采用X射線衍射解析人鳥嘌呤核苷酸解離刺激因子RalGDSRas結(jié)合結(jié)構(gòu)域的空間結(jié)構(gòu)

黃雪英　雷明　沈陽　張巍　劉艷麗　劉珂　趙浩斌　祁超

摘 要 Ras結(jié)合結(jié)構(gòu)域（RBD）是鳥嘌呤核苷酸解離刺激因子（RalGDS）家族成員C端的高保守區(qū)，通過它連接Ras和Ras相關(guān)蛋白。利用Red Wings和SGC1 screens相關(guān)的懸滴法設(shè)盤結(jié)晶，按體積比1∶1加蛋白液到含1∶100胞內(nèi)蛋白酶GluC（w/w）的結(jié)晶溶液（2 mol/L （NH4）2SO4， 0.2 mol/L NaAc， 0.1 mol/L HEPES， 5% MPD， pH 7.5）中，晶體3天長成可組裝大小。利用X射線晶體衍射技術(shù)解析了人RalGDS的Ras結(jié)合域（RalGDSRBD）的晶體結(jié)構(gòu)，對比鼠和人RalGDSRBD，主要是Ras結(jié)合區(qū)的C端不同。人RalGDSRBD通過Glu838和Glu840在RalGDS和Ras蛋白間形成氫鍵， 而在同一位點，鼠RalGDSRBD通過Asp820和Asp822形成氫鍵。人RalGDSRBD結(jié)構(gòu)中含ββαββαβ型三維結(jié)構(gòu)的泛素樣構(gòu)象， 一個單體的C端殘基與相鄰單體的β折疊形成平行βββββ結(jié)構(gòu)。

關(guān)鍵詞 鳥嘌呤核苷酸解離刺激因子（RalGDS）； Ras結(jié)合結(jié)構(gòu)域（RBD）； Ras蛋白endprint