張金霞，郭強(qiáng)功，包潔華，張 萍，馬小莉

（寧夏泰瑞制藥股份有限公司，銀川750101）

氣相色譜法測定2－二乙氨基乙硫醇的含量

張金霞，郭強(qiáng)功，包潔華?，張 萍，馬小莉

（寧夏泰瑞制藥股份有限公司，銀川750101）

為建立2－二乙氨基乙硫醇含量檢測的氣相色譜法，采用氫火焰離子檢測器，分流進(jìn)樣，分流比25∶1，設(shè)定程序升溫，用面積歸一化法進(jìn)行計(jì)算。2－二乙氨基乙硫醇在濃度0.1～0.6 g／mL范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系，線性方程為Y＝2.0×107X－3.1×105，相關(guān)系數(shù)R2為0.9981，精密度測試中重復(fù)性的RSD為0.03%，中間精密度的RSD為0.30%。本方法簡便、準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，可用于2－二乙氨基乙硫醇的含量測定。

2－二乙氨基乙硫醇；毛細(xì)管柱；氣相色譜法；程序升溫

延胡索酸泰妙菌素是一種動(dòng)物專用的新型半合成抗生素，是由傘菌科北鳳菌（Pleurotus mutilis）的培養(yǎng)液中提取的伯魯羅母林（pleuromuLin）的氫化延胡索酸鹽。臨床主要用于防治雞的慢性呼吸道病，用于豬的支原體肺炎（氣喘?。?、支原體關(guān)節(jié)炎、放線菌性胸膜肺炎、密螺旋體性痢疾、回腸炎、結(jié)腸炎、水腫病等。延胡索酸泰妙菌素是一種安全有效的新型獸藥，具有廣闊的應(yīng)用前景。2－二乙氨基乙硫醇作為延胡索酸泰妙菌素生產(chǎn)的關(guān)鍵中間體在生產(chǎn)中有很大的需求量，但其含量的檢測方法在國家標(biāo)準(zhǔn)中利用2－二乙氨基乙硫醇在鹽酸溶液中被碘氧化成相應(yīng)的二硫化物［1］，進(jìn)行滴定分析，該方法檢測受操作、試劑等因素影響，重現(xiàn)性較差。其它檢測方法未見報(bào)道，本文旨在建立氣相色譜測定2－二乙氨基乙硫醇含量的方法。

1 儀器與試劑

島津GC－2014氣相色譜儀，日本島津；2－二乙氨基乙硫醇（保定加合精細(xì)化工有限公司）；微量進(jìn)樣器、濾紙、燒杯等。

2 方法

2.1 色譜條件 毛細(xì)管色譜柱（型號：DB－624，規(guī)格：30 m×0.53 mm×30 μm）；氫火焰離子檢測器；載氣高純氮?dú)?；分流進(jìn)樣，分流比25∶1；進(jìn)樣口溫度260℃；檢測器溫度：260℃；設(shè)置柱溫箱溫度為80℃保留4.00 min，以8.00℃／min的速度將溫度升高至160℃保留2.00 min，再以30.00℃／min的速度將溫度升高至250℃保留12.00 min。柱流量：20.00 mL／min；吹掃流量：3.0 mL／min；附加流量控制：30.00 mL／min。進(jìn)樣量0.2 μL，按面積歸一化法進(jìn)行計(jì)算。

2.2 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 取供試品2－二乙氨基乙硫醇0.2 μL注入氣相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖。控制標(biāo)準(zhǔn)：連讀6次進(jìn)樣所得圖譜中2－二乙氨基乙硫醇含量RSD≤10.0%，理論塔板數(shù)（N）≥2000，與相鄰的峰分離度（R）≥2.0，拖尾因子（T）≤2.0。

2.3 線性關(guān)系考察 參考文獻(xiàn)方法［3］，分別精密稱取2－二乙氨基乙硫醇10、20、30、40、50、60 g置于100 mL容量瓶中，加純化水稀釋至刻度，制成濃度分別為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 g／mL的溶液，分別吸取上述溶液0.2 μL注入氣相色譜儀，記錄峰面積，以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。相關(guān)系數(shù)R2應(yīng)大于0.99。

