李明玥

哈藥集團生物工程有限公司

高效液相色譜法測定羅庫溴銨注射液含量

李明玥

哈藥集團生物工程有限公司

目的建立羅庫溴銨注射液含量測定方法。方法采用高效液相色譜法，色譜柱為硅膠柱（0.25m×4.6mm），流動相為乙腈（900ml）：四甲基氫氧化銨溶液100ml（4.53g/L，用磷酸調pH至7.4），檢測波長為210nm，系統(tǒng)適用性為取雜質H，加乙腈制成約0.1mg/ml的溶液。取供試品溶液1ml于10容量瓶中，向其中加入1ml雜質H溶液，加乙腈稀釋至刻度（重復配制6次），重復測定結果應符合規(guī)定。專屬性試驗結果表明輔料氯化鈉及醋酸鈉不干擾含量測定，準確度回收率為99.6%，相對標準偏差為1.2%，線性試驗研究結果表明溶液濃度在0.8mg/ml至1.2 mg/ml的范圍內，線性關系良好，重復性及中間精密度試驗符合規(guī)定，定量限試驗結果表明在信噪比約為10：1時溶液的濃度為2.1ug/ml。結果方法學試驗符合規(guī)定，所建立含量測定方法可用于本品含量測定，系統(tǒng)適用性試驗需考察雜質H與主峰分離度。

系統(tǒng)適用性；方法學；含量測定

羅庫溴銨是非去極化神經肌肉阻滯劑，與其它非去極化藥物一樣，它競爭性地與運動神經末梢突觸上的膽堿能受體結合，以拮抗乙酰膽堿的作用。由于其起效快，作用時間短而被廣泛地用于氣管內插管。在非去極化神經肌肉阻斷劑中，本品起效最快，一般在靜脈注射60秒鐘后就能為插管提供極好的條件。本文對羅庫溴銨含量測定方法進行篩選并驗證，建立羅庫溴銨注射液含量測定方法。

一、儀器與試藥

Agilent 1200 Series高效液相色譜儀，乙腈、四甲基氫氧化銨及磷酸為色譜純，pB-10型pH計（德國賽多利斯），羅庫溴銨對照品（純度99.8%，購自美國藥典委員會），色譜柱安捷倫硅膠柱（250mm*4.6mm,5mm），羅庫溴銨注射液供試品由哈藥集團生物工程公司提供，羅庫溴銨注射液對比制劑為浙江仙倨藥業(yè)股份有限公司，其它試劑均為分析純。

二、系統(tǒng)適用性試驗

雜質H為羅庫溴銨降解產物，與羅庫溴銨極性相似，在色譜條件發(fā)生微小變化時可能與羅庫溴銨不易分離，我們先對羅庫溴銨與雜質H進行分離度考察，方法參照美國藥典方法進行，取雜質H，加乙腈制成約0.1mg/ml的溶液。取供試品溶液1ml于10容量瓶中，向其中加入1ml雜質H溶液，加乙腈稀釋至刻度（重復配制6次），重復6次測定，結果雜質H與主峰分離度符合規(guī)定，相對標準偏差為0.8%，對主峰進行峰純度監(jiān)測，結果符合規(guī)定，說明羅庫溴銨與其它雜質可有效分離。

三、專屬性

稱取處方量的醋酸鈉及氯化鈉，加水使溶解制成每1ml含醋酸鈉0.2mg、氯化鈉0.33mg的溶液，作為空白對照溶液，取空白對照溶液進樣。結果氯化鈉及醋酸鈉不干擾羅庫溴銨的含量測定，專屬性符合規(guī)定。

四、線性

取羅庫溴銨對照品，加乙腈使溶解，制成羅庫溴銨對照品儲備溶液，精密量取對照品適量，加乙腈稀釋制成濃度分別為為0.8mg/ ml、0.9mg/ml、1.0mg/ml、1.1mg/ml、1.2 mg/ml的溶液，作為線性試驗的對照品溶液，取上述線性溶液進樣，分別測定其主峰的面積。以溶液濃度為橫坐標（X），主峰峰面積為縱坐標（Y），進行線性回歸分析。結果線性試驗符合規(guī)定，溶液濃度在0.8～1.2 mg/ml的濃度范圍內線性關系良好。

五、準確度

采用加入法測定回收率，分別配制濃度為80%、100%和120%的供試品溶液各三份，分別測定其含量，將實測值與理論值比較，計算回收率。取羅庫溴銨對照品，加乙腈制備成2mg/ml的溶液（10ml），作為對照品儲備液，備用；取羅庫溴銨注射液2ml于10ml容量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，作為供試品儲備液，備用。溶液Ⅰ制備（80%）：取對照品儲備液、供試品儲備液各2.0ml，于10ml量瓶中，加乙腈稀釋至刻度，重復配制3次。溶液Ⅱ制備（100%）：取對照品儲備液3.0ml、供試品儲備液2.0ml，于10ml量瓶中，加乙腈稀釋至刻度。溶液Ⅲ制備（120%）：取對照品儲備液4.0ml、供試品儲備液2.0ml，于10ml量瓶中，加乙腈稀釋至刻度。精密稱取對照品約10.1mg，加乙腈溶解稀釋至刻度，作為對照品溶液。取上述溶液，按照測定法測定，計算計算回收率。準確定平均回收率為99.8%，符合規(guī)定。

六、重復性

配制6份相同濃度（1.0mg/ml）的供試品溶液，重復測定6次，測定結果相對標準偏差為0.6%，重復性試驗符合規(guī)定。

七、中間精密度

分別由兩個分析人員使用不同的儀器（安捷倫、島津）與試劑進行測試，結果中間精密度測定結果的相對標準偏差為0.9%，中間精密度符合規(guī)定。

八、定量限

取羅庫溴銨對照品，制備成一定濃度溶液，進樣，主峰與噪音峰信號的強度比約為10：1。另外，配制6份最低定量限濃度的溶液，計算6份溶液主峰相對保留時間。結果在信噪比約為10：1時溶液的濃度為2.1ug/ml。6份樣品溶液的主峰相對保留時間符合規(guī)定。

九、樣品含量測定

取羅庫溴銨注射液樣品及對比制劑，按照確定測定方法測定羅庫溴銨注射液含量，結果主峰與雜質H分離度符合規(guī)定，供試品溶液及對比制劑含量測定結果分別為99.6%、99.1%、100.3%和99.8%，含量測定結果符合規(guī)定。

十、討論

本品含量測定關鍵因素為雜質H與主峰分離度，系統(tǒng)適用性試驗結果表明雜質H與主峰分離度符合規(guī)定，主峰峰純度符合規(guī)定，方法驗證結果符合規(guī)定，所建立含量測定方法可行。

[1]董軍杰，龐文哲，宋更申，姜建國.高效液相色譜法測定羅庫溴銨含量的不確定度評定.河北中醫(yī)，2011年12月第33卷第12期：1193-1194.

李明玥（1984-），女，黑龍江哈爾濱市，本科，哈藥集團生物工程有限公司，化驗員，工程師。