劉洪超，胡 澍△，涂心明

(河南科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院：1.生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心/神經(jīng)遺傳實(shí)驗(yàn)室；2.人體解剖與組織胚胎學(xué)教研室，河南洛陽(yáng) 471003)

果蠅Tap蛋白結(jié)構(gòu)與功能的生物信息學(xué)分析*

劉洪超1，胡 澍1△，涂心明2

(河南科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院：1.生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心/神經(jīng)遺傳實(shí)驗(yàn)室；2.人體解剖與組織胚胎學(xué)教研室，河南洛陽(yáng) 471003)

目的 利用生物信息學(xué)方法分析果蠅Tap蛋白的結(jié)構(gòu)和功能。方法 基于NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中果蠅Tap蛋白的氨基酸序列，從蛋白質(zhì)理化性質(zhì)、跨膜區(qū)、信號(hào)肽、亞細(xì)胞定位、結(jié)構(gòu)域、三維結(jié)構(gòu)及物種間同源蛋白進(jìn)化關(guān)系等方面進(jìn)行分析。結(jié)果Tap蛋白為不穩(wěn)定親水性蛋白，無(wú)跨膜區(qū)和信號(hào)肽，在細(xì)胞核中發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，具有堿性螺旋-環(huán)-螺旋(bHLH)結(jié)構(gòu)域。Tap蛋白與來(lái)源于NeuroD1的模板2ql2.1.B有61.02%的氨基酸序列一致，Tap蛋白與人類和嚙齒動(dòng)物的編碼產(chǎn)物高度同源，在系統(tǒng)發(fā)生樹中距離最近。結(jié)論 果蠅Tap蛋白具有bHLH蛋白家族的典型結(jié)構(gòu)，可能在果蠅胚胎發(fā)育早期的神經(jīng)發(fā)生、分化等過程中發(fā)揮作用。

Tap蛋白；螺旋-環(huán)-螺旋構(gòu)型；分子結(jié)構(gòu)；計(jì)算生物學(xué)；果蠅，黑腹

堿性螺旋-環(huán)-螺旋(basic helix-loop-helix，bHLH)蛋白家族廣泛分布于生物界，存在較高的保守性。大部分bHLH蛋白以同源二聚體或異源二聚體發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子作用，主要調(diào)節(jié)各種干細(xì)胞向終末細(xì)胞的分化，在骨骼肌、胰腺發(fā)育、血液發(fā)生、果蠅神經(jīng)干細(xì)胞分化以及脊椎動(dòng)物脊髓、端腦皮層的發(fā)育過程中發(fā)揮著重要作用[1-4]。果蠅Tap基因，也稱為biparous，分別由兩個(gè)研究小組針對(duì)mec-3和delilah的bHLH結(jié)構(gòu)域通過低保真度雜交篩選和PCR篩選而鑒定出來(lái)，并被定位于3號(hào)染色體左臂(17359682-17361811)[5-6]。其序列全長(zhǎng)約2.13 kb，細(xì)胞遺傳學(xué)定位于74A5。基因序列比對(duì)結(jié)果表明果蠅Tap基因與脊椎動(dòng)物的neurogenin(ngn)和neuroD基因關(guān)系最為密切，是ngn基因的直系同源基因，然而Tap在果蠅發(fā)育過程中的功能至今未知[6-7]。對(duì)其進(jìn)行功能與調(diào)控研究既具有原創(chuàng)性，又對(duì)哺乳動(dòng)物ngn基因的相關(guān)研究具有重要的參考和借鑒意義。