2.4 精密度

2.4.1 重復(fù)性 參考文獻(xiàn)方法［4］，取供試品2－二乙氨基乙硫醇0.2 μL注入氣相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，然后計(jì)算6次測試的2－二乙氨基乙硫醇含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。

2.4.2 中間精密度 取供試品2－二乙氨基乙硫醇0.2 μL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。由不同分析人員不同測定日期依法測定。不同人員不同分析日期2－二乙氨基乙硫醇含量結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。

2.5 檢測限與定量限

2.5.1 空白 不進(jìn)樣品，僅記錄圖譜。

2.5.2 對照品溶液的制備 取2－二乙氨基乙硫醇和純化水按照1∶1比例混勻，作為對照品溶液。

2.5.3 供試品溶液的制備 將上述對照品溶液依次吸取2.0 mL、0.4 mL、80 μL、20 μL、10 μL、5 μL至10 mL容量瓶中，用純化水定容，分別標(biāo)記為Y1、Y2、Y3、Y4、Y5、Y6。

2.5.4 檢測限與定量限測定 取供試品溶液0.2 μL注入氣相色譜儀，記錄空白、供試品溶液色譜圖。計(jì)算供試品溶液中2－二乙氨基乙硫醇信號響應(yīng)值與空白溶液信號響應(yīng)值的比值。以信噪比為10∶1時(shí)的供試品溶液濃度即為定量限；以信噪比為3∶1時(shí)的供試品溶液濃度即為檢測限［2］。

2.6 耐用性 調(diào)整檢測器、進(jìn)樣口、色譜柱的溫度分別上下浮動(dòng)5℃，穩(wěn)定后取供試品2－二乙氨基乙硫醇注入氣相色譜儀，記錄色譜圖，計(jì)算2－二乙氨基乙硫醇含量。相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。

3 結(jié)果與分析

3.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 按2.2項(xiàng)下測定的理論塔板、分離度、拖尾因子均在控制范圍內(nèi)，供試品連續(xù)6次測定含量的RSD值為0.26%（表1）。

表1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

3.2 線性關(guān)系考察 按照2.3繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1），線性回歸方程為Y＝2.0×107X－3.1×105，相關(guān)系數(shù)R2＝0.9981，即在0.1～0.6 g／mL范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好。

圖1 線性曲線

3.3 精密度

3.3.1 重復(fù)性 連續(xù)6次測試的2－二乙氨基乙硫醇含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.30%，不大于2.0%。結(jié)果如表2，方法精密度良好。

3.3.2 中間精密度 由不同分析人員不同分析時(shí)間測定的2－二乙氨基乙硫醇含量的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.29%，結(jié)果如表3。

表2 重復(fù)性測試結(jié)果

表3 中間精密度測試結(jié)果

3.4 檢測限與定量限 依據(jù)2.5.1～2.5.4測定結(jié)果信噪比為3∶1時(shí)2－二乙氨基乙硫醇供試品溶液的濃度為0.05%，即為檢測限；信噪比為10∶1時(shí)2－二乙氨基乙硫醇供試品溶液的濃度為0.1%，即為定量限（圖2）。

圖2 氣相色譜圖

3.5 耐用性考察 調(diào)整色譜條件中的柱溫，分別設(shè)置為75、80、85℃；調(diào)整檢測器的溫度分別設(shè)置為255、260、265℃；進(jìn)樣口溫度分別設(shè)置為255、260、265℃。計(jì)算不同溫度條件下的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均不大于2.0%，結(jié)果見表4。

表4 耐用性考察結(jié)果

調(diào)整條件 溫度設(shè)置／℃ 1 2 3 平均值／% RSD／%檢測器溫度255 97.24 97.39 97.13 97.3 260 97.73 97.70 97.76 97.7 265 97.41 98.00 97.01 97.5 0.21

