楊銀花 王佳寧 韓雪 石安華 姚 政 譚麗萍 馬 潔 殷 華 賈 勇 陳文慧

·實(shí)驗(yàn)研究·

早期非酒精性脂肪肝大鼠血液流變學(xué)變化及膈下逐瘀湯的干預(yù)作用

楊銀花 王佳寧 韓雪 石安華 姚 政 譚麗萍 馬 潔 殷 華 賈 勇 陳文慧

目的 探討早期非酒精性脂肪肝大鼠血液流變學(xué)變化及膈下逐瘀湯對(duì)早期非酒精性脂肪肝大鼠血液流變學(xué)的干預(yù)作用。方法 采用高脂飼料法制備早期非酒精性脂肪肝大鼠模型, 60只雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組(A組)20只、模型組(B組)20只、膈下逐瘀湯組(C組)10只、阿司匹林組(D組)10只。B組、C組、D組給予高脂飼料(普通飼料基礎(chǔ)上加10%豬油, 2%膽固醇)持續(xù)喂養(yǎng)12周, A組20只給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)。8周末開始模型組給予生理鹽水灌胃, C組、D組分別給予膈下逐瘀湯、腸溶阿司匹林灌胃。分別于造模第6、12周末測(cè)定大鼠肝脂、血液流變學(xué)指標(biāo), 光鏡觀察肝組織病理變化。結(jié)果 高脂飼料喂養(yǎng)6周, B組大鼠肝脂比A組顯著升高(P＜0.01), 血液流變學(xué)指標(biāo)比正常組升高；第12周末B組血液流變學(xué)指標(biāo)比A組升高(P＞0.01), 肝脂升高更明顯；12周末膈下C組血液流變學(xué)指標(biāo)、肝脂比B組顯著降低(P＜0.01)。結(jié)論 高脂飼料喂養(yǎng)6周能復(fù)制早期非酒精性脂肪肝大鼠模型；隨著脂肪肝病程進(jìn)展, 模型大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)有升高趨勢(shì), 膈下逐瘀湯對(duì)升高的血液流變學(xué)指標(biāo)有改善作用。

早期非酒精性脂肪肝；血液流變學(xué)；膈下逐瘀湯；干預(yù)

非酒精性脂肪肝(NAFL)是一種無過量飲酒史, 肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞脂肪變性和脂肪貯積為特征的臨床病理綜合征。隨著肥胖和代謝綜合征全球化的流行趨勢(shì), NAFL已成為21世紀(jì)全球重要的公共健康問題之一, 亦是我國(guó)愈來愈重視的慢性肝病問題［1］。本實(shí)驗(yàn)通過復(fù)制早期非酒精性脂肪肝大鼠模型,觀察早期非酒精性脂肪肝大鼠血液流變學(xué)變化趨勢(shì), 采并用“以方測(cè)證”手段, 觀察活血化瘀方劑膈下逐瘀湯對(duì)模型大鼠血液流變學(xué)的干預(yù)作用。

1 材料與方法

1.1 材料 雄性SD大鼠60只, 清潔級(jí), 體重(150±10)g,昆明醫(yī)科大學(xué)實(shí)物中心提供, 生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(滇)11-0004(5939180), 飼養(yǎng)于云南中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心, 室溫適應(yīng)性飼養(yǎng)l周后用于實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn) 藥物膈下逐瘀湯藥材購(gòu)自云南省中醫(yī)醫(yī)院, 腸溶阿司匹林片：(拜耳醫(yī)藥保健有限公司, 批號(hào)：J0080078)。

1.3 試劑及儀器 10%中性福爾馬林：云南中醫(yī)學(xué)院病理實(shí)驗(yàn)室配制。全自動(dòng)生化分析儀(上海市離心機(jī)械研究所)、賽科希德SA-6000全自動(dòng)血流變儀(北京賽科希德科技發(fā)展有限公司)。

1.4 方法

1.4.1 早期非酒精性脂肪肝動(dòng)物模型制備：60只雄性SD大鼠隨機(jī)分為正常組(A組)20只、模型組(B組)20只、膈下逐瘀湯組(C組)10只、阿司匹林組(D組)10只。B組、C組、D組給予高脂飼料普通飼料喂養(yǎng)大鼠持續(xù)12周, A組給予基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)。從第8周末開始B組給予生理鹽水灌胃, C組、D組分別給予膈下逐瘀湯、阿司匹林灌胃。

1.4.2 標(biāo)本的制備 6周末從A組及B組各隨機(jī)抽取10只大鼠, 12周末剩余A組、B組大鼠及C組、D組大鼠麻醉剖殺取血, 處死后迅速取肝臟。肝左葉存于10%中性福爾馬林中用于病理切片, 肝右葉凍存用于制備肝勻漿測(cè)肝脂。

1.4.3 觀察指標(biāo)及測(cè)定 一般觀測(cè)指標(biāo)包括觀察大鼠每日進(jìn)食、飲水量、大小便、體重；用全自動(dòng)血流變儀測(cè)定血液流變學(xué)指標(biāo)；肝組織勻漿檢測(cè)肝脂水平(ELISA法)；HE染色光鏡下觀察肝臟組織形態(tài)學(xué)改變。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 實(shí)驗(yàn)結(jié)果用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布、方差齊用方差分析, 方差不齊用非參數(shù)檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般情況 前4周A組和B組大鼠進(jìn)食情況正常, 第5周后B組進(jìn)食量及體重增加較快, 大便稀軟, 部分大鼠出現(xiàn)便溏。第8周末后B組體重增長(zhǎng)放緩, 進(jìn)食減少。

