王茜 徐玉振

普羅布考對(duì)血管性癡呆大鼠行為學(xué)及海馬細(xì)胞凋亡的影響

王茜 徐玉振

普羅布考；血管性癡呆；Morris水迷宮；學(xué)習(xí)記憶；凋亡

1 材料和方法

1.1 材料 雄性3月齡清潔級(jí)Wistar大鼠60只，體質(zhì)量(220±10)g，購(gòu)于山東中醫(yī)藥大學(xué)。

1.2 方法 將大鼠60只隨機(jī)分為模型組、假手術(shù)組和普羅布考組，每組20只。模型組和普羅布考組大鼠以兩血管法制作血管性癡呆模型[1]，假手術(shù)組僅分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈不接扎。血管性癡呆模型采用Zea Longa等5分制評(píng)分[2]評(píng)價(jià)，1～3分表示造模成功，入組實(shí)驗(yàn)。最終，假手術(shù)組、普羅布考組和模型組分別有20只、18只和17只大鼠入組實(shí)驗(yàn)。普羅布考配制成濃度為5%的溶液，普羅布考組以普羅布考安體質(zhì)量500 mg/kg，1次/d，灌胃4周，模型組和假手術(shù)組以等體積羧甲基纖維素鈉灌胃。Morris 水迷宮[3]行隱蔽平臺(tái)實(shí)驗(yàn)3 d，1次/d，記錄逃避潛伏期，測(cè)試大鼠的學(xué)習(xí)能力，第4天撤除平臺(tái)，記錄停留原平臺(tái)象限時(shí)間，測(cè)試大鼠的記憶能力。Morris 水迷宮實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取海馬做冷凍切片，冠狀位切片，厚度約10 μm，行TUNEL染色，激光掃描共聚焦顯微鏡400倍鏡下觀察凋亡細(xì)胞，鏡下計(jì)數(shù)5個(gè)非重疊視野，計(jì)算凋亡細(xì)胞的平均值。凋亡細(xì)胞表現(xiàn)為在細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)綠色熒光。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示；Morris 水迷宮逃避潛伏期和停留原平臺(tái)象限各時(shí)間組間比較采用單因素方差分析，海馬神經(jīng)元凋亡檢測(cè)兩組間比較采用t檢驗(yàn)。以P<0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Morris水迷宮學(xué)習(xí)記憶能力的比較 與假手術(shù)組相比，模型組大鼠第1天，第2天和第3天的逃避潛伏期均明顯較長(zhǎng)，原平臺(tái)象限停留時(shí)間均明顯較短(P<0.05)；與模型組相比，普羅布考組大鼠的逃避潛伏期明顯較短，原平臺(tái)象限停留時(shí)間明顯較長(zhǎng)(均P<0.05)；與假手術(shù)組比較，普羅布考組大鼠的逃避潛伏期明顯較長(zhǎng)，原平臺(tái)象限停留時(shí)間明顯較短(P<0.05)。結(jié)果見表1。

表 1 各組大鼠Morris水迷宮學(xué)習(xí)記憶能力的比較

注：與假手術(shù)組同一天比較，*P<0.05；與模型組同一天比較，#P<0.05

A：假手術(shù)組；B：模型組；C：普羅布考組

圖1 各組大鼠海馬凋亡神經(jīng)元表現(xiàn)(TUNEL×400)

2.2 海馬神經(jīng)元凋亡檢測(cè) 激光掃描共聚焦顯微鏡下可見凋亡的海馬神經(jīng)元呈綠色，綠色熒光定位在細(xì)胞質(zhì)，模型組凋亡神經(jīng)元滿布視野且綠色熒光最強(qiáng)，普羅布考組與模型組比較凋亡神經(jīng)元數(shù)明顯減少，對(duì)照組僅有少量凋亡神經(jīng)元(圖1)。與假手術(shù)組(23.4±4.5)比較，模型組(200.2±10.7)與普羅布考組(82.0±7.8)海馬凋亡神經(jīng)元數(shù)明顯較多(P<0.05)；與模型組比較，普羅布考組海馬凋亡神經(jīng)元數(shù)明顯較少(P<0.05)。

3 討論 已有研究表明，普羅布考可改善阿爾茨海默病的認(rèn)知功能[4-5]，但普羅布考改善血管性癡呆認(rèn)知功能的研究較少。Morris水迷宮的逃避潛伏期和停留原平臺(tái)象限時(shí)間可反映大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，而TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)可反映海馬神經(jīng)元的凋亡情況。本研究發(fā)現(xiàn)，與假手術(shù)組比較，模型組及普羅布考組大鼠的逃避潛伏期延長(zhǎng)，原平臺(tái)象限停留時(shí)間縮短，海馬凋亡細(xì)胞增多；而與模型組大鼠比較，普羅布考組逃避潛伏期明顯縮短，原平臺(tái)象限停留時(shí)間延長(zhǎng)，海馬凋亡細(xì)胞數(shù)減少，提示普羅布考不僅可改善血管性癡呆大鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，也可減少血管性癡呆大鼠海馬神經(jīng)元的凋亡。普羅布考改善血管性癡呆的學(xué)習(xí)記憶能力，推測(cè)其可能通過(guò)減少海馬神經(jīng)元凋亡發(fā)揮作用。但普羅布考改善認(rèn)知功能的機(jī)制尚未完全清楚，有待于進(jìn)一步研究，為臨床治療血管性癡呆提供新的思路

[1]張艷,李倩倩,霍薇.血管性癡呆動(dòng)物模型的研究現(xiàn)狀[J].中國(guó)神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志,2015,22(1):67-70.

[2]Zea Longa E, Weinstein PR, Carlson S, et al.Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats[J]. Stroke,1989,20(1):84-91.

[3]徐玉振，秦麗晨，劉運(yùn)林. 消旋-3-正丁基苯酞對(duì)血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響[J].中華行為醫(yī)學(xué)與腦科學(xué)雜志，2011，20(4)：309-311.

[4]Santos DB, Colle D, Moreira EL, et al. Probucol mitigates streptozotocin-induced cognitive and biochemical changes in mice[J]. Neuroscience, 2015, 284: 590-600.

[5]Santos DB, Peres KC, Ribeiro RP, et al. Probucol, a lipid-lowering drug, prevents cognitive and hippocampal synaptic impairments induced by amyloid beta peptide in mice[J]. Exp Neurol, 2012, 233(2): 767-775.

(本文編輯：鄒晨雙)

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