陳鳳梅　胡士林　 柳美玲　徐會(huì)梅　 （山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院　山東 濰坊　261061）

牛支原體肺炎防控技術(shù)

陳鳳梅胡士林*柳美玲徐會(huì)梅 （山東畜牧獸醫(yī)職業(yè)學(xué)院山東 濰坊261061）

自2008年以來，我國部分地區(qū)新從外地引進(jìn)肉牛普遍發(fā)生了一種具有明顯的傳染性，臨床上以呼吸系統(tǒng)癥狀為主，主要表現(xiàn)為發(fā)熱、流鼻涕、咳嗽；剖檢病變以壞死性肺炎為主，可見明顯壞死性、干酪樣病灶，被養(yǎng)殖戶稱之為“爛肺病”的疾病。該病的發(fā)病率為50%～100%，病死率高達(dá)10%～50%。該病與絲狀支原體絲狀亞種引起的牛肺疫臨床癥狀和病理變化極為相似。中國動(dòng)物衛(wèi)生與流行病學(xué)中心人畜共患病監(jiān)測(cè)室與重慶市動(dòng)物疫控中心合作對(duì)5個(gè)省市疫情進(jìn)行了密切監(jiān)視和調(diào)查，證實(shí)該病是由牛支原體引起的牛支原體肺炎。

牛支原體（Mycoplasma bovis）是感染牛的一種重要的致病性病原體，1961年Hale在美國首次從患乳腺炎的牛乳中分離到該病原，1976年首次報(bào)道與牛呼吸系統(tǒng)疾病有關(guān)。目前已證實(shí)牛支原體除導(dǎo)致牛肺炎、乳腺炎外，還可導(dǎo)致關(guān)節(jié)炎、角膜結(jié)膜炎、耳炎、生殖道炎癥、流產(chǎn)與不孕等多種疾病。該病在世界范圍內(nèi)存在，歐洲每年約有25%～33%的犢牛肺炎是由牛支原體引起的，相當(dāng)于每年損失1.44億～1.92億歐元，其中英國每年有190萬頭牛患牛支原體肺炎，死亡達(dá)15.7萬頭。美國每年由于牛支原體導(dǎo)致的牛呼吸系統(tǒng)疾病和乳腺疾病所造成損失達(dá)1.40億美元，單個(gè)牛場(chǎng)最高感染率達(dá)70%。該病在我國主要發(fā)生于肉牛運(yùn)輸之后，呈現(xiàn)“運(yùn)輸應(yīng)激綜合征”。近幾年，由于我國養(yǎng)牛業(yè)向規(guī)?；较蚩焖侔l(fā)展，牛只引進(jìn)和調(diào)運(yùn)頻繁；加之內(nèi)陸省份犢牛培育成本高昂，造成育肥牛牛源緊張，使得我國肉牛養(yǎng)殖呈現(xiàn)“北繁南育”和“北牛南調(diào)”的獨(dú)特現(xiàn)象。因此，給我國的肉牛養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重?fù)p失。

1　病原

牛支原體（M.bovis）屬于柔膜體綱，支原體目，支原體科，支原體屬；是一類能在無活細(xì)胞培養(yǎng)基中繁殖的最小的原核細(xì)胞型微生物，無細(xì)胞壁，繁殖形式多樣，具有高度多形性、可通過濾菌器。

牛支原體和牛無乳支原體（M.agalactiae）基因組非常相似，在16sRNA上有99%的同源性；與牛傳染性胸膜肺炎（Contagious Bovine Pleuropneumonia，CBPP）又稱牛肺疫的病原絲狀支原體絲狀亞種SC型（M.mycoiesSC）差異甚大，在16sRNA上只有81%的同源性。

