彭寬志

肺炎支原體肺炎（MPP）是臨床上較為常見的兒童呼吸道感染疾病，肺炎支原體（MP）是常見病原體[1]。MPP的臨床表現(xiàn)缺乏特異性，容易誤診[2]，為能夠早期確診MPP，避免貽誤病情，需要一種能夠快速、準確診斷MPP的檢查方法。MP核酸檢查在MPP的早期診斷中得到一定應(yīng)用，但關(guān)于其檢查敏感性和特異性的報道較少。本研究選擇了98例肺炎支原體肺炎（MPP）患兒，對比了MP-IgM、MP-DNA檢測結(jié)果與金標準培養(yǎng)法檢測結(jié)果的一致性，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2010年1月-2013年12月本院住院診斷為肺炎支原體肺炎98例患兒作為研究對象，所有患兒均符合《諸福棠實用兒科學》（第7版）關(guān)于MPP的診斷標準[3]，X線檢查提示為片狀陰影炎癥浸潤。其中男57例，女41例；年齡1~12歲，平均（6.2±1.3）歲；病程2~31 d，平均（18.4±5.9）d。98例患兒均采集痰液樣本置于-70 ℃冰箱中保存待檢。

1.2 誘導痰采集 誘導之前，為有效清潔患兒空腔、咽喉、后鼻部污染物，需進行充分漱口。以濃度為3%高滲鹽水超聲霧化吸入，若感覺有痰液隨時咳出到清潔平皿中，為避免出現(xiàn)支氣管痙攣問題，霧化時間不應(yīng)超過30 min。選取痰液標本時，取符合標準的痰液1 mL，加入等量的痰液蓄積保護液，旋渦震蕩3 min，使其均勻，并于4 ℃環(huán)境下2000 r/min離心10 min，取上清液，將采集到的痰液樣本置于-70 ℃冰箱中保存待檢。

1.3 檢測方法 肺炎支原體免疫球蛋白（MP-IgM）、肺炎支原體DNA（MP-DNA）的檢測均由廣州金域醫(yī)學檢驗中心完成。MP-IgM采用酶聯(lián)免疫吸附試驗，MP-DNA采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測。

1.4 統(tǒng)計學處理 使用PEMS 3.0軟件對統(tǒng)計數(shù)據(jù)進行處理及分析，組間一致性采用Kappa檢驗，并以U檢驗排除抽樣誤差影響。以Kappa系數(shù)大小劃分6個區(qū)段的方法以表達結(jié)果一致性的強弱：（1）極差，Kappa系數(shù)<0；（2）差，Kappa系數(shù) 0~0.20；（3）弱，Kappa系數(shù) 0.21~0.40；（4）中度，Kappa系數(shù) 0.41~0.60；（5）高度，Kappa系數(shù) 0.61~0.80；（6）極強，Kappa系數(shù)0.81~1.00。

2 結(jié)果

MP-IgM、MP-DNA檢測結(jié)果的一致性較好，兩種檢測結(jié)果與金標準培養(yǎng)法檢測結(jié)果的一致性較好，見表1~3。

表1 MP-IgM、MP-DNA檢測結(jié)果的一致性 例

表2 MP-IgM與金標準培養(yǎng)法檢測結(jié)果的一致性 例

表3 MP-DNA與金標準培養(yǎng)法檢測結(jié)果的一致性 例

3 討論

肺炎支原體（MP）是兒童呼吸道感染的常見病原體，MPP是兒童呼吸道感染的常見疾病。嬰幼兒是MPP發(fā)病的高危群體[4]，但是其具體發(fā)病機制仍不十分清楚。一般認為，MP感染成為重癥肺炎的重要原因，MP會攻擊并破壞機體的免疫系統(tǒng)，導致免疫防御屏障不完整，在MP表面電子致密P1蛋白末端結(jié)構(gòu)的作用下，使其黏附于呼吸道黏膜上皮細胞上，進而破壞支氣管、細支氣管的黏膜層，破壞上皮纖毛活動，誘發(fā)陣發(fā)性咳嗽[5]。有試驗在MPP患兒的血液、腦脊液、皮膚水泡、胸水中分離出了MP，但是目前尚沒有權(quán)威資料證實MP侵入和MPP發(fā)病之間存在直接因果關(guān)系[6]。叢玲等[7]認為，細胞免疫與體液免疫在MPP的發(fā)病過程中擔任了非常重要的角色，其作用發(fā)揮方式包括激活B細胞和T細胞，激活NK細胞、細胞毒性T細胞以及巨噬細胞的溶細胞活力，激活免疫活性細胞并使其產(chǎn)生細胞白介素（如IL-2、IL-4、IL-6等）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等，在炎性細胞因子的浸潤作用下，肺泡壁會逐漸增厚，導致組織損傷。有研究結(jié)果顯示，處于急性感染期的MPP患兒會出現(xiàn)明顯的細胞免疫功能抑制，表現(xiàn)為淋巴細胞對MP的反應(yīng)顯著降低，對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌等生物抗原的反應(yīng)性下降[8]。綜合上述分析可知，MPP患兒存在免疫系統(tǒng)平衡遭到破壞情況，T淋巴細胞遭到抑制，尤其是CD8+T細胞、B淋巴細胞被激活，導致體液免疫功能失調(diào)。盡管目前MPP的發(fā)病機制尚不明確，但有一點有非常明確的，MPP是多種因素綜合作用的結(jié)果，單一病因無法解釋肺外所有癥狀，MP對呼吸組織的直接侵犯作用不足以誘發(fā)MPP，而宿主免疫反應(yīng)改變在MPP發(fā)病過程中顯得更加重要。因此，臨床上普遍以免疫指標的變化情況作為MPP臨床診斷、輕重判定、治療和預(yù)后的重要依據(jù)。

