HPLC法測(cè)定天麻頭痛片中歐前胡素和異歐前胡素的含量

曹恒濤 趙江紅

河南省安陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 安陽(yáng) 455000

HPLC法測(cè)定天麻頭痛片中歐前胡素和異歐前胡素的含量

曹恒濤 趙江紅

河南省安陽(yáng)市食品藥品檢驗(yàn)所，河南 安陽(yáng) 455000

目的：建立天麻頭痛片中歐前胡素和異歐前胡素的含量測(cè)定方法。方法：采用高效液相色譜儀，waters Symmetry C18色譜柱（4.6×250mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇－乙腈－水為梯度洗脫；流速：1.0ml／min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：250nm。結(jié)果：歐前胡素在1.424～71.2μg／ml的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，加樣回收率為102.9%，RSD為1.45%；異歐前胡素在1.337～66.85μg／ml的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，加樣回收率為102.5%，RSD為1.85%。結(jié)論：所建立的方法可以用來(lái)檢測(cè)天麻頭痛片中歐前胡素和異歐前胡素的含量。

高效液相色譜；天麻頭痛片；歐前胡素；異歐前胡素

天麻頭痛片具有養(yǎng)血祛風(fēng)、散寒止痛的功效，臨床用于治療頭痛、血虛頭痛，血瘀頭痛。方中天麻為君藥，治一切頭風(fēng)；白芷祛風(fēng)散寒、通竅止痛，為臣藥。2010版《中國(guó)藥典》［1］測(cè)定了天麻頭痛片中天麻素的含量，但對(duì)白芷中起止痛作用的香豆素類成分含量未曾測(cè)定。歐前胡素和異歐前胡素是白芷的香豆素類的代表性成分［2］，本文采用HPLC測(cè)定天麻頭痛片中歐前胡素和異歐前胡素的含量，為完善天麻頭痛片的質(zhì)量控制提供了快速準(zhǔn)確地測(cè)定方法。

1 儀器與材料

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器 Waterse 2695高效液相色譜儀（美國(guó)waters公司）；MSA225－000－DU型電子天平（德國(guó)賽多利斯公司）。

1.2 試劑與樣品 歐前胡素（批號(hào)：110827－201109，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；異歐前胡素（批號(hào)：110826－201214，中國(guó)食品藥品檢定研究院）；甲醇、乙腈 （色譜純，J.T.BAKER）；超純水為Molecular純水機(jī)制備；天麻頭痛片（批號(hào)：121203，遼寧中醫(yī)學(xué)院制藥有限公司；批號(hào)：130401，沈陽(yáng)東新藥業(yè)有限公司）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱：Waters Symmetry C18柱（4.6× 250mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈∶甲醇∶水；檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm；流速：1.0 m l／min；柱溫：25℃。流動(dòng)相梯度如表1。

表1 流動(dòng)相梯度Tab1 Gradient elution procedure

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取歐前胡素與異歐前胡素對(duì)照前，加甲醇配置成濃度分別為0.01424mg／ml及0.01337mg／ml的混合對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取樣品10片，除去糖衣后，研細(xì)，精密稱取1g，精密加入甲醇50ml，稱定重量，超聲提取30min，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，即得。

2.4 陰性對(duì)照樣品的制備 按處方制備不含白芷的藥物，按照 “2.3”項(xiàng)的方法制備陰性對(duì)照樣品溶液。

2.5 線性關(guān)系的考察 分別取混合對(duì)照品溶液1、5、10、20、30、40、50μl，按“2.1”色譜條件測(cè)定峰面積。以峰面積 （Y，A）和進(jìn)樣量 （X，μg）做標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明，歐前胡素在1.424～71.2uμg／ml范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系，回歸方程為y＝47253X＋1520.6，r＝0.9999；異歐前胡素在1.337～66.85μg／ml范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系，回歸方程為y＝44432X＋347.82，r＝0.9999。