表1　牛支原體肺炎病原與牛肺疫病原的差別

大部分支原體都是宿主特異性的黏膜常在菌，存在于呼吸道、腸道、生殖道和乳腺等部位，在外界環(huán)境中的生存能力極有限。牛支原體主要寄生在鼻腔，其次在乳腺。牛支原體在環(huán)境中的存活力較其它支原體稍強(qiáng)，如在避免陽光直射條件下可存活數(shù)周，在4℃牛奶和海綿中可存活2個(gè)月；在水中可存活2周以上：在20℃時(shí)，其存活時(shí)間降至1～2周，在37℃時(shí)其存活時(shí)間降為1周；65℃時(shí)，存活2min、70℃ 1min可滅活；但4～37℃范圍內(nèi)在液體介質(zhì)中可存活59～185d；在其它材料中的存活時(shí)間是：糞37d，棉18d，秸桿13d，木和不銹鋼1～2d。

2　流行病學(xué)

牛支原體自然感染的潛伏期較難確定。該病主要發(fā)生于6月齡內(nèi)犢牛，其中以1～2月齡多發(fā)。人不感染。國外有報(bào)道，在健康犢牛群中引入感染牛24h后，就有犢牛從鼻腔中排出牛支原體，但大部分牛在接觸感染牛7d后經(jīng)鼻腔排出牛支原體。有的牛在接觸感染牛2周后發(fā)病。我國牛支原體病的暴發(fā)幾乎都與運(yùn)輸有關(guān)，多數(shù)牛在運(yùn)輸?shù)侥康牡睾?周左右發(fā)病，如在途中遭遇雨淋等不良環(huán)境影響，?？稍谶\(yùn)達(dá)目的地后第2天即發(fā)病。感染牛支原體的牛可攜帶病原體數(shù)月甚至數(shù)年而成為一個(gè)傳染源。主要傳播途徑是通過飛沫呼吸道傳播，近距離接觸、吮吸乳汁或生殖道接觸等也可傳播牛支原體。異地運(yùn)輸、飼養(yǎng)方式、環(huán)境條件改變等應(yīng)激因素是牛支原體肺炎的誘發(fā)因素，同時(shí)牛支原體感染對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)造成極大的破壞作用，也進(jìn)一步促進(jìn)繼發(fā)感染或混合感染的病原微生物的致病作用。除細(xì)菌和病毒的混合感染外，梨形蟲感染可能對(duì)牛支原體肺炎的發(fā)生也有促進(jìn)作用。

表2　常與牛支原體混合感染的病原

3　臨床癥狀

發(fā)病初期體溫升高至42℃左右，病牛精神沉郁，食欲減退，咳嗽，氣喘，清晨及半夜或氣溫轉(zhuǎn)涼時(shí)咳嗽劇烈，有清亮或膿性鼻汁，嚴(yán)重者食欲廢絕，病程稍長(zhǎng)時(shí)患牛明顯消瘦，被毛粗亂無光；有的患牛繼發(fā)腹瀉，糞水樣或帶血；有的患牛繼發(fā)關(guān)節(jié)炎，表現(xiàn)跛行、關(guān)節(jié)膿腫等癥狀；也有病牛繼發(fā)結(jié)膜炎，眼結(jié)膜潮紅，有大量漿液性或膿性分泌物。嚴(yán)重者出現(xiàn)死亡，犢牛病情相對(duì)嚴(yán)重，病死率可達(dá)50%。據(jù)報(bào)道，2010年以來，新疆石河子、奎屯等某些規(guī)模化奶牛場(chǎng)發(fā)病犢牛以高熱，呼吸道癥狀，胸膜肺炎和膝關(guān)節(jié)腫大為特征，發(fā)病率為35%～40%，病程長(zhǎng)，犢牛生長(zhǎng)緩慢，采用多種抗生素治療，有一定效果，但常復(fù)發(fā)，病死率為5%～10%。

