白鶴

環(huán)孢素A對免疫功能的影響

白鶴

目的 研究環(huán)孢素A對免疫功能的影響。方法 通過2, 4-二硝基氟苯(DNFB)誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)考察該藥對細(xì)胞免疫功能的影響；用L929作為靶細(xì)胞的MTT染色法測定該藥對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞經(jīng)脂多糖(LPS)刺激產(chǎn)生腫瘤壞死因子α(TNF-α)的影響。結(jié)果 環(huán)孢素A能明顯抑制DNFB誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)；高劑量能促進(jìn)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TNF-α生成。結(jié)論 環(huán)孢素A有較強(qiáng)的免疫抑制作用。

環(huán)孢素A；免疫功能；腫瘤壞死因子-α

環(huán)孢素A是目前廣為推薦的一種兼有抗有絲分裂和抗炎效應(yīng)的強(qiáng)力免疫抑制劑［1］。主要選擇抑制T細(xì)胞活化, 對B細(xì)胞的抑制作用弱, 對巨噬細(xì)胞的抑制作用不明顯, 對自然殺傷(NK)細(xì)胞活力無明顯抑制作用, 但可間接通過干擾素(interferon-γ, INF-γ)的產(chǎn)生而影響NK細(xì)胞的活力［2］。本文就其對免疫功能的調(diào)節(jié)作用和對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TNF-α生成的影響進(jìn)行初步研究, 為該藥的臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料 30只昆明種小鼠隨機(jī)分為不致敏組、致敏組和環(huán)孢素組, 每組10只除不致敏組外, 每鼠腹部去毛, 面積約3 cm ×3 cm大小, 均勻涂抹1% DNFB溶液50 μl致敏, 次日強(qiáng)化1次。小鼠自致敏當(dāng)日起給藥1次/d, 連續(xù)6 d, 于致敏第5天后, 各組小鼠左耳(兩面)均勻涂抹1% DNFB溶液10 μl進(jìn)行攻擊。24 h后將小鼠頸椎脫臼處死, 剪下雙耳, 用直徑為8 mm的不銹鋼銃子分別在左右耳同一部位沖下圓耳片,電子天平分別稱重, 以左右耳片重量之差作為腫脹程度。同時(shí)取小鼠胸腺及脾臟稱重, 分別以小鼠每10 g體重的脾重(mg)和胸腺重(mg)作為脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù), 統(tǒng)計(jì)各組的差別, 并計(jì)算抑制率(%)。

1.2 方法 L929細(xì)胞MTT染色法測定樣品TNF-α活性。L929細(xì)胞長滿單層后, 用0.25%胰酶消化, 重懸細(xì)胞于RPMI-1640培養(yǎng)液中, 細(xì)胞計(jì)數(shù)后調(diào)濃度為1×105cells/ml接種到96孔平底培養(yǎng)板中, 200 μl/孔, 設(shè)3個(gè)復(fù)孔, 37℃, 5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h。棄上清, 每孔加入含0.5 μg/ml放線菌素D的培養(yǎng)液100 μl, RPMI-1640培養(yǎng)基或上述待測樣品100 μl, 設(shè)3個(gè)復(fù)孔, 37℃, 5%CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)20 h后, 向上清中加入MTT(5 mg/ml) 20 μl, 繼續(xù)培養(yǎng)4 h。棄去上清, 100 μl/孔DMSO裂解10 min, 待細(xì)胞完全融解后置于酶標(biāo)儀中570 nm處測定O.D.值。以1640培養(yǎng)基孔為對照, 以細(xì)胞毒百分率表示樣品所含TNF-α含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 環(huán)孢素A對DNFB誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響 環(huán)孢素A(80 mg/kg)經(jīng)皮下注射給藥對DNFB誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)有顯著的抑制作用。見表1。

表1 環(huán)孢素A對DNFB誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響±s)

表1 環(huán)孢素A對DNFB誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的影響±s)

注： 與不致敏對照組比較,aP＜0.01,bP＜0.01,cP＜0.05；與模型組比較,dP＜0.05,eP＜0.01；括號(hào)內(nèi)數(shù)值為抑制率(%)

組別例數(shù)耳腫脹度(mg)胸腺指數(shù)(mg/10 g體重)脾臟指數(shù)(mg/10 g體重)環(huán)孢素組(mg/kg, s.c, ×5 d)10 3.1±1.4e(73.2) 16.4±2.8e(43.0) 58.9±7.7d(18.1)致敏組1011.6±5.6b29.2±6.2a71.8±14.3c不致敏組1.3.1±2.837.3±4.859.1±6.3

2.2 環(huán)孢素A對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞生成TNF-α的影響 初步實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示, 環(huán)孢素A在劑量5 g/ml時(shí)對LPS刺激的小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TNF-α分泌具有明顯的促進(jìn)作用,增加率為127.6%。見表2。

表2 環(huán)孢素A對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞TNF α分泌的影響

3 小結(jié)

環(huán)孢素A是一種兼有抗炎效應(yīng)的免疫抑制劑, 主要用于器官移植排斥反應(yīng), 近年來發(fā)現(xiàn)它對角膜炎癥, 多發(fā)性心肌炎, 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎均有一定的治療效果［3,4］。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明, 環(huán)孢素A對免疫功能調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究也表明該藥能明顯抑制DNFB誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng), 表現(xiàn)為明顯減輕小鼠耳腫脹, 對胸腺和脾臟抑制作用顯著。

綜上所述, 環(huán)孢素A具有較強(qiáng)的免疫抑制作用。

［1］ 蔣催蓉, 左麗 , 鐘志強(qiáng). 赤靈芝孢子粉對環(huán)孢素A免疫抑制模型小鼠固有免疫功能的影響.貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào), 2009, 34(5): 546-549.

［2］ 李靖, 程桂芳, 朱秀媛. Gn類化合物對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞產(chǎn)生腫瘤壞死因子α的影響. 藥學(xué)學(xué)報(bào), 2000, 35(5):335-338.

［3］ Zhong M, Cheng GF, Wang WJ, et al. Inhibitory effect of resveratrol on interleukin 6 release by stimulated peritoneal macrophages of mice. Phytomedicine, 1999(6):79.

［4］ Zhang M, Yao Q, Sun BH, et al. Inducement and production of tumor necrosis factor by murine peritoneal macrophage. J Immunol, 1991(7):254.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.23.204

2015-03-13］

136000 吉林省神經(jīng)精神病醫(yī)院