2.6 精密度 取混合對(duì)照品溶液，進(jìn)樣6次。測(cè)得歐前胡素、異歐前胡素峰面積值的RSD分別為0.81%、0.98%。表明儀器的精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取混合標(biāo)準(zhǔn)液，分別在0、2、5、12、24、30h進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。測(cè)得歐前胡素、異歐前胡素峰面積值的RSD分別為0.81%、0.98%，表明供試品溶液在30h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一樣品制備的供試品溶液6份，按“2.1”色譜條件進(jìn)樣，計(jì)算樣品中歐前胡素和異歐前胡素含量。歐前胡素含量的RSD為0.70%，異歐前胡素含量的RSD為1.41%。表明實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率測(cè)定 取片劑30片，除去糖衣后，研細(xì)，精密稱取1.2g 6份，分別精密加入歐前胡素0.4272mg，異歐前胡素0.1337mg，精密加入甲醇50m l，稱定重量，超聲提取30min，放冷，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，濾過(guò)，進(jìn)樣，計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見表2。

表2 加樣回收率測(cè)定結(jié)果

2.10 樣品測(cè)定 取樣品2份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，依法測(cè)定，計(jì)算樣品中歐前胡素與異歐前胡素的含量。天麻頭痛片（批號(hào)：121203）的歐前胡素含量為0.33mg／g、異歐前胡素含量為0.13mg／g；天麻頭痛片（批號(hào)：130401）的歐前胡素含量為0.39mg／g，異歐前胡素含量為0.13mg／g。

3 討論

3.1 波長(zhǎng)的選擇 歐前胡素在249nm和300nm有最大吸收，異歐前胡素在251和310nm處有最大吸收。本文選擇250nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)，同時(shí)測(cè)定歐前胡素與異歐前胡素能夠具有較好的靈敏度。

3.2 流動(dòng)相的選擇 實(shí)驗(yàn)中比較了甲醇－水梯度洗脫和乙腈－水梯度洗脫，發(fā)現(xiàn)兩種方法在待測(cè)峰處均有小雜峰難以分離，但雜峰干擾情況不相同。因此本文采用了乙腈－甲醇－水梯度洗脫，得到的分離效果和峰型都較好。

3.3 本文通過(guò)測(cè)定天麻頭痛片中歐前胡素和異歐前胡素，提高和完善了天麻頭痛片的質(zhì)量控制方法。所建立的方法簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確，分離度與重現(xiàn)性好，可以用來(lái)控制天麻頭痛片的質(zhì)量。

［1］國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典 （一部）［M］.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：518－519.

［2］胡華杰，樓招歡，呂圭源，等.HPLC測(cè)定不同產(chǎn)地白芷飲片中歐前胡素和異歐前胡素的含量［J］.浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，34（3）：418－420.

Determ ination of Imperatorin and Isoimperatorin in Tianmatoutongpian by HPLC

CAO Hengtao ZHAO Jianghong
Anyang City Institute of Food and Drug Control，Anyang 455000，China

Objective To establish amethod for determination of Imperatorin and Isoimperatorin in Tianmatoutongpian by HPLC .M ethod The two substanceswere determined with HPLC.An waters Symmetry C18column（4.6×250mm，5μm）was gradient eluted with acetontrile－water ata flow rate of1.0ml permin at250nm，and column temperaturewas at25℃.Result Imperatorin had a good linearity relationship between 1.424μg／ml-71.2μg／ml and the average recovery was 102.9%（RSD 1.45%），Isoimperatorin had a good linearity relationship between 1.337μg／m l-66.85μg／ml and the average recovery was102.5%（RSD 1.85%）.Conclusion Themethod can be used to determined of Imperatorin and Isoimperatorin in Tianmatoutongpian

HPLC；Tianmatoutongpian；Imperatorin；Isoimperatorin

R284.1

A

1007－8517（2015）12－0005－02

2015.04.18）