4　病理變化

剖檢病理變化主要集中在胸腔與肺部。肺和胸膜發(fā)生不同程度粘連，有少量積液；心包積水，液體黃色澄清；肺發(fā)生不同程度的病變，可能與病程及機(jī)體抵抗力有關(guān)。輕者可見肺尖葉、心葉及部分膈葉的局部紅色肉變，或同時(shí)有化膿灶散在分布；嚴(yán)重者可見肺部廣泛分布有干酪樣或化膿性壞死灶，整個(gè)肺表面分布有大量黃白色、大小不一的結(jié)節(jié)狀突起病灶，小至綠豆大小，大至融合成一片，質(zhì)地堅(jiān)實(shí)，切面質(zhì)脆。病牛的前胸和前肢皮下組織有黃綠色膠凍樣物浸潤(rùn)；關(guān)節(jié)腫脹，關(guān)節(jié)腔內(nèi)有大量黃綠色半透明液體。病理組織學(xué)觀察可見支氣管肺炎或化膿性壞死性肺炎，或凝固性壞死性肺炎的病理特征。犢牛人工感染牛支原體7d～14d后屠宰觀察，可發(fā)現(xiàn)牛肺出現(xiàn)肉變和肺門淋巴結(jié)增大。組織切片顯示支氣管附近單核細(xì)胞增多和中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，肺組織巨噬細(xì)胞數(shù)目增加以及肺泡中出現(xiàn)中性粒細(xì)胞。但人工感染少于2周的動(dòng)物很少發(fā)現(xiàn)干酪樣壞死病變。

5　診斷方法

目前，國內(nèi)外牛支原體病的確診方法主要有病原體的分離鑒定、血清學(xué)檢測(cè)、基因診斷和免疫組化。

5.1病原分離按照無菌操作規(guī)程將小塊組織樣本涂于類胸膜肺炎微生物（PPLO）和適當(dāng)抗生素的固體培養(yǎng)基表面，于體積分?jǐn)?shù)為5%的CO2的培養(yǎng)箱中，同時(shí)將小塊組織樣本投入到PPLO液體培養(yǎng)基中。2～3d后在光學(xué)顯微鏡低倍觀察菌落形態(tài)，支原體菌落應(yīng)具有“煎蛋樣”典型特征，液體培養(yǎng)基由紅色變?yōu)辄S色且透亮。

5.2基因檢測(cè)牛支原體基因檢測(cè)方法主要是PCR方法。由于牛支原體和牛無乳支原體同源性很高，所以僅僅使用PCR去檢測(cè)16SrRNA的擴(kuò)增片段無法區(qū)分牛支原體和無乳支原體，需要使用RT-PCR，雜交探針和解鏈溫度分析等輔助才可以快速靈敏的區(qū)分這兩種病原。此外，PCR擴(kuò)增16SrRNA后，再進(jìn)行變性梯度凝膠電泳也可以快速鑒別出這兩種病原。三重PCR診斷方法能夠一次性鑒別牛支原體、絲狀支原體絲狀亞種小克隆和無乳支原體。具有高敏感性、特異性和準(zhǔn)確性，可用于臨床診斷和流行病學(xué)調(diào)查。根據(jù)牛支原體特異性基因UvrC建立的環(huán)介導(dǎo)等溫核酸擴(kuò)增檢測(cè)（LAMP）方法，具有較高的特異性和靈敏性，為牛支原體的快速診斷提供了方法。

5.3抗體檢測(cè)牛支原體感染牛后，其脂質(zhì)及蛋白抗原能激發(fā)機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生免疫反應(yīng)，血清中抗牛支原體抗體可以持續(xù)存在幾個(gè)月，故血清學(xué)檢測(cè)被認(rèn)為是診斷牛支原體感染的手段之一，尤其對(duì)慢性感染或應(yīng)用過抗生素的病例更加適合。牛支原體血清學(xué)檢測(cè)方法包括間接血凝試驗(yàn)、生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)及間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等方法，用處理過的牛支原體全菌蛋白作包被抗原的間接ELISA是當(dāng)今最主要的血清學(xué)檢測(cè)方法。在歐洲等國家已有商業(yè)化的ELISA試劑盒出售，其敏感性和實(shí)效性都比傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法好得多，可用該法評(píng)價(jià)牛支原體血清抗體陽性率和建立無牛支原體感染牛場(chǎng)。一種針對(duì)牛支原體全菌裂解物的單克隆的封閉抗體作為目標(biāo)抗原的封閉ELISA方法，在檢測(cè)牛支原體血清抗體石具有高度特異性、敏感性、較少的背景干擾和交叉反應(yīng)。