基因及其表達(dá)物的結(jié)構(gòu)與功能的解析和預(yù)測(cè)對(duì)生物科學(xué)、醫(yī)藥科學(xué)等領(lǐng)域的研究與開發(fā)有著極為重要的指導(dǎo)作用。生物信息學(xué)運(yùn)用信息科學(xué)的原理和技術(shù)處理大量分散和復(fù)雜的生物學(xué)和醫(yī)學(xué)科學(xué)數(shù)據(jù)，使其更易解讀，更富有具體指向，由此成為生命科學(xué)領(lǐng)域研究所必需的工具。本研究基于NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中果蠅Tap蛋白的氨基酸序列，應(yīng)用生物信息學(xué)方法對(duì)Tap進(jìn)行理化性質(zhì)、跨膜區(qū)、信號(hào)肽、亞細(xì)胞定位、結(jié)構(gòu)域、三維結(jié)構(gòu)等方面的預(yù)測(cè)，分析其可能的生物學(xué)功能，并通過與其他物種同源蛋白氨基酸序列的比對(duì)和分析，為系統(tǒng)研究果蠅Tap基因的功能與調(diào)控提供參考。

1 材料與方法

1.1 研究基因及蛋白 果蠅Tap基因mRNA序列：NM_079400.3；果蠅Tap蛋白氨基酸序列：NP_524124.1。

1.2 方法

1.2.1Tap基因開放閱讀框(ORF)分析 含有開放閱讀框是一個(gè)DNA序列編碼特定蛋白質(zhì)的部分或全部的先決條件。本研究采用ORF Finder在線工具分析和界定果蠅Tap基因的開放閱讀框。

1.2.2 Tap蛋白理化性質(zhì)分析 蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)是蛋白質(zhì)研究的基礎(chǔ)，本研究采用ProtParam工具預(yù)測(cè)Tap蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量、氨基酸組成、理論等電點(diǎn)PI、半衰期、不穩(wěn)定系數(shù)、總平均親水性等。

1.2.3 Tap蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)和疏水性分析 蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)主要指多肽鏈中主鏈原子在各局部空間的排列分布情況，基本的二級(jí)結(jié)構(gòu)包括α-螺旋，β-折疊，β-轉(zhuǎn)角，無(wú)規(guī)卷曲等結(jié)構(gòu)組件，對(duì)其預(yù)測(cè)和分析有助于認(rèn)識(shí)蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)。PredictProtein工具可以對(duì)蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu)、模體、二硫鍵結(jié)構(gòu)、跨膜區(qū)等許多結(jié)構(gòu)信息進(jìn)行預(yù)測(cè)分析，平均準(zhǔn)確率超過72%，最佳殘基預(yù)測(cè)準(zhǔn)確率達(dá)90%以上，被視為蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)。本研究采用該工具中的PROFSec和PROFAcc分別對(duì)Tap蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)和疏水性進(jìn)行預(yù)測(cè)。

1.2.4 Tap蛋白跨膜區(qū)預(yù)測(cè) 目前常用的蛋白質(zhì)跨膜區(qū)分析工具是依靠跨膜蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)來(lái)預(yù)測(cè)跨膜區(qū)位置和跨膜方向。本研究中，TMHMM軟件包和TMpred程序被用來(lái)對(duì)Tap蛋白的跨膜區(qū)進(jìn)行預(yù)測(cè)。

1.2.5 Tap蛋白信號(hào)肽預(yù)測(cè) 信號(hào)肽是決定新生肽在細(xì)胞中定位或決定某些氨基酸殘基修飾的肽段，通常由15～30個(gè)氨基酸殘基組成，位于新生肽的N端。本研究中SignalP 4.1 Server自動(dòng)利用神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型對(duì)Tap進(jìn)行信號(hào)肽預(yù)測(cè)，得到3種C、Y、S-score計(jì)算結(jié)果[8]，同時(shí)，NLStradamus在線工具被用來(lái)預(yù)測(cè)Tap可能的核定位信號(hào)(nuclear localization signal,NLS)。

1.2.6 Tap蛋白亞細(xì)胞定位預(yù)測(cè) 蛋白質(zhì)的亞細(xì)胞定位是指某種蛋白在細(xì)胞內(nèi)的具體存在部位，Tap蛋白的亞細(xì)胞定位采用PSORT和LOCtree來(lái)進(jìn)行分析[9]。

