藺琳，程麗紅 ，章佩

(江西省人民醫(yī)院，1、口腔科；2、內(nèi)分泌科；3、藥劑科；江西 南昌330006)

銅與許多纖維化疾病都有著密切關(guān)系,口腔黏膜下纖維化(Oral submucous fibrosis,OSF)是一種慢性、隱匿性、具有癌變可能的炎性疾病，與咀嚼檳榔習(xí)慣有明顯的關(guān)系[1，2]。本研究采用原子吸收光譜法(火焰法)[3-5]檢測(cè)不同品牌的檳榔果中銅的含量，尋找到檳榔中銅的測(cè)定方法；再經(jīng)過不同的處理方法處理檳榔果，檢測(cè)銅的含量，力求尋找到一種能夠有效降低檳榔中銅含量的方法，從而降低咀嚼檳榔對(duì)口腔黏膜的損傷。

1材 料與方法

1.1 儀器與試劑 AA(240FS+240Z)原子吸收光譜儀(美國瓦里安公司 Varian)。銅元素貯備液:C=1000μg/ml(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所),用時(shí)用0.5%硝酸逐級(jí)稀釋至所需標(biāo)準(zhǔn)使用液。試驗(yàn)所用試劑為分析純,所用玻璃儀器均以硝酸(10%)浸泡24h以上,最后用水洗凈晾干。實(shí)驗(yàn)用水為去離子水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 (1)取不同品牌的檳榔果沿縱軸剖開后置80℃烤箱中烘烤至恒重，用中藥藥碾將烤干的檳榔碾碎成粉末狀，稱取5g待測(cè)，每組重復(fù)20次。(2)取干燥檳榔果若干，分別浸入不同溶液中處理，蒸餾水浸泡組、鹽酸(hydrochloric acid，HCl)(0.1%)、HCl(0.5%)、 HCl(1.0%)，EDTA-Na2(0.01 mol/L)、EDTA-Na2(0.05 mol/L)、 EDTA-Na2(0.1 mol/L)，每組分為兩個(gè)時(shí)間組，時(shí)間分別為24、48h，處理后的檳榔置80℃烤箱中烘烤至恒重，用中藥藥碾將烤干的檳榔碾碎成粉末狀，稱取5g待測(cè)，每組重復(fù)20次。(3)銅含量的測(cè)定：將5g待測(cè)樣品放入50 ml錐形瓶中,加入 25ml混合酸(硝酸∶高氯酸=4∶1),加蓋浸泡過夜,置電熱板上消化,至低溫冒白煙,使樣品溶解為濕鹽狀態(tài)(切勿蒸干),以HNO3定容至10 ml,同樣做試劑空白試驗(yàn)。將樣品和空白稀釋10倍后待測(cè)。在儀器工作條件下,對(duì)處理好的樣品進(jìn)行測(cè)定,由該元素的校準(zhǔn)曲線計(jì)算銅的含量。(4)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 數(shù)據(jù)用(x±s)表示。均數(shù)比較采用單因素方差分析。采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件分析完成,P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

見表 1、表 2。

表1 不同品牌檳榔中銅的含量(±s)

表1 不同品牌檳榔中銅的含量(±s)

注：各組檳榔銅含量?jī)蓛杀容^，青果與其他各組比較，差別具有顯著性意義，#P<0.05,煙熏果與其他各組比較，差別具有顯著性意義，*P<0.05，其余5組之間差別均無顯著性意義。

5.71±0.72 5.20±0.67 5.60±0.91 4.95±0.52 5.31±0.71 15.36±1.54#10.62±1.07*品牌 銅含量(μg/g)小龍王皇爺友文胖哥賓之郎青果煙熏果

表2 不同處理后檳榔中銅的含量(x±s)

3 討論

銅與許多纖維化疾病都有著密切關(guān)系，例如Wilson’s肝纖維化、硬皮病肺纖維化、心肌纖維化等[6，7]。據(jù)報(bào)道，檳榔果中銅含量明顯高于其他咀嚼果類[8-10]；咀嚼檳榔后5~30min后口腔全唾液中可溶性銅的含量明顯升高，并且OSF病變組織中銅含量較正常黏膜者高[11]；有學(xué)者在體外培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞中加入CuCl2發(fā)現(xiàn)膠原合成增加[12-14]，因此認(rèn)為檳榔中富含銅是OSF致病因素之一。