免疫球蛋白M（IgM）分子質(zhì)量最大的免疫球蛋白，廣泛分布于體液中，占血清Ig的5%~10%，能夠有效抵御菌血癥的發(fā)生，在機體的早期免疫應(yīng)答中作用明顯[9]。IgM在胚胎發(fā)育晚期的胎兒即可以產(chǎn)生，是個體發(fā)育過程中最早合成和分泌的抗體；同時，IgM在初次體液免疫應(yīng)答中出現(xiàn)抗體的時機也最早，是機體抗感染的先鋒。如果血液檢測結(jié)果提示檢出IgM，則表明機體近期有感染，因此，IgM在臨床上通常用于感染疾病的早期診斷。IgM具有較強的溶血、溶菌功能，抗原結(jié)合能力和補體激活能力也較強。血液中的免疫復(fù)合物質(zhì)在其他器官當中也可沉積并使其受損，重癥MPP患兒多會伴發(fā)一種或多種肺外并發(fā)癥，如腦炎、心肌炎、腎小球腎炎以及溶血性貧血等。臨床經(jīng)驗顯示，抗體量和MPP的病情輕重存在高度相關(guān)性，也表明肺炎支原體肺炎患者存在著體液免疫功能紊亂情況。周岳年[10]研究認為，MPP的病程越長，MPIgM抗體的陽性率越高，患兒的感染程度、免疫功能均會影響肺炎支原體抗體的檢出率；另外，由于嬰幼兒的免疫系統(tǒng)尚未完全發(fā)揮作用，出現(xiàn)MP感染時，患兒有可能會發(fā)生不出現(xiàn)抗體的情況，對MP-IgM抗體的陽性率產(chǎn)生影響，最終影響檢查的準確性[11]。MP-IgM檢查的優(yōu)點在于操作簡單、檢測費用低，大約1 h內(nèi)便可以獲得檢測結(jié)果，有利于臨床的早期診斷；加之檢測時不需要特殊儀器，適于在基層醫(yī)院中廣泛推廣使用。在本研究中，MP-IgM抗體檢測結(jié)果與MP-DNA檢測、金標準培養(yǎng)法檢測結(jié)果均保持了較高的一致性，證實MP-IgM抗體檢測結(jié)果具有良好的準確性。

核酸是生命的最基本物質(zhì)之一，根據(jù)化學組成不同，核酸可分為核糖核酸（RNA）和脫氧核糖核酸（DNA）。相對于血清免疫學檢測方法，聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法檢測MP-DNA檢出率的準確性要更高、特異性要更強、敏感性要更高。采用誘導痰檢測肺炎支原體DNA，樣本獲得簡便，且檢測時間短、特異性強、靈敏度高，抗體水平對檢測結(jié)果基本上沒有影響，只要標本中含有殘存的DNA片段，便可以檢出[12]。這在很大程度上彌補了肺炎支原體IgM高峰時間出現(xiàn)較晚，患兒免疫系統(tǒng)發(fā)育尚不成熟，無法對MP做出正確免疫應(yīng)答等不足。雖然該方法的檢出準確率高，檢出結(jié)果時間較短（低于3 h），但是由于該方法需要特殊的檢測儀器，在推廣方面具有一定難度[13]。由于優(yōu)秀的第三方檢測機構(gòu)也能夠提供良好的MP-DNA檢測服務(wù)，可以在一定程度上解決上述問題。綜合來看，MP-IgM抗體檢測所需時間更短、費用更低，但是漏診率更高，適合于病程較長的患兒；MP-DNA檢測能夠了解MP在患兒體內(nèi)的感染與復(fù)制情況，對于早期診斷、疾病復(fù)發(fā)判定均有較大幫助。

在本研究中，MP-DNA檢測結(jié)果與金標準培養(yǎng)法檢測結(jié)果均保持了很好的一致性，表明MP-DNA檢測結(jié)果準確性很好，能夠為MPP的臨床診斷提供有益參考。另外，根據(jù)臨床經(jīng)驗，肺炎支原體IgM陽性的患兒的平均病程約為1周，所以，對于臨床上高度懷疑MPP患兒，可以在患兒1周病程內(nèi)采集誘導痰樣本進行肺炎支原體DNA檢測，而待患兒病程超過1周后再進行肺炎支原體IgM檢測，以提高診斷的可靠性，也能夠提高病情和預(yù)后判斷的科學性。對于免疫系統(tǒng)尚未發(fā)育完善的年齡低于2周歲的患兒，可以采用同樣方法進行肺炎支原體DNA檢測，并對肺炎支原體IgM進行動態(tài)觀察，將兩種檢測方法進行有效結(jié)合，大幅度提高MP的檢出率，利于MPP的早期診斷和早期治療。綜上所述，筆者認為肺炎支原體核酸的檢測結(jié)果準確性較好，能夠為肺炎支原體肺炎的早期診斷提供一定參考，如兩種方法在臨床上相互結(jié)合使用能夠發(fā)揮最佳效果。

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