4 討論與小結(jié)

硫醇因具有極不愉快的惡臭而著稱，空氣中含有極微量的乙硫醇就可以嗅出其氣味［5］。本文用氣相色譜法測定2－二乙氨基乙硫醇含量，能有效避免供試品對檢測環(huán)境的影響。試驗(yàn)中采用程序升溫［6］有效的減少了供試品的拖尾和擴(kuò)展，起始溫度80℃保留4.00 min，以8.00℃／min的速度將溫度升高至160℃保留2.00 min，再以30.00℃／min的速度將溫度升高至250℃保留12.00 min，這種多階線性升溫，同時(shí)分流進(jìn)樣減少各雜質(zhì)峰和主峰的拖尾及其相互間的重疊。采用分流進(jìn)樣，當(dāng)樣品注入分流進(jìn)樣口以后，僅有極少部分樣品進(jìn)入毛細(xì)管柱，其余絕大部分樣品隨載氣由分流氣體出口逸出放空。分析時(shí)分流比為25∶1（參照文獻(xiàn)［7］分流比范圍為10∶1～100∶1），可避免毛細(xì)管柱的超載，保持高柱效。

目前為止，采用氣相法測定2－二乙氨基乙硫醇含量未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。本文采用毛細(xì)管程序升溫氣相色譜法測定2－二乙氨基乙硫醇含量分離效果良好；定量準(zhǔn)確，檢測限為0.05%；線性考察回歸方程為為Y＝2.0×107X－3.1×105，相關(guān)系數(shù)R2＝0.9981，即在0.1～0.6 g／mL范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好；重復(fù)性和中間精密度均不大于2.0%；耐用性考察結(jié)果均符合要求。得到了滿意的分析結(jié)果，可用于2－二乙氨基乙硫醇的含量測定。

［1］GJB 1747－93.2－二乙氨基乙硫醇規(guī)范［S］.

［2］中國獸藥典委員會.中華人民共和國獸藥典二○一○年版（一部）［S］.

［3］藥品GMP指南／國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品認(rèn)證管理中心.質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室與物料系統(tǒng)［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2011，8.

［4］韓 立，班付國，周紅霞，等.高效液相色譜法測定穿心蓮注射液的含量［J］.中國獸藥雜志，2014，48（5）：43－46.

［5］王春玉，段新峰，陳 娜.二乙氨基乙硫醇的合成［J］.河北化工，2009，32（9）：48－49，67.

［6］劉 珍.化驗(yàn)員讀本：下冊［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

［7］夏玉宇.化驗(yàn)員實(shí)用手冊：第二版［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010.

（編 輯：陳 希）

Gas Chromatography for Determining the Content of 2－diethylaminoethanethiol

ZHANG Jin－xia，GUO Qiang－gong，BAO Jie－h(huán)ua?，ZHANG ping，MA Xiao－li
（WuHan Chopper Biological Co.，Ltd.，Wuhan430070，China）

Establish a method for determining the content of 2－diethylaminoethanethiol by gas chromatography.Hydrogen flame ion detector，shunt sample，diversion ratio was 25∶1，set temperature programmed，calculated by area normalization method.The Linesr range of 2－diethylaminoethanethiol was 0.1～0.6 g／mL，the concentration has a good linear relationship within the scope，the equation wasY＝2.0×107X－3.1×105，the correlation coefficientR2＝0.9981，precision test repeatabilityRSDwas 0.03%，intermediate precisionRSDwas 0.30%.This method is simple，accurate，with good reproducibility，it can be used for 2－diethylaminoethanethiol content determination.

2－diethylaminoethanethiol；capillary column；gas chromatography；temperature programmed

2014－10－24

A

1002－1280（2015）01－0037－04

S859.796

張金霞，從事抗生素生產(chǎn)原料檢驗(yàn)工作。

包潔華。E－mail：qcbjh＠tairuiworld.com