymhoPrepTM、Ficoll-HyPaqueTM、OncoquickR等產(chǎn)品。StemCell公司開發(fā)的Rosette-SepTM人類循環(huán)上皮類腫瘤細(xì)胞試劑盒在密度梯度離心的基礎(chǔ)上還添加了針對(duì)白細(xì)胞的抗體四聚體以增加其沉降效率，減少白細(xì)胞對(duì)CTCs的干擾。這些檢測(cè)方法仍然存在靈敏度較低的缺陷，無法捕捉到少量、稀有的CTCs。

2.1.4 濾過膜分離法（filtermembrane filtration，F(xiàn)MF）

FMF技術(shù)基于CTCs的細(xì)胞體積顯著大于白細(xì)胞的原理，采用一定孔徑的濾過膜將CTCs從血液中分離出來，也被稱為膜濾過分離腫瘤細(xì)胞技術(shù)（isolation by size of epithelial tumor cells，ISET），每毫升血液中可以提取到至少1個(gè)腫瘤細(xì)胞［33］。由于ISET法分離CTCs主要基于細(xì)胞的體積而不是細(xì)胞表面的相關(guān)抗原，因此主要適用于異質(zhì)性明顯的惡性腫瘤如肺癌、胃癌和前列腺癌等，大大降低了由于抗原交叉表達(dá)或差異表達(dá)而導(dǎo)致的假陽性率［34］。但正因?yàn)槿绱?，ISET法只能分離得到體積較大的CTCs，對(duì)于那些體積較小的CTCs就容易濾過，從而得到假陰性的結(jié)果。研究者［35］研發(fā)了一種結(jié)合濾過膜和微機(jī)電原理的CTCs分離及原位電裂解系統(tǒng)（m icro-electro-mechanical system／MEMS-based in situ cell lysis），其能更高效地分離CTCs并及時(shí)抽提細(xì)胞基因組DNA。

2.1.5 基于流式細(xì)胞儀的CTCs富集法（flow cytometry-based CTCs enrichment，ImageStream?）

該方法主要針對(duì)腫瘤細(xì)胞表面特異性抗原并應(yīng)用流式細(xì)胞儀的細(xì)胞分選技術(shù)篩選分離得到表達(dá)相應(yīng)標(biāo)記物的CTCs，可選用的標(biāo)記物包括了角蛋白（cytokeratin）、CA19-9、甲胎蛋白、癌胚抗原、表皮生長因子受體等多種腫瘤相關(guān)分子。同樣，由于腫瘤細(xì)胞與正常細(xì)胞之間的交叉抗原表達(dá)，這種CTCs的富集方法也受到了標(biāo)記物的限制，容易出現(xiàn)假陽性的結(jié)果，不能完全保證CTCs的純度。

2.2 ctDNA分離及檢測(cè)技術(shù)

2.2.1 ctDNA分離技術(shù)

ctDNA由于片段較小、含量很少，而且容易和

血漿蛋白相結(jié)合，因而常規(guī)的提取效率都不高。針對(duì)血漿中ctDNA的抽提原理主要有四大類：鹽析法、酚-氯仿抽提法、微柱吸附法和磁珠吸附法。目前商品化的試劑盒絕大多數(shù)都是基于以上后兩種原理研發(fā)的。而傳統(tǒng)的鹽析法和酚-氯仿法由于操作步驟復(fù)雜、需要使用有機(jī)溶劑、ctDNA的提取效率較低，現(xiàn)在基本上已經(jīng)不再使用了。通過比較各類試劑盒發(fā)現(xiàn)，磁珠法獲得的ctDNA在質(zhì)量和含量上都要優(yōu)于微柱吸附法，假陽性率也較低［36］。

2.2.2 ctDNA檢測(cè)技術(shù)

ctDNA研究的關(guān)鍵技術(shù)是如何從外周血中分離得到足夠量的、高質(zhì)量的游離DNA，相對(duì)而言該檢測(cè)技術(shù)比較簡單。ctDNA檢測(cè)技術(shù)根據(jù)檢測(cè)目的來選擇相應(yīng)的技術(shù)方法，其中大部分是以PCR技術(shù)為基礎(chǔ)，如實(shí)時(shí)熒光定量PCR、甲基化特異性PCR等，也有基于微珠富集原理的方法［36］。目前，ctDNA檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)廣泛地應(yīng)用于K-ras、BRAF、HER-2、p53、EGFR、APC等腫瘤靶向治療、診斷及預(yù)后相關(guān)標(biāo)記的檢測(cè)。尤其是新一代測(cè)序技術(shù)飛速發(fā)展的今天，基于ctDNA的全基因組測(cè)序、全外顯子測(cè)序或全轉(zhuǎn)錄本深度測(cè)序方法將逐漸替代原來傳統(tǒng)的基因突變或測(cè)序方法，也將探索出越來越多的腫瘤相關(guān)片段，如耐藥、惡性生物學(xué)行為等方面。

