耿　薇，曹　蕾，陳　燕

（咸陽師范學(xué)院化學(xué)與化工學(xué)院，陜西咸陽712000）

分析測試

柚子籽的脂肪酸組成與含量分析*

耿薇，曹蕾，陳燕

（咸陽師范學(xué)院化學(xué)與化工學(xué)院，陜西咸陽712000）

摘要：通過氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC- MS）測定柚子籽中的脂肪酸含量，用外標(biāo)法與峰面積歸一法兩種方法，進(jìn)行對比定量分析。柚子籽脂肪酸種類豐富，以不飽和脂肪酸為主，柚子籽中不飽和脂肪酸為67.42%。柚子籽中4種脂肪酸含量：亞油酸＞棕櫚酸＞油酸＞硬脂酸。

關(guān)鍵詞：柚子籽；脂肪酸；氣質(zhì)聯(lián)用；外標(biāo)法；峰面積歸一法中圖分類號(hào)：O657.63

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

“果之美者,有云夢之柚”，早在2000多年前的《呂氏春秋》中就有記載。柚子，又稱文旦、香欒，屬蕓香科常綠喬木，在我國有悠久的栽培歷史。柚子的藥用價(jià)值很高，《日華子本草》說它能“治妊娠人食少并口淡,去胃中惡氣,去腸胃氣。解酒毒,治飲酒人口氣”。柚子有健脾胃、潤肺、補(bǔ)血、清腸、利便、助消化的功效,可促進(jìn)傷口愈合，對敗血癥有良好的療效。此外,柚子的葉、皮、花、籽、根皆可入藥。柚子籽含有多種藥用活性成分，脂肪酸就是其中之一。脂肪酸是人體不可缺少的營養(yǎng)成分之一，與健康密切相關(guān)[1-3]。已有報(bào)道用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC- MS）的峰面積歸一法分析柚子籽中的脂肪酸含量[4，5]，本文通過GC- MS的外標(biāo)法與峰面積歸一法兩種方法分別測定柚子籽中的脂肪酸含量，并進(jìn)行對比定量分析。

1　實(shí)驗(yàn)部分

1.1儀器和試劑

GCMS- QP2010氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（日本島津SHIMADZU制作所）；10μL微量進(jìn)樣器（澳大利亞SGE）；RE- 52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海嘉鵬科技有限公司）；Sartorius CP124S電子天平（Max 120g，d = 0.1mg）；20～200μL移液器（Thermo Finnpipette）；SHB- IIIA循環(huán)水式多用真空泵（鄭州長城科工貿(mào)有限公司）；SB4200DTD超聲波清洗機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司）；DF- 101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（河南省予華儀器有限公司）；HR7625飛利浦食品加工機(jī)，101型電熱鼓風(fēng)干燥箱（北京科偉永興儀器有限公司）；索氏提取器；標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)篩（40目，孔徑0.45mm）。

柚子籽，正己烷，乙醚，甲醇，KOH，H2SO4，棕櫚酸（A.R.西安化學(xué)試劑廠）；硬脂酸（A.R.天津化學(xué)試劑廠）；油酸（A.R.天津化學(xué)試劑廠）；亞油酸（99%，百靈威科技有限公司）。

所用試劑均為分析純，水為二次蒸餾水。

1.2分析條件

氣相色譜條件：J&W DB- WAX彈性石英毛細(xì)管色譜柱（30m×0.25mm×0.25μm）；載氣為高純He，純度≥99.999%；柱溫：130～240℃。柱初溫130℃，保持1min，以20℃·min-1升溫至230℃，保持5min，再以20℃·min-1升溫至240℃，保持6.5min，共18.00min。進(jìn)樣口溫度250℃；柱前壓84.6kPa，柱流量1.00mL·min-1，分流比1 : 30；用微量進(jìn)樣器進(jìn)樣1.0μL。

質(zhì)譜條件：EI離子源，離子源溫度200℃，GC- MS接口溫度200℃，電子能量70eV，電子倍增器電壓0.97kV[4]，質(zhì)量掃描范圍29～450m·z-1，溶劑峰切除時(shí)間1.6min，質(zhì)譜檢測起測時(shí)間1.7min。

1.3柚子籽油的提取

將柚子籽烘干，粉碎，過40目篩。稱取一定質(zhì)量的樣品，移入濾紙筒內(nèi)，以乙醚作溶劑，采用索式提取器，30℃恒溫水浴回流3h。倒出上清液，抽濾，將濾液在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸去乙醚后，得到柚子籽油樣品。

1.4峰面積歸一法

樣品的甲酯化：準(zhǔn)確稱量柚子籽油于50mL圓底燒瓶中，準(zhǔn)確加入正己烷-乙醚（2∶1）溶液10.0mL，輕輕搖動(dòng)使之溶解，再加0.5mol·L-1KOH-甲醇溶液6.0mL，振蕩，60℃恒溫水浴回流進(jìn)行酯化反應(yīng)20min。加水至25mL，振蕩，靜置，吸取上層脂肪酸甲酯，做GC- MS分析。

1.5外標(biāo)法

1.5.1脂肪酸的甲酯化準(zhǔn)確稱量脂肪酸或樣品于25mL比色管中，準(zhǔn)確加入1%H2SO4-甲醇溶液2.0mL，于70℃水浴加熱60min。再加正己烷定容至10mL，振蕩，加水至25mL，振蕩，靜置24h，吸取上層脂肪酸甲酯，做GC- MS分析。

