墊料管理對毒害艾美耳球蟲疫苗蟲株免疫效果的影響

王文莉劉麗丹廖貴城吳松明唐建紅譚志堅翁亞彪

（1.佛山市正典生物技術(shù)有限公司，廣東佛山528138；2.華南農(nóng)業(yè)大學獸醫(yī)學院，廣州510642）

墊料管理對毒害艾美耳球蟲疫苗蟲株免疫效果的影響

王文莉1，劉麗丹1，廖貴城1，吳松明1，唐建紅1，譚志堅1，翁亞彪1，2?

（1.佛山市正典生物技術(shù)有限公司，廣東佛山528138；2.華南農(nóng)業(yè)大學獸醫(yī)學院，廣州510642）

為比較墊料管理對毒害艾美耳球蟲疫苗蟲株免疫效果的影響，采用谷殼和木屑為墊料，墊料厚度分別為1、2、4 cm，以及定期翻動墊料和不翻動墊料的管理方式對疫苗反應期雞腸道病變程度和相對增重的影響，以及對攻蟲后雞腸道病變程度、相對增重和免疫保護效果的影響。在疫苗反應期，各免疫組的腸道病變輕微，相對增重與空白對照組無顯著差異（P＞0.05）；免疫21 d后攻蟲，所有免疫組均能抵抗1×105個毒害艾美耳球蟲強毒孢子化卵囊的攻擊，而且腸道病變輕微，相對增重與空白對照組無顯著差異（P＞0.05）。試驗結(jié)果表明，厚墊料可提高毒害艾美耳球蟲的免疫均勻性，免疫效果稍優(yōu)于薄墊料。

墊料管理；毒害艾美耳球蟲；疫苗蟲株；免疫效果

雞球蟲病（chicken coccidiosis）是由一種或多種艾美耳球蟲（Eimeria）寄生于雞腸道黏膜上皮細胞而引起的以腸炎、腹瀉、生長遲緩、飼料轉(zhuǎn)化率下降和死亡為特征的流行性疾病。雞球蟲病每年給全球帶來的經(jīng)濟損失有30多億美元，而給我國造成的經(jīng)濟損失高達25億元人民幣［1］。在雞艾美耳球蟲7個種中，毒害艾美耳球蟲（Eimeria necatrix）具有較強的致病力，主要侵害小腸中段，引起急性的小腸球蟲病，影響營養(yǎng)物質(zhì)的吸收并易引起繼發(fā)性壞死腸炎［2］。當自然感染條件下，毒害艾美耳球蟲可造成超過25%死亡率 ，當在試驗感染時死亡率可達100%［3］。

目前，雞球蟲病以藥物防治為主，在飼料中連續(xù)添加預防性抗球蟲藥物是養(yǎng)雞業(yè)中普遍采用的方法［4］。但球蟲對幾乎所有的抗球蟲藥物都能產(chǎn)生抗藥性，且往往表現(xiàn)多重抗藥和交叉抗藥，同時藥物還能影響雞只生長、增加了飼養(yǎng)成本，也造成雞肉、蛋的藥物殘留［5－6］。因此，使用球蟲疫苗不僅可避免因使用抗球蟲藥物造成的藥物殘留，還能克服使用化學藥物成本高、用藥時間長、易產(chǎn)生抗藥性等弊端［7］。

球蟲疫苗免疫后的墊料管理是球蟲免疫成功的關(guān)鍵因素，雞群接種球蟲疫苗后，球蟲卵囊隨糞便排出到墊料上，創(chuàng)造適宜疫苗子代卵囊孢子化條件，讓雞群經(jīng)受適度的重復感染，從而順利地實現(xiàn)“二免三免”，對雞群建立堅強的免疫力極為重要。有鑒于此，使用球蟲病疫苗免疫預防球蟲病時，對墊料的種類、濕度和更換有一些特殊要求［8］。為此，本試驗根據(jù)不同的墊料管理方式，對免疫接種毒害艾美耳球蟲疫苗蟲株后的免疫效果進行了研究。