2.2 早期非酒精性脂肪肝大鼠6周末肝脂含量變化 B組與A組比大鼠脂質(zhì)顯著升高(P＜0.01)。見表1。

表1 早期非酒精性脂肪肝大鼠6周末肝脂變化( x-±s, mmol/L)

2.3 早期非酒精性脂肪肝大鼠6周末血液流變學(xué)指標(biāo)變化B組與A組比較, 全血粘度(低、中)、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、紅細(xì)胞剛性指數(shù)升高, 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 血小板計(jì)數(shù)顯著升高(P＜0.05)。見表2。

2.4 早期非酒精性脂肪肝大鼠6周末肝臟組織病理學(xué) B組大鼠肝細(xì)胞體積增大, 質(zhì)內(nèi)可出現(xiàn)大小不等的脂肪空泡。2.5 早期非酒精性脂肪肝大鼠12周末肝脂含量變化及膈下逐瘀湯干預(yù)作用：B組與A組比較, 肝脂顯著升高(P＜0.01)；與B組比較, C組、D組肝脂顯著降低(P＜0.01), C組比D組降低更明顯(P＜0.01)。見表3。

2.6 早期非酒精性脂肪肝大鼠12周末血液流變變化及膈下逐瘀湯干預(yù)作用 B組與A組比較, 全血粘度(低、中、高切)、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、紅細(xì)胞剛性指數(shù)、血小板計(jì)數(shù)升高, 差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；與B組比較, C組、D組血液流變學(xué)指標(biāo)顯著降低, 差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05和P＜0.01)。見表4。

表2 早期非酒精性脂肪肝大鼠6周末血液流變學(xué)指標(biāo)變化( x-±s)

表3 早期非酒精性脂肪肝大鼠12周末肝脂含量變化及膈下逐瘀湯干預(yù)作用( x-±s, mmol/L)

表4 早期非酒精性脂肪肝大鼠12周末血液流變變化及膈下逐瘀湯干預(yù)作用( x-±s)

4 討論

中醫(yī)認(rèn)為非酒精性脂肪性肝大多歸屬于“積聚”等范疇。氣滯、痰阻、血瘀是其主要病理產(chǎn)物, 而血瘀在脂肪肝的發(fā)生發(fā)展中起重要作用［2］。在血瘀證的現(xiàn)代研究中, 血液流變學(xué)已成為血瘀證診斷與活血化瘀研究的重要而實(shí)用的手段之一［3］。研究已證實(shí)NAFL伴隨血液流變學(xué)改變, 但早期NAFL是否存在血液流變學(xué)改變, 及隨著病程進(jìn)展血液流變學(xué)改變呈現(xiàn)什么樣的情況, 臨床及試驗(yàn)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)報(bào)道較少。因此, 本實(shí)驗(yàn)以早期NAFL大鼠病程進(jìn)展中的血液流變學(xué)變化為觀察點(diǎn)。

本實(shí)驗(yàn)以高脂飼料喂養(yǎng)6周后發(fā)現(xiàn)模型組大鼠肝脂(甘油三脂、總膽固醇)較正常組顯著升高, 血液流變學(xué)指標(biāo)升高,血小板計(jì)數(shù)顯著升高, 病理切片顯示肝細(xì)胞體積增大, 胞質(zhì)內(nèi)可出現(xiàn)大小不等的脂肪空泡。表明：采用高脂飼料喂養(yǎng)6周,可復(fù)制非酒精性脂肪肝大鼠模型隨著造模時(shí)間延長(zhǎng), 模型組血液流變學(xué)異常改變也有進(jìn)展趨勢(shì)。

造模成功后本實(shí)驗(yàn)采用活血化瘀經(jīng)典方膈下逐瘀湯灌胃對(duì)典型病理改變的大鼠進(jìn)行干預(yù), 作為佐證實(shí)驗(yàn)。膈下逐瘀湯取自于王清任《醫(yī)林改錯(cuò)》, 該方祛瘀而不傷血, 活血而不耗血［4］。本實(shí)驗(yàn)觀察到, 應(yīng)用膈下逐瘀湯干預(yù)4周后,用藥組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)較B組明顯降低, 同時(shí)肝組織甘油三酯、總膽固醇含量較模型組大鼠顯著降低, 且差異與陽性對(duì)照藥D組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05), 提示：早期NAFL大鼠存在血瘀證。

［1］ 范建高.非酒精性脂肪肝治療研究進(jìn)展.中華肝病雜志, 2008, 16(11):801.

［2］ 李俊賢, 黃孟君.非酒精性脂肪性肝病中醫(yī)藥研究進(jìn)展.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志, 2010, 27(19):3541-3542.

［3］ 廖福龍, 陳可冀.活血化瘀功效的生物力藥理學(xué)詮釋.中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜, 2006, 26(10):869-870.

［4］ 劉銀鴻.李英杰老師膈下逐瘀湯臨床應(yīng)用舉隅.中國(guó)中醫(yī)藥, 2011, 9(15):92-93.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.05.200

2014-10-27］

國(guó)家自然學(xué)科學(xué)基金資助(項(xiàng)目編號(hào)：81160492)；云南省運(yùn)用基礎(chǔ)研究“從微環(huán)境角度研究大鼠脂肪肝痰瘀的蛋白質(zhì)分子基礎(chǔ)”項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：13FZ093)；云南省運(yùn)用基礎(chǔ)研究“基于CD62p研究大鼠早期脂肪肝與血瘀證的相關(guān)性” 項(xiàng)目(項(xiàng)目編號(hào)：11FB075)

650500 云南中醫(yī)學(xué)院