我國湖南、湖北和江西等省的一些民眾喜嚼加工過的干檳榔，這幾個(gè)地方也是OSF的高發(fā)地區(qū)[15]。在不同的地區(qū)不同的檳榔生產(chǎn)廠家，加工檳榔的方法有所不同，從樹上摘下檳榔后有的僅經(jīng)簡(jiǎn)單處理，如青果、煙熏果，有的則經(jīng)過較為復(fù)雜的加工流程，會(huì)加入不同的添加成分如桂枝油、蜂蜜、芝麻等。本研究檢測(cè)了各種品牌檳榔中銅的含量，發(fā)現(xiàn)各種品牌檳榔中都含有一定量的銅，其中青果及煙熏果中銅的含量較其他品牌為高，這表明在經(jīng)過現(xiàn)有加工工藝加工后，能在一定程度上降低銅離子的含量，從而減少對(duì)黏膜的刺激和損傷。但從現(xiàn)有的檳榔咀嚼人群OSF發(fā)病率來看，還需設(shè)法進(jìn)一步降低檳榔中銅離子的含量。

如何盡量減少銅離子的含量，對(duì)于預(yù)防檳榔咀嚼人群OSF的發(fā)生、降低其發(fā)病率、保護(hù)該人群的口腔健康有重要的意義。本研究嘗試用不同濃度HCl和EDTA-Na2處理檳榔不同時(shí)間，結(jié)果顯示除低濃度的HCl(0.1%24h)和EDTA-Na2(0.01mol/L24h)組外，其余各組均能有效地降低檳榔中銅離子的含量，其中 HCl(1.0%24h)、HCl(1.0%48h)組的效果最顯著，但這兩組差別無顯著性。這表明在檳榔加工過程中可以通過用一定濃度的HCl處理加工，特別是1.0%HCl處理檳榔，可降低成品檳榔的銅含量，從而降低咀嚼檳榔對(duì)口腔黏膜的損傷，這不僅能夠造福人民群眾，使檳榔咀嚼人群OSF發(fā)病率降低，同時(shí)亦可使檳榔加工企業(yè)獲得可持續(xù)發(fā)展,但本研究尚屬于實(shí)驗(yàn)室研究階段，如需應(yīng)用于檳榔加工工藝中還需進(jìn)一步研究。

[1]Rajendran R.Oral submucous fibrosis:etiology,pathogenesis,and future research[J].Bull World Health Organ,1994,72(6):985-996.

[2]Khan S,Chatra L,Prashanth SK,et al.Pathogenesis of oral submucous fibrosis[J].Cancer Res Ther,2012,8(2):199-203.

[3]張輝,唐杰.原子吸收光譜法測(cè)定蔬菜中的鐵、錳、銅、鉛和鎘[J].光譜實(shí)驗(yàn)室,2011,28(1):72-74.

[4]黃欣,陳紅香.微波消解-原子熒光光譜法測(cè)定食用植物油中鉛[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2008,26(5):560-566.

[5]呂英華,支紅峰,楊柳樺,等.火焰原子吸收法快速測(cè)定食品用橡膠制品中溶出鋅[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011,29(4):375-376.

[6]Neethi H,Patil S,Rao RS.Estimation of serum copper and zinc levels in oral submucous fibrosis:an atomic absorption spectroscopic study[J].J Contemp Dent Pract,2013,14(5):801-805.

[7]Pillai KG,Burde KN.Increased copper level in oral mucosal tissue of patients with submucous fibrosis and who chew areca nut products[J].West Indian Med J,2005,54(4):270-271.

[8]Mathew P,Austin RD,Varghese SS,et al.Estimation and comparison of copper content in raw areca nuts and commercial areca nutproducts:implications in increasing prevalence of oral submucous fibrosis(OSMF)[J].J Clin Diagn Res,2014,8(1):247-249.

[9]Mohammed F,Manohar V,Jose M,et al.Estimation of copper in saliva and areca nut products and its correlation with histological grades of oral submucous fibrosis[J].Oral Pathol Med,2015,44(3):208-213.

[10]Shakya S,Ongole R,Sumanth KN.Copper content of various constituents of betel quid[J].Indian J Dent Res,2009,20(4):516-517.

[11]Trivedy C,Warnakulasuriya KAAS,Peters TJ,et al.Raised tissue copper levels in oral submucous fibrosis[J].Oral Pathol Med,2000,29(6):241-248.

[12]Antoniades V,Sioga A,Dietrich EM,et al.Is copper chelation an effective anti-angiogenic strategy for cancer treatment[J].Med Hypotheses,2013,81(6):1159-1163.

[13]San Miguel SM,Opperman LA,Allen EP.Antioxidant combinations protect oral fibroblasts against metal-induced toxicity[J].Arch Oral Biol,2013,58(3):299-310.

[14]Trivedy C,Meghji S,Warnakulasuriya KAAS,et al.Copper stimulates human oral fibroblastsin vitro:a role in the pathogenesis of oral submucous fibrosis[J].Oral Pathol Med,2001,30(8):465-470.

[15]Tang JQ,Jiang XF,Gao ML,et al.Epidemiological survey of oral submucous fibrosis in Xiangtan city,Hunan province,China[J].Community Dent Oral Epidemiol,1997,25(2):177-180.