1 材料與方法

1.1 材料 毒害艾美耳球蟲早熟系蟲株（雞球蟲病活疫苗疫苗蟲株），毒害艾美耳球蟲強毒株，均由佛山市正典生物技術(shù)有限公司提供。

1.2 試驗動物 1日齡嶺南黃雞600羽：購自廣東省農(nóng)業(yè)科學院畜牧研究所種雞場。

1.3 分組與處理 將600羽無球蟲感染嶺南黃雞隨機分成6組，每組100羽，第一組為空白對照組，置于以2 cm谷殼為墊料地上平養(yǎng)；第二組為免疫組1，置于以1 cm木屑為墊料地上平養(yǎng)；第三組為免疫組2，置于以2 cm谷殼為墊料地上平養(yǎng)；第四組為免疫組3，置于以4 cm谷殼為墊料地上平養(yǎng)；第五組為免疫組4，置于以2 cm谷殼為墊料地上平養(yǎng)；第六組為免疫組5，置于以4 cm谷殼為墊料地上平養(yǎng)；第五、六組于免疫后7、8、9 d每天翻動墊料。將各試驗組隔離飼養(yǎng)于檢驗動物舍，飼喂無添加抗球蟲藥物和抗生素的全價飼料，飲水為潔凈飲用水。各試驗組無球蟲感染嶺南黃雞于3日齡經(jīng)口接種300個／羽毒害艾美耳球蟲早熟蟲株。試驗分組及處理見表1。在開放條件下的雞舍中（模擬國內(nèi)養(yǎng)雞大生產(chǎn)環(huán)境），免疫后21 d，各試驗組分別取10羽雞口服攻擊1×105個毒害艾美耳球蟲強毒孢子化卵囊，攻蟲后觀察5～7 d，記錄各組雞的糞便、精神狀況和飲食欲，第7天各試驗組全部稱重，但未對每只雞進行稱重；攻蟲后剖檢每只雞的腸道，記錄病變記分。

在免疫后13 d（疫苗反應期），將免疫組和所有空白雞進行稱重，但未對每只雞進行稱重；并在免疫后的13 d～16 d（疫苗反應期），每天隨機抽取4只雞剖檢腸道，觀察小腸中段病變情況。

表1 試驗分組及處理表

1.4 評價指標 對試驗組免疫的臨床狀況，腸道病變記分和內(nèi)容物，雞群增重情況，免疫保護效果等各項指標進行觀察和評價［9］。利用SPSS 18.0數(shù)理統(tǒng)計軟件對兩個試驗之間相對增重和腸道病變記分的差異性進行比較。

2 結(jié)果

2.1 臨床狀況觀察 在免疫后第13～16天，免疫組出現(xiàn)少量飼料樣糞便，雞群精神狀態(tài)良好，飲食正常，剖檢腸道病變輕微，均無出現(xiàn)因雞球蟲病臨床癥狀而引起的死亡。攻蟲后6 d，陽性組雞只飲食欲明顯下降，乃至廢絕，精神極度沉郁，縮頸閉目，呆立一隅，羽毛逆立；糞便不成形，呈醬油色粘稠狀。免疫組雞只精神良好，有正常飲食，無明顯臨床發(fā)病癥狀，其中免疫組1、免疫組4雞糞便出現(xiàn)2～8堆番茄糞，免疫組2、免疫組3、免疫組4雞糞便正常，糞便。

2.2 疫苗反應期增重情況 在免疫后第13～16天，不同墊料、不同厚度谷殼作為墊料以及翻動墊料與不翻動墊料方法對試驗雞增重的影響結(jié)果見表2。增重結(jié)果可見，各試驗組免疫接種前的平均增重相近，免疫后3 d，以木屑、谷殼作為兩種不同墊料的免疫組1、免疫組2與空白對照組相對增重率分別為98.4%、96.7%；分別以2、4 cm不同厚度谷殼作為墊料的免疫組2、免疫組3雞相對增重分別為96.7%、97.5%；翻動墊料、不翻動墊料的免疫組4、免疫組5雞相對增重分別為97.2%、96.4%。

表2 免疫后第13天試驗雞增重情況表

2.3 疫苗反應期間腸道病變記分 不同墊料、不同厚度谷殼作為墊料以及翻動墊料與不翻動墊料方法疫苗反應期間腸道病變記分結(jié)果見表3。從表3疫苗反應期間腸道病變記分可見：免疫后第13～16天，免疫組1的小腸中段病變記分分別為0.63、0.83、0.50、0.28；免疫組2的小腸中段病變記分分別為0.43、0.50、0.50、0.00；免疫組3的小腸中段病變記分分別為0.43、0.50、0.50、0.00；免疫組4的小腸中段病變記分分別為0.50、0.50、0.30、0.00；免疫組5的小腸中段病變記分分別為0.30、0.28、0.50、0.00；所有免疫組雞小腸中段平均病變記分均小于1.0分。