1.2.7 Tap蛋白結(jié)構(gòu)域和功能預(yù)測(cè) 結(jié)構(gòu)域是蛋白質(zhì)序列的結(jié)構(gòu)、功能和進(jìn)化單元，對(duì)于蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)和功能的研究具有重要意義。Tap蛋白的結(jié)構(gòu)域和功能分類采用InterPro預(yù)測(cè)。該工具整合了UniProt、CATH-Gene3D、PROSITE等16個(gè)成員數(shù)據(jù)庫(kù)，充分利用各成員庫(kù)的優(yōu)勢(shì)，整合蛋白質(zhì)家族、結(jié)構(gòu)域和功能位點(diǎn)等資源于一體，通過蛋白質(zhì)家族分類、結(jié)構(gòu)域和重要功能位點(diǎn)預(yù)測(cè)等途徑對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行功能注釋[10]。

1.2.8 Tap蛋白三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè) 蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)的預(yù)測(cè)方法通常包括同源建模法、串線法/折疊識(shí)別法和從頭預(yù)測(cè)法，而同源建模法是基于序列同源比對(duì)，對(duì)于序列相似度大于30%的序列模擬比較有效，是目前最常用的方法。本研究運(yùn)用SWISS-MODEL蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)服務(wù)器對(duì)Tap蛋白進(jìn)行同源性建模以分析其三維結(jié)構(gòu)。

1.2.9 Tap蛋白氨基酸序列同源性分析 將果蠅Tap蛋白的氨基酸序列輸入BLASTP，采用BLASTp程序檢索Swiss-Prot數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行同源蛋白的搜索與比較。

2 結(jié) 果

2.1 果蠅Tap基因ORF分析 ORF Finder工具在Tap基因mRNA序列中尋找出一個(gè)長(zhǎng)1 197 bp的ORF，起始密碼子位于432 bp，終止密碼子位于1 628 bp，推測(cè)編碼398個(gè)氨基酸殘基，見圖1。

2.2 果蠅Tap蛋白基本理化性質(zhì)分析 ProtParam分析工具對(duì)Tap蛋白的理化性質(zhì)進(jìn)行了預(yù)測(cè)，其氨基酸組成見表1。果蠅Tap基因編碼398個(gè)氨基酸，含量最多的兩種氨基酸是脯氨酸(Pro)和絲氨酸(Ser)，所占比例分別為10.1%和9.0%。負(fù)電荷殘基總數(shù)[天冬氨酸(Asp)+谷氨酸(Glu)]為43，正電荷殘基總數(shù)[精氨酸(Arg)+賴氨酸(Lys)]為39。其分子式為C1987H3007N569O606S9，理論分子量約44.85×103，理論等電點(diǎn)為6.49。不穩(wěn)定系數(shù)為66.79，屬于不穩(wěn)定蛋白；脂肪系數(shù)為54.22，總平均親水指數(shù)為-0.849，預(yù)測(cè)Tap蛋白為水溶性蛋白。

圖1 果蠅Tap基因序列的開放閱讀框分析

表1 果蠅Tap蛋白的氨基酸組成

2.3 Tap蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)和疏水性分析 PROFSec預(yù)測(cè)Tap蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)主要為環(huán)(Loop)，占87.19%，α-螺旋為12.81%，無(wú)β-折疊結(jié)構(gòu)。PROFAcc預(yù)測(cè)Tap蛋白的親水性高，表面暴露超過16%的氨基酸殘基占54.02%，與ProtParam預(yù)測(cè)結(jié)果一致，Tap蛋白可能為水溶性蛋白。

圖2 TMHMM 2.0對(duì)Tap蛋白跨膜區(qū)的預(yù)測(cè)

圖3 TMpred對(duì)Tap蛋白跨膜區(qū)的預(yù)測(cè)

2.4 Tap蛋白跨膜區(qū)預(yù)測(cè) TMHMM Server和TMpred對(duì)Tap跨膜區(qū)預(yù)測(cè)的結(jié)果為：跨膜區(qū)中的氨基酸期望值為0.001 45，該值大于18時(shí)才有跨膜區(qū)，故該結(jié)果表明Tap蛋白無(wú)跨膜區(qū)，見圖2～3。