3 臨床應(yīng)用價(jià)值

3.1 臨床療效監(jiān)測(cè)

由于ctDNA和CTCs的分離和檢測(cè)屬于無創(chuàng)性檢測(cè)手段，從外周血中提取即能實(shí)現(xiàn)，因此很適合臨床上用于監(jiān)測(cè)腫瘤患者的疾病發(fā)展及對(duì)藥物治療的反應(yīng)性以及耐藥情況，尤其是藥物靶向治療。腫瘤細(xì)胞在藥物作用過程中會(huì)通過表型和基因改變形成耐藥性克隆而產(chǎn)生繼發(fā)性耐藥現(xiàn)象，目前看來，這是影響藥物治療效果的主要原因。研究者對(duì)乳腺癌、卵巢癌和肺癌患者在接受常規(guī)化療的不同時(shí)相的外周血中游離DNA進(jìn)行了全外顯子測(cè)序，從中篩選得到了一系列基因的改變，如PIK3CA、EGFR（耐藥相關(guān)突變T790M）、RB1等基因的突變，可以以此作為監(jiān)測(cè)化療療效的良好靶標(biāo)［37－38］。

3.2 預(yù)后判斷及臨床分期

早期診斷、準(zhǔn)確分期以及治療監(jiān)測(cè)是臨床腫瘤學(xué)中的重要內(nèi)容。以往的TNM（tumor，nodal metastasis和distantmetastasis）分期主要是基于腫瘤的臨床特征，如腫瘤大小、侵犯周圍組織的情況、淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移情況。組織活檢由于對(duì)病人造成一定程度的創(chuàng)傷，往往不能反復(fù)多次進(jìn)行。腫瘤的原發(fā)灶和轉(zhuǎn)移灶之間存在遺傳學(xué)、表觀遺傳學(xué)甚至轉(zhuǎn)錄組學(xué)的差異。利用外周血中的CTCs或ctDNA能更準(zhǔn)確、更高效評(píng)估腫瘤的進(jìn)展，尤其是對(duì)于那些不宜進(jìn)行活檢的患者。

2012年美國癌癥聯(lián)合委員會(huì)（American Joint Comm ittee on Cancer，AJCC）重新修訂了乳腺癌的TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，將“缺乏臨床或影像學(xué)證據(jù)證實(shí)的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、但在外周循環(huán)、骨髓或其他遠(yuǎn)處組織內(nèi)通過分子生物學(xué)或顯微鏡觀察確定存在的、小于0.2mm的轉(zhuǎn)移灶定位cM 0（i＋）期”，確定了CTCs及ctDNA的重要臨床意義。

研究表明，外周血中出現(xiàn)高頻的腫瘤相關(guān)基因突變?nèi)鏿53、KRAS和APC等，往往與較高的臨床分期有關(guān)，也預(yù)示著患者較差的預(yù)后［39］。研究者根據(jù)檢測(cè)結(jié)腸癌患者經(jīng)過化療后血漿ctDNA中相關(guān)基因突變情況，篩選了一套用于預(yù)后相關(guān)的突變基因譜，認(rèn)為能近乎100％地預(yù)測(cè)患者的復(fù)發(fā)情況［36］。2014年，斯坦福大學(xué)的研究者提出了一種基于NimbleGen基因序列捕獲技術(shù)的ctDNA深度測(cè)序檢測(cè)方法，稱為癌癥個(gè)體化深度測(cè)序分析方法（cancer personalized profiling by deep sequencing，CAPP-Seq）。該項(xiàng)技術(shù)主要根據(jù)已知的腫瘤基因突變數(shù)據(jù)庫中通過生物信息學(xué)篩選得到與腫瘤復(fù)發(fā)相關(guān)的基因，將這些基因的突變區(qū)域定制了靶向序列捕獲的篩選器，并在此基礎(chǔ)上進(jìn)行深度測(cè)序［40］。研究者認(rèn)為應(yīng)用CAPP-Seq技術(shù)分析外周血中分離得到的ctDNA，能準(zhǔn)確確定患者的基因型，檢測(cè)結(jié)果與常規(guī)活檢標(biāo)本得到的結(jié)果沒有差別，該技術(shù)也有望能取代組織學(xué)活檢而成為腫瘤基因檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)。目前，ctDNA或CTCs能否作為腫瘤復(fù)發(fā)的檢測(cè)指標(biāo)而廣泛應(yīng)用于臨床還有賴于大樣本、多中心的臨床試驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。