江西省對一些地方官員“新官不理舊事”現(xiàn)象也敲響了警鐘。記者在江西采訪時也對當?shù)氐呐e措進行了初步了解。時任江西省鷹潭市委書記陳興超（現(xiàn)任江西省委常委、統(tǒng)戰(zhàn)部部長）曾在該市市委七屆九次全會上如是說：“如果我們的政策朝令夕改，甚至是說一套做一套，就不可能招得到商、引得到資。為此，要在積極構(gòu)建社會誠信體系的同時，更要建設誠信政府，堅決杜絕政府出現(xiàn)不兌現(xiàn)承諾、‘新官不理舊事’等行為，始終做到‘言必信、行必果’?！?/p>

表3 疫苗反應期間小腸中段平均病變記分表 （n＝4）

2.4 攻蟲免疫保護效果 免疫后第21天，使用毒害艾美耳球蟲強毒株攻蟲。攻蟲后6 d，發(fā)現(xiàn)所有免疫組均能耐受強毒株的攻擊，詳細增重情況、病變記分和死亡率如表4所示。陽性組平均增重為106.8g，相對增重率為47.9%，糞便記分3.5分，小腸中段平均病變記分3.2分，死亡率為10%。所有免疫組的相對增重范圍93.7%～95.5%，糞便記分除免疫組1為0.5，其他均為0分；小腸中段病變記分范圍為0～2分，平均病變記分范圍為0～ 1.2分，免疫組無雞只死亡。免疫組雞攻蟲后小腸中段病變記分明顯低于陽性對照組，陽性對照組雞剖檢可見小腸漿膜面布滿紅色出血點和白色斑點，腸腔中含有多量的血凝塊和壞死脫落的黏膜組織，腸黏膜面粗糙，腸壁增厚；免疫組攻蟲后的增重、糞便記分及病變記分等指標均優(yōu)于陽性對照組。因此，本試驗結(jié)果表明免疫21 d后，免疫組均能抵抗1×105個毒害艾美耳球蟲強毒孢子化卵囊。

表4 免疫后21 d攻蟲后增重，糞便記分，小腸中段變記分，以及雞死亡率

3 討論與分析

3.1 墊料管理對雞增重的影響 從實驗結(jié)果可知：通過以木屑與谷殼作為墊料，2、4 cm不同厚度谷殼為墊料以及翻動墊料與不翻動墊料的方法，對雞的平均增重和相對增重率均無影響；這與黎觀紅［10］報道結(jié)果一致。有研究表明：不同厚度的墊料2.0、3.0、4.0、5.0 cm對肉雞的生產(chǎn)性能影響不顯著［11－12］。

3.2 疫苗反應期間腸道病變情況 于免疫后足13～16 d疫苗反應期，各免疫組雞群精神狀態(tài)良好，飲食正常，均無出現(xiàn)因雞球蟲病臨床癥狀而引起的死亡，剖檢腸道病變輕微，免疫組雞盲腸、小腸中段、十二指腸的平均病變記分均小于1.0分。由數(shù)據(jù)可說明：不同墊料、不同厚度谷殼作為墊料以及翻動墊料與不翻動墊料方法對免疫接種雞群疫苗反應期間腸道損傷均無顯著差異，不會加重疫苗反應，具有良好的安全性。

3.3 免疫保護效果 使用球蟲病疫苗免疫預防球蟲病，需要通過創(chuàng)造適宜疫苗子代卵囊孢子化的條件，對墊料的種類、濕度和更換作特殊要求，讓雞群經(jīng)受適度的重復感染，對雞群建立堅強的免疫力極為重要，孔慶飛等［8］對這方面曾作過報道。從試驗結(jié)果可以看出，不同種類的墊料、不同厚度的墊料以及翻動與不翻動墊料方法均能使雞群產(chǎn)生抗球蟲免疫保護力，而且厚墊料更有助于提高毒害艾美耳球蟲的免疫保護效果。

從球蟲免疫力形成的過程分析，雞群接種球蟲疫苗后，球蟲通過雞體內(nèi)發(fā)育繁殖排泄出子代卵囊累積于墊料中，免疫力建立關(guān)鍵在于墊料中累積的卵囊，在適宜的溫、濕度條件下發(fā)育為具有感染力的孢子化卵囊，雞群通過自然感染這些孢子化卵囊，使球蟲免疫力得以強化，經(jīng)過2～3次循環(huán)感染，逐漸形成比較堅強的免疫力［13］。當卵囊循環(huán)量不足，免疫雞群沒有獲得更均勻地重復循環(huán)感染，導致免疫保護均勻性不一致。厚墊料對球蟲免疫力建立和均勻性優(yōu)于薄墊料，主要由于厚墊料不易潮濕、板結(jié)，有利于卵囊均勻分布；由于毒害艾美耳球蟲在盲腸內(nèi)形成卵囊，且卵囊主要分布于盲腸糞中，而雞每天盲腸糞排泄數(shù)量較少。因此，厚墊料有利于盲腸糞中的卵囊充分混合稀釋和翻動，從而均勻分布各個角落，為雞群獲得均勻的重復感染創(chuàng)造條件。