2.5 Tap蛋白信號(hào)肽預(yù)測(cè) 對(duì)于一個(gè)典型的信號(hào)肽，C-score和Y-score趨向于+1，S-score在剪切位點(diǎn)之前高，而在剪切位點(diǎn)之后變低。采用神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)模型預(yù)測(cè)的信號(hào)肽結(jié)果如圖4所示，表明Tap蛋白不存在信號(hào)肽。NLS是另一種形式的信號(hào)肽，一般含4～8個(gè)氨基酸殘基，富含精氨酸、賴氨酸等堿性氨基酸，可位于多肽序列的任何部分，其介導(dǎo)蛋白質(zhì)通過核孔復(fù)合體入核。NLStradamus工具分析結(jié)果表明Tap蛋白氨基酸序列126～160位間存在NLS，Tap蛋白可能依此定位于細(xì)胞核，見圖5。

圖4 Tap蛋白信號(hào)肽預(yù)測(cè)

圖5 Tap蛋白NLS預(yù)測(cè)

2.6 Tap蛋白亞細(xì)胞定位分析 PSORT Ⅱ工具預(yù)測(cè)結(jié)果表明Tap蛋白分布于細(xì)胞核、細(xì)胞骨架、細(xì)胞質(zhì)、分泌系統(tǒng)囊泡的可能性分別為69.6%、17.4%、8.7%和4.3%。LOCtree分析結(jié)果表明Tap蛋白定位于細(xì)胞核，屬于DNA結(jié)合蛋白，與NLStradamus預(yù)測(cè)結(jié)果一致。因此Tap蛋白可能位于細(xì)胞核發(fā)揮其生物學(xué)功能。

2.7 Tap蛋白結(jié)構(gòu)域與功能分析 InterPro對(duì)果蠅Tap蛋白的結(jié)構(gòu)域和功能分析結(jié)果如圖6，Tap蛋白包含有Myc-type，bHLH結(jié)構(gòu)域(IPR011598)，具有蛋白質(zhì)二聚化功能活性(GO：0046983)。

2.8 Tap蛋白的同源性建模和三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè) 同源建模結(jié)果表明，Tap蛋白(155～213)和蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)庫(kù)中的模板2ql2.1.B有61.02%的氨基酸序列一致[11]，該模板來(lái)源于NeuroD1。以2ql2.1.B為模板構(gòu)建出Tap蛋白的三維結(jié)構(gòu)如圖7所示，模型質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果GMQE為0.07，QMEAN4為-1.43。

2.9 果蠅Tap蛋白氨基酸序列同源性分析 同源性分析結(jié)果顯示果蠅Tap蛋白序列與NGN1、NeuroD4、NeuroD1、NGN3、NeuroD2、NGN2序列有70%、61%、58%、58%、57%、57%的相似性，與人源和鼠源的NGN1蛋白同源性最高，據(jù)此推測(cè)果蠅Tap蛋白可能與哺乳動(dòng)物的NGN蛋白為同源蛋白，這也說(shuō)明了它們?cè)谶M(jìn)化過程中的親緣關(guān)系。通過從相關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)中收集下載序列相似性大于50%的各物種編碼蛋白的資料來(lái)構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)生樹，如圖8所示，果蠅Tap蛋白與人類和嚙齒動(dòng)物的編碼產(chǎn)物具有高度同源性，在系統(tǒng)發(fā)生樹中距離最近，它們可能發(fā)揮著相同的生物學(xué)功能。

圖6 Tap蛋白結(jié)構(gòu)域與功能分析

圖7 Tap蛋白的三維結(jié)構(gòu)預(yù)測(cè)