1.5.2脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制選取常見的4種脂肪酸：棕櫚酸，硬脂酸，油酸，亞油酸。準(zhǔn)確稱量4種脂肪酸的標(biāo)準(zhǔn)系列（7份）于25mL比色管中，按

1.5.1配制成標(biāo)準(zhǔn)溶液，做GC- MS分析。

2　結(jié)果與討論

2.1峰面積歸一法分析結(jié)果

圖1為柚子籽中脂肪酸分析的GC- MS總離子流圖，對GC- MS譜圖進(jìn)行鑒定和定量分析,應(yīng)用SHIMADZUGCMSsolutionRelease2.10專業(yè)分析軟件。

圖1　柚子籽中脂肪酸分析的GC-MS總離子流圖Fig.1 TIC of GC-MS of fatty acids from the grapefruit seed

成分鑒定根據(jù)GC- MS檢測所得到的質(zhì)譜信息，用質(zhì)譜圖計(jì)算機(jī)檢索數(shù)據(jù)庫NIST147數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，通過與標(biāo)準(zhǔn)譜圖對照以及質(zhì)譜碎片對峰的分析，確定每一個(gè)組分的化學(xué)結(jié)構(gòu)[4]。采用計(jì)算機(jī)檢索與人工解析各峰相應(yīng)的質(zhì)譜圖,用峰面積歸一法測定了其相對含量,結(jié)果見表1。

表1　柚子籽中脂肪酸的組成Tab.1 Composition of fatty acids from the grapefruit seed

2.2外標(biāo)法分析結(jié)果

2.2.1 4種脂肪酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線圖2為4種脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品的GC- MS總離子流圖。

圖2　 4種脂肪酸標(biāo)準(zhǔn)品的GC-MS總離子流圖Fig.2 TIC of GC-MS of the four standard substance of fatty acids

繪制4種脂肪酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程及相關(guān)系數(shù)見表2。

表2　 4種脂肪酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程及相關(guān)系數(shù)Tab.2 The calibration curve equation and correlation coefficent of the four fatty acids

2.2.2樣品分析結(jié)果

圖3為柚子籽中脂肪酸分析的GC- MS總離子流圖。

圖3　柚子籽中脂肪酸分析的GC-MS總離子流圖Fig.3 TIC of GC-MS of fatty acids from the grapefruit seed

柚子籽中4種脂肪酸的含量見表3。

表3　柚子籽中4種脂肪酸的含量Tab.3 Content of four fatty acids from the grapefruit seed

2.2.3回收率與精密度

準(zhǔn)確稱取樣品（5份）于25mL比色管中，分別加入棕櫚酸、硬脂酸、油酸和亞油酸標(biāo)準(zhǔn)品，按1.5.1配制溶液，做GC- MS分析。表4是樣品中4種脂肪酸含量的回收率與精密度。

表4　 4種脂肪酸的回收率與精密度Tab.4 Recovery and precision of four fatty acids

3　結(jié)論

對比外標(biāo)法與峰面積歸一法兩種方法分析柚子籽中的脂肪酸含量，峰面積歸一法是相對定量，較簡單易行，計(jì)算柚子籽中各脂肪酸的相對含量，柚子籽脂肪酸種類豐富，以不飽和脂肪酸為主，柚子籽中不飽和脂肪酸為67.42 %。外標(biāo)法是絕對定量，需要標(biāo)準(zhǔn)樣品，做標(biāo)準(zhǔn)曲線，準(zhǔn)確度較高，柚子籽中4種脂肪酸含量：亞油酸＞棕櫚酸＞油酸＞硬脂酸。

參考文獻(xiàn)

［1］吳惠勤，黃曉蘭，林曉珊，等.脂肪酸的色譜保留時(shí)間規(guī)律與質(zhì)譜特征研究及其在食品分析中的應(yīng)用［J］.分析化學(xué)，2007，35 （7）：998- 1003.

［2］魏永生，鄭敏燕，耿薇，等.常用動(dòng)、植物食用油中脂肪酸組成的分析［J］.食品科學(xué)，2012, 33（16）：188- 193.

［3］萬益群，肖麗鳳.超臨界CO2萃取柚子種子油及脂肪酸的氣相色譜分析［J］.分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2007, 23（5）：559- 562.

［4］鄭敏燕，寧堅(jiān)剛，耿薇,等.氣相色譜-質(zhì)譜法研究柚子籽油脂的組成［J］.咸陽師范學(xué)院學(xué)報(bào),2010,（2）.

［5］萬益群，肖麗鳳.柚子種子油的提取工藝及其脂肪酸的氣相色譜法測定［J］.食品科學(xué)，2008，（3）.

DOI：10.16247/j.cnki.23-1171/tg 20150214

收稿日期：2014- 11- 04

基金項(xiàng)目：咸陽師范學(xué)院專項(xiàng)科研基金項(xiàng)目（12XSYK022）

作者簡介：耿薇（1982-），女，碩士，工程師，主要從事分析測試方面的研究工作。

Fatty acid analysis of grapefruit seed by external standard method and peak area normalization method*

GENG Wei，CAO Lei，CHEN Yan

（School of Chemistry and Chemical Engineering, Xianyang Normal University, Xianyang 712000，China）

Abstract：This article analyzed the fatty acid in grapefruit seed by GC-MS，compared external standard method and peak area normalisation method to analyze quantitatively. There are different kinds of fatty acid in grapefruit seed. The main kind is unsaturated fatty acid，which is 67.42%. The content of the four fatty acids in grapefruit seed: linoleic acid＞palmitic acid＞oleic acid＞stearic acid.

Key words：grapefruit seed；fatty acid；GC-MS；external standard method；peak area normalization method