4 結(jié)論

由毒害艾美耳球蟲引起的雞球蟲病，是目前禽養(yǎng)殖場中發(fā)病高，危害嚴重的疾病之一，而且該蟲種生活史和卵囊排泄規(guī)律較其他幾個蟲株均特殊。從免疫效果來看，厚墊料可提高毒害艾美耳球蟲的免疫均勻性，綜合效果也稍優(yōu)于薄墊料。因此，養(yǎng)殖場在使用含有毒害艾美耳球蟲蟲種的疫苗時，盡量鋪上厚墊料（4 cm厚度或以上較合適），同時還要保持墊料干爽，防止墊料過于潮濕或板結(jié)。

［1］翁亞彪.雞球蟲病疫苗應用前景［J］.養(yǎng)禽與禽病防治，2009（01）：2－3.

［3］張龍現(xiàn)，蔣金書，劉 群，等.毒害艾美耳球蟲純種卵囊收集鑒定及致病性測定［J］.中國獸醫(yī)雜志，2001，09：12－13.

［4］王學紅，梁劍平，劉 宇，等.雞抗球蟲藥物的種類及應用［J］.中國家禽，2011，32（15）：48－51.

［5］楊 娜，曾明華，吳麗君，等.三種抗球蟲藥對雞球蟲病的對比療效［J］.中國獸藥雜志，2012，02：16－18.

［6］Chapman H D.The Use of Enzyme Electrophoresis for the Identi?fication of the Species ofEimeriaPresent in Field Isolates of Coc?cidia［J］.Parasitology，1982，85（Pt 3）：437－442.

［7］趙立香，李榮權(quán).雞球蟲疫苗研究進展［J］.養(yǎng)禽與禽病防治，2009（12）：2－3.

［8］孔慶飛，翁亞彪，林綺萍，等.雞球蟲病疫苗研究簡況及其在肉雞生產(chǎn)上的應用前景［J］.養(yǎng)禽與禽病防治，2005（11）：7－9.

［9］閆鴻斌，賈萬忠，田廣孚，等.四價雞球蟲苗的免疫效果研究［J］.中國預防獸醫(yī)學報，2009，3（31）：236－240.

［10］黎觀紅.不同墊料對肉雞生產(chǎn)性能的影響及墊料肥值的評價［J］.江西畜牧獸醫(yī)雜志，2004（01）：40－41.

［11］Haque M I，Chowdhury S D.Use of rice husk litter at different depths for broiler chicks during summer［J］.Br Poult Sci，1994，35（5）：809－812.

［12］Anisuzzaman M，Chowdhury S D.Use of four types of litter for rearing broilers［J］.Br Poult Sci，1996，37（3）：541－545.

［13］段嘉樹.雞球蟲病免疫：Ⅰ.球蟲病特點和免疫原理［J］.中國動物保健，2004，4：7－12.

（編 輯：陳 希）

Vaccines Strains ofEimeria necatrixImmunization Effects Affected by Padding Management

WANG Wen－li1，LIU Li－dan1，LIAO Gui－cheng1，WU Song－ming1，TANG Jian－h(huán)ong1，TAN Zhi－jian1，WENG Ya－biao1，2?
（1.Foshan Standard Biotech Co.，Ltd，F(xiàn)oshan，Guangdong528138，China；2.College of Veterinary Medicine，South China Agricultural University，Guangzhou510624，China）

In the present study，different kinds of padding，different depth of padding and different padding management may affectE.necatriximmunization effects.During vaccine reaction period，intestinal lesions of immunization groups were slight，and there was no significant difference of weight gain between immunization groups and negative control group（P＞0.05）.On 6thday after 21 d immunization，all chickens in immunization group could produce good protection against the challenge of 1.0×105high virulenceE.necatrixoocysts.Besides，intestinal lesions of immunization groups were slight，and there was no significant difference of weight gain between immunization groups and negative control group（P＞0.05）.Results showed that thickness padding could improve the uniformities of immunity ofE.necatrix，and immunization effects in thickness padding group were better than that of thin padding group.

padding management；Eimeria necatrix；vaccine strain；immunization effects

2014－10－16

A

1002－1280（2015）01－0024－05

S855.9

雞球蟲病藥敏蟲株七價活疫苗的研制及其應用研究（2011C01）

王文莉，碩士研究生，從事獸醫(yī)寄生蟲研究。

翁亞彪。E－mail：ybweng＠qq.com