圖8 果蠅Tap蛋白氨基酸序列與其他物種間的系統(tǒng)發(fā)生樹

3 討 論

基因序列比對(duì)表明果蠅Tap基因與脊椎動(dòng)物的ngn和NeuroD關(guān)系最為密切。ngn基因表現(xiàn)出原神經(jīng)基因的特征，在脊椎動(dòng)物中啟動(dòng)了神經(jīng)發(fā)生過程，而NeuroD通常作為原神經(jīng)蛋白的下游基因調(diào)節(jié)神經(jīng)分化過程[12-13]。雖然Tap基因序列與原神經(jīng)基因相似，但實(shí)際上其在基因激活次序中晚于原神經(jīng)基因，因此Tap基因的功能至今未知[6-7]。本研究綜合利用多種生物信息學(xué)資源和工具，如ORF Finder、ProtParam、PredictProtein、InterPro、BLASTp等，對(duì)果蠅Tap蛋白的性質(zhì)、結(jié)構(gòu)、功能以及不同物種間氨基酸序列的同源性及進(jìn)化關(guān)系進(jìn)行了分析。從分析結(jié)果可知，果蠅Tap基因的ORF長(zhǎng)1 197 bp，編碼398個(gè)氨基酸，富含Pro和Ser，理論分子量約44.85×103。脂肪系數(shù)為54.22，總平均親水指數(shù)為-0.849，整條多肽鏈表現(xiàn)為親水性，預(yù)測(cè)Tap蛋白為水溶性蛋白。Tap蛋白的二級(jí)結(jié)構(gòu)主要為L(zhǎng)oop，其二級(jí)結(jié)構(gòu)容易接近水分子。Loop作為蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)的一種，與其他二級(jí)結(jié)構(gòu)α-螺旋和β-折疊不同的是其柔性很大，不能很好地限定于某種特定形式的結(jié)構(gòu)。由于Loop結(jié)構(gòu)經(jīng)常出現(xiàn)在活躍點(diǎn)和對(duì)接點(diǎn)，可用于分子識(shí)別，所以在蛋白質(zhì)的特征和功能中起著關(guān)鍵作用。Tap蛋白無(wú)N端信號(hào)肽，不形成跨膜區(qū)，氨基酸序列126～160位間存在NLS，可能定位于細(xì)胞核而發(fā)揮其生物學(xué)功能。結(jié)構(gòu)域和功能分析表明Tap蛋白含有bHLH結(jié)構(gòu)域，具有蛋白質(zhì)二聚化活性。bHLH蛋白含有一段近60個(gè)氨基酸殘基的特征性序列模體，即一個(gè)HLH結(jié)構(gòu)域和其上游富含堿性氨基酸殘基的堿性結(jié)構(gòu)域，HLH區(qū)域參與蛋白質(zhì)二聚化，而堿性區(qū)域與DNA序列特異性結(jié)合，大部分bHLH蛋白以同源或異源二聚體形式與DNA結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)功能。蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)同源建模分析發(fā)現(xiàn)，果蠅Tap蛋白氨基酸序列與來(lái)源于NeuroD1的模板2ql2.1.B有61.02%的相似性，表明Tap蛋白可能與NeuroD1具有相同的結(jié)構(gòu)與功能：NeuroD通過HLH結(jié)構(gòu)域與TCF3/E47形成異源二聚體后與E-box序列結(jié)合。NeuroD作為轉(zhuǎn)錄激活因子，通過結(jié)合于啟動(dòng)子E-box核心序列活化轉(zhuǎn)錄；與神經(jīng)發(fā)生轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子編碼基因的增強(qiáng)子調(diào)控元件密切相關(guān)；參與調(diào)節(jié)細(xì)胞分化與遷移，如促進(jìn)早期視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞和內(nèi)耳感覺神經(jīng)元的形成，胰腺的胰島細(xì)胞和小腸的腸內(nèi)分泌細(xì)胞形成，在小腦皮質(zhì)參與樹突的發(fā)生與維持等[14-15]。氨基酸序列同源性分析結(jié)果表明，果蠅Tap蛋白與人類和嚙齒動(dòng)物進(jìn)化距離最近，編碼產(chǎn)物具有高度同源性，與人源和鼠源的NGN1蛋白同源性最高。果蠅Tap蛋白可能與哺乳動(dòng)物的NGN蛋白為同源蛋白，它們可能發(fā)揮著相同的生物學(xué)功能。NGN家族是脊椎動(dòng)物神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育過程中轉(zhuǎn)錄調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的重要部分，作為轉(zhuǎn)錄因子，廣泛參與神經(jīng)發(fā)生、細(xì)胞分化和細(xì)胞譜系決定等過程。在哺乳動(dòng)物大腦皮質(zhì)發(fā)育過程中，NGN1和NGN2僅表達(dá)于神經(jīng)發(fā)生時(shí)期的皮質(zhì)腦室?guī)ВcE12和E47等bHLH蛋白形成異源二聚體，啟動(dòng)組織特異性基因表達(dá)，促使干細(xì)胞向神經(jīng)元方向分化。