5.4免疫組化免疫組化是一種敏感特異的鑒定病原的方法，該方法主要優(yōu)點(diǎn)在于可以檢測(cè)到支原體抗原在體內(nèi)的分布情況，特別是在其他方法表明牛支原體存在，但病原培養(yǎng)又為陰性時(shí)，免疫組化就顯得更為重要。在干酪樣壞死性支氣管肺炎的組織損傷中，免疫組化結(jié)果表明牛支原體抗原遍布于干酪樣壞死灶處，但是在壞死灶周圍尤其顯著；抗原主要在巨噬細(xì)胞的胞漿內(nèi)，在壞死物質(zhì)中沒有?？乖瑫r(shí)也存在于肺泡和支氣管腔內(nèi)的巨噬細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞和中性粒細(xì)胞內(nèi)。

6　防控措施

6.1肉牛支原體病的防控（1）做好選牛工作：最好直接到產(chǎn)地選牛。交易市場(chǎng)中的牛，有些已幾經(jīng)轉(zhuǎn)運(yùn)，雖未有異常表現(xiàn)，但其體能已有很大消耗，甚至已經(jīng)有內(nèi)部損傷，這種牛不能買。大牛的抗病能力明顯高于小牛，購牛時(shí)選大牛（＞250kg）不選小牛（＜200kg）。在選牛時(shí)，應(yīng)從側(cè)面、正面和后面仔細(xì)觀察，當(dāng)場(chǎng)發(fā)現(xiàn)異常牛如病牛、弱牛、殘牛、僵牛。注意發(fā)現(xiàn)牛只異常表現(xiàn)，如體表寄生蟲、流鼻涕、流眼淚、腹瀉等癥狀。目前一些不法分子通過多種途徑來增加牛的賣相，所以別花高價(jià)買好看的牛。選好牛后不要急于裝車，做好標(biāo)記后，應(yīng)在經(jīng)紀(jì)人牛圈內(nèi)觀察3～5d。確保犢牛至少在運(yùn)輸前30d斷奶，并已適應(yīng)粗飼料與精飼料喂養(yǎng)。發(fā)現(xiàn)問題牛及時(shí)退回。（2）做好運(yùn)輸工作：有研究發(fā)現(xiàn)雙層車運(yùn)輸?shù)呐?，運(yùn)輸后發(fā)病率明顯高于單層車，尤以上層發(fā)病率高。運(yùn)輸牛只要找穩(wěn)重、有經(jīng)驗(yàn)的司機(jī)，用單層車運(yùn)輸。車上要安裝頂棚或側(cè)棚，車底要有墊料。裝卸車時(shí)需采用專用裝卸臺(tái)，既可用固定的磚土結(jié)構(gòu)、也可用移動(dòng)式鋼架結(jié)構(gòu)，最好有護(hù)欄，禁止粗暴的對(duì)待牛只，減少恐懼。裝車密度以一半的牛能臥下為宜，不可過密。為了減少牛只疲勞，路途中間要適當(dāng)休息。（3）做好到場(chǎng)后的護(hù)理工作：肉牛到場(chǎng)卸車入圈后先休息2～3h，適量飲水，水中可適量添加電解多維、微生態(tài)制劑等；第一次控制飲水量，切記暴飲和飲用臟水。到場(chǎng)后第1天飼喂優(yōu)質(zhì)干草，限飼6成飽；第2天不限飼；第3天可開始添加精料，添加量不應(yīng)超過正常量1/3，以后逐漸增加精料量，第5天可達(dá)正常量的2/3，一周后可達(dá)到正常量（滿足該年齡段生長(zhǎng)所需營(yíng)養(yǎng)的量）。切記不可一次飼喂過多，以免由于應(yīng)激反應(yīng)引發(fā)的消化系統(tǒng)功能障礙尚未消除而引起瘤胃積食、臌氣和瘤胃酸中毒。入圈后要跟蹤巡查，及時(shí)發(fā)現(xiàn)病牛、及時(shí)隔離，以便及時(shí)治療。保持牛舍通風(fēng)良好、清潔、干燥。牛群密度適當(dāng)，避免過度擁擠。不同年齡及不同來源的牛應(yīng)分開飼養(yǎng)。適當(dāng)補(bǔ)充精料與維生素及礦物元素，保證日糧的全價(jià)營(yíng)養(yǎng)。（4）做好牛群衛(wèi)生消毒、驅(qū)蟲等工作：牛群到場(chǎng)后，牛舍糞便、污物應(yīng)及時(shí)清理，保持地面干凈。整個(gè)牛舍，第1周每天消毒2次，第2周每天消毒1次，以后每周消毒2次。隔離病牛舍應(yīng)每隔2h消毒1次。牛場(chǎng)還應(yīng)做好殺滅蚊、蠅、鼠工作，禁止雞鴨鵝狗等動(dòng)物在場(chǎng)內(nèi)亂穿，無關(guān)人員車輛隨便進(jìn)出牛場(chǎng)。（5）做好牛群驅(qū)蟲工作：驅(qū)蟲應(yīng)在精料添加至正常量之后進(jìn)行，可在到場(chǎng)后的第2周或第3周時(shí)進(jìn)行。驅(qū)蟲對(duì)象不應(yīng)只考慮驅(qū)殺消化道內(nèi)蠕蟲和皮膚上的寄生蟲，還應(yīng)考慮對(duì)在血液內(nèi)寄生的梨形蟲進(jìn)行驅(qū)殺；可分別進(jìn)行。（6）做好牛群免疫工作：根據(jù)當(dāng)前本省牛病流行情況，應(yīng)當(dāng)做好口蹄疫和牛出敗的免疫預(yù)防接種工作?？捎谂Ｈ旱綀?chǎng)后的第2周或第3周進(jìn)行口蹄疫首免，3周后進(jìn)行口蹄疫加強(qiáng)免疫；在第4周或第5周進(jìn)行牛出敗免疫。有條件的牛場(chǎng)可根據(jù)牛群抗體水平確定免疫程序。