3.3 腫瘤個(gè)體化治療靶標(biāo)

實(shí)體腫瘤具有明顯的細(xì)胞異質(zhì)性，不同的腫瘤患者之間同樣也具有明顯的異質(zhì)性，對(duì)放化療的反應(yīng)均不相同，尤其是隨著分子靶向藥物的應(yīng)用，令這種個(gè)體差異性與套餐式的治療策略之間的矛盾日益突出。根據(jù)每個(gè)腫瘤患者的“個(gè)性”制定個(gè)體化的治療方案已經(jīng)成為了腫瘤輔助治療的必然發(fā)展方

向。相對(duì)于有創(chuàng)性組織活檢，檢測(cè)腫瘤患者外周血或體液中的CTCs或ctDNA的途徑就非常簡便，可以做到隨時(shí)取樣、隨時(shí)監(jiān)測(cè)，也不會(huì)造成醫(yī)源性播散。研究者開發(fā)了基于新一代單分子測(cè)序手段的GUARDANT360技術(shù)，通過檢測(cè)惡性腫瘤患者血液里ctDNA的基因型來判斷臨床預(yù)后以及化療效果［41］。

4 小結(jié)和展望

相較于傳統(tǒng)的組織活檢或固相活檢，液態(tài)活檢的優(yōu)勢(shì)十分明顯。由于樣本來源是體液，尤其是血液，臨床獲得樣本途徑非常簡便，可以做到隨時(shí)取樣、隨時(shí)監(jiān)測(cè)，也不會(huì)造成醫(yī)源性播散。但是液態(tài)活檢有一定的局限性。其一，對(duì)于ctDNA而言，ctDNA由于存在于外周循環(huán)中，含量很低，而且容易受到循環(huán)中非腫瘤細(xì)胞來源的野生型核酸的稀釋干擾，降低了檢測(cè)手段的敏感性；對(duì)于CTCs，需要找到合理配伍的腫瘤細(xì)胞標(biāo)記物，增加CTCs的檢出效率。其二，進(jìn)行ctDNA和CTCs分析之前的樣本收集、處理等環(huán)節(jié)必須標(biāo)準(zhǔn)化，以降低各實(shí)驗(yàn)室之間的差異。其三，應(yīng)用CTCs和ctDNA用于預(yù)測(cè)臨床轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)，尤其對(duì)于M 0分期、臨床沒有明確轉(zhuǎn)移的患者，設(shè)定其外周血中CTCs和ctDNA的含量的閾值。

目前液態(tài)活檢仍處于研究的初級(jí)階段，尚需要大量大規(guī)模、多中心的研究進(jìn)一步證實(shí)其臨床應(yīng)用價(jià)值。以形態(tài)病理學(xué)為基礎(chǔ)，以分子病理學(xué)為輔助，兩者相輔相成，液態(tài)活檢將為人類更深入地了解疾病的本質(zhì)提供更豐富的、可靠的手段。

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Recent advances of liquid biopsy and its application in medical oncology

CHEN Ying,ZHU M inghua★
(Department of Pathology,Changhai Hospital,Second M ilitary Medical University,Shanghai,China,200433)

Liquid biopsy refers to the analyses of circulating tumor cells or cell-free fragments of DNA thatmainly exist in the bloodstream and other body fluid.Liquid biopsy is a novel kind of non-invasive technique and has a w ide prospect of clinical application in the molecular pathological field.The occurrence of liquid biopsy is both an opportunity and challenge towards traditional histopathology.In this paper, the advances in the emerging new techniques of liquid biopsy and its clinical application values in the field of cancer care,including prognosis assessment,early cancer screening and prediction of treatment responses w ill be reviewed.

Liquid biopsy；Non-invasive analysis；Molecular test

國家自然科學(xué)基金（81172310）

第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長海醫(yī)院病理科，上海200433

★通訊作者：朱明華，E-mail：mhzhu2000＠hotmail.com