本研究為了提高預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性，對(duì)大多數(shù)類型的預(yù)測(cè)均選用了多種不同工具。由于不同預(yù)測(cè)程序分析時(shí)所依據(jù)的原理和采用的算法有所不同，它們所預(yù)測(cè)結(jié)果中的一致性部分具有較高的可信度。生物信息學(xué)分析表明果蠅Tap蛋白具有bHLH結(jié)構(gòu)域，與哺乳動(dòng)物NGN在序列上同源性最高，與NeuroD具有相同的高級(jí)結(jié)構(gòu)，推測(cè)果蠅Tap蛋白可能作為轉(zhuǎn)錄因子參與果蠅神經(jīng)發(fā)生與細(xì)胞分化等過程。本文對(duì)果蠅Tap蛋白的生物信息學(xué)分析結(jié)果，對(duì)深入研究Tap蛋白的功能注釋與調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和進(jìn)一步了解Tap基因?qū)壈l(fā)育的影響提供參考。

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Bioinformatics analysis of the structure and function of Drosophila Tap protein*

LiuHongchao1,HuShu1△,TuXinming2

(1.LaboratoryofNeurogenetics/BiomedicalExperimentalTrainingCenter; 2.DepartmentofHumanAnatomy,HistologyandEmbryology,MedicalCollege,HenanUniversityofScienceandTechnology,Luoyang,Henan471003,China)

Objective To analyze the structure and function of Drosophila Tap protein using bioinformatics methods.Methods Based on the amino acid sequences of Drosophila Tap protein from NCBI database,the bioinformatics analyses were performed to unravel the physicochemical property,the transmembrane region,the signal peptide,the subcellular localization,the domain,the tertiary structure,the phylogenetic tree of Tap protein and Tap related proteins from other species.Results Tap protein was an unstable hydrophilic protein,playing biological function in the nucleus.It contained a basic helix-loop-helix(bHLH) domain,but without transmembrane region and signal peptide.The amino acid sequence identity between Tap protein and NeuroD1-derived template 2ql2.1.B was 61.02%.Tap protein and its related proteins in human and rodents were most close in the phylogenetic tree,showing high homology.Conclusion Tap protein contains the typical bHLH structure and may play a role in the neurogenesis,neural precursor cell differentiation in early embryonic stage of Drosophila.

Tap protein; basic helix-loop-helix motifs;molecular structure;computational biology;drosophila melanogaster

國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(31171256)；自然科學(xué)基金河南科技大學(xué)配套經(jīng)費(fèi)(09001504)；河南科技大學(xué)博士啟動(dòng)基金(13530057)。 作者簡(jiǎn)介：劉洪超(1990-)，在讀碩士，主要從事神經(jīng)發(fā)育和遺傳研究。△

，Tel:(0379)64810765;E-mail：hushu51@sina.com。

·基礎(chǔ)研究

10.3969/j.issn.1671-8348.2015.17.003

R394.1；Q

A

1671-8348(2015)17-2311-04

2014-09-15

2015-03-20)