6.2奶牛支原體病的防控對(duì)于使用抗生素治療無效的乳房炎，應(yīng)盡早進(jìn)行病原的分離鑒定，然后選擇敏感藥物治療。奶犢牛應(yīng)使用巴氏消毒奶飼喂，認(rèn)真做好定時(shí)、定量、定溫、定人飼喂。做好犢牛的防寒、防暑工作，盡最大可能減少各種應(yīng)激，保持合理密度和圈舍的衛(wèi)生與消毒。

6.3早診斷、早治療有效控制該病有肉牛場(chǎng)證實(shí)在牛群引進(jìn)后立即進(jìn)行全群治療，明顯降低了發(fā)病率和死亡率。早期應(yīng)用抗生素治療牛支原體病有一定效果，但應(yīng)保持足夠用藥量和用藥療程。牛支原體的敏感抗生素有四環(huán)素類、替米考星或壯觀霉素、喹諾酮類藥物如環(huán)丙沙星等。用藥療程應(yīng)維持在7～10d。治療過程中，應(yīng)注意控制合并感染或繼發(fā)感染，根據(jù)病情適時(shí)采取補(bǔ)充體液、糾正電解質(zhì)平衡紊亂、解熱鎮(zhèn)痛等輔助治療措施。

中圖分類號(hào)：S858.23

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B

文章編號(hào)：1007-1733（2015）03-0019-03

收稿日期：（2015–01–04）

基金項(xiàng)目：山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系牛產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)項(xiàng)目（SDAIT-06-011-05）

*通訊作者