胡彧嫻，蔡恩興

（漳州市農(nóng)業(yè)檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)中心，福建 漳州 363000）

氣相色譜法測(cè)定橄欖中三唑酮?dú)埩袅康牟淮_定度評(píng)定

胡彧嫻，蔡恩興

（漳州市農(nóng)業(yè)檢驗(yàn)監(jiān)測(cè)中心，福建 漳州 363000）

介紹了氣相色譜法測(cè)定橄欖中三唑酮?dú)埩袅康牟淮_定度評(píng)定方法。結(jié)果表明，測(cè)量過(guò)程中三唑酮?dú)埩袅康牟淮_定度主要來(lái)源于校準(zhǔn)過(guò)程、重復(fù)性測(cè)量和回收率；當(dāng)橄欖三唑酮含量為0.072 21 mg·kg-1時(shí)，擴(kuò)展不確定度U = 0.005 576 mg·kg-1（k = 2）。

氣相色譜；橄欖；三唑酮；不確定度

三唑酮又名百理通、粉銹寧、粉銹靈、百菌酮，屬于三唑類殺菌劑，具有高效、低毒、低殘留、持效期長(zhǎng)、內(nèi)吸性強(qiáng)等特點(diǎn)，通過(guò)抑制菌體麥角甾醇的生物合成起到殺死病菌的作用，主要用于果樹(shù)、蔬菜的銹病、炭疽病、白粉病和霜霉病等防治［1—4］。盡管三唑酮具有低殘留的特點(diǎn)，但其殘留還是給生物安全與健康帶來(lái)負(fù)面影響［5］。

近年來(lái)，有關(guān)三唑酮農(nóng)藥殘留的報(bào)道較多［6—9］，而對(duì)其殘留量不確定度評(píng)定的報(bào)道較少。測(cè)量不確定度是測(cè)量技術(shù)的重要概念，也是保證分析檢測(cè)質(zhì)量的重要因素［10］。在《檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則》中明確提出，為確保檢測(cè)結(jié)果的精準(zhǔn)度，檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)測(cè)量結(jié)果給出不確定度評(píng)定［11］。依照NY/T 761-2008《蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留的測(cè)定》［12］，本研究采用氣相色譜法，評(píng)定橄欖中三唑酮?dú)埩袅康牟淮_定度，為檢測(cè)人員判定測(cè)量結(jié)果的可信度提供參考依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

上皿式電子天平：TMP-500型，湖南儀器儀表廠；氣相色譜儀：HP6890型，安捷倫公司；三唑酮標(biāo)準(zhǔn)溶液：100 μg·mL-1，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所。

乙腈、丙酮、正己烷為色譜級(jí)。

1.2方法

依照NY/T 761-2008要求［12］，稱取25.00 g橄欖試樣于錐形瓶中，加入50.0 mL乙腈，勻漿2 min過(guò)濾，并將濾液收集到裝有足量氯化鈉（5～7 g）的具塞量筒中，充分震蕩1 min，靜置30 min后取上清液10.00 mL，經(jīng)水浴鍋加熱蒸發(fā)近干，加入2 mL正己烷待凈化，過(guò)弗羅里矽柱，淋洗液水浴蒸發(fā)近干，最終用正己烷定容至5.0 mL，供氣相色譜儀測(cè)定。使用化學(xué)工作站進(jìn)行積分計(jì)算。

1.3數(shù)學(xué)模型

根據(jù)上述方法，三唑酮?dú)埩袅堪聪率接?jì)算［13］：

式中，W為試樣中三唑酮?dú)埩袅浚╩g·kg-1）；c為最終樣液中三唑酮的濃度（μg·mL-1）；V1為提取溶劑總體積（mL）；V2為用于檢測(cè)的提取液分取體積（mL）；V3為樣液最終定容體積（mL）；m為試樣的質(zhì)量（g）。

1.4不確定度來(lái)源分析

不確定度的主要來(lái)源有：一是樣品稱量引入的不確定度；二是體積引入的不確定度；三是校準(zhǔn)過(guò)程引入的不確定度；四是重復(fù)性測(cè)量引入的不確定度；五是回收率引入的不確定度［14］。

2　結(jié)果與分析

2.1不確定度評(píng)定

2.1.1樣品稱量引入的不確定度根據(jù)天平檢定證書(shū)，最大允許誤差為±0.01 g，稱量25.00 g橄欖試樣，取均勻分布，其標(biāo)準(zhǔn)不確定度為u（m） = 0.01/= 0.005 77 g，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.1.2體積引入的不確定度在整個(gè)制樣過(guò)程中，與體積有關(guān)的不確定度有提取溶劑總體積（V1）、用于檢測(cè)的提取液分取體積（V2）和樣液最終定容體積（V3）［13］，V1、V2、V3的不確定度分別由50 mL量筒、10 mL移液管和5 mL移液管引入，因此，其標(biāo)準(zhǔn)不確定度依次為：u（V1）= 0.3120 mL，u（V2）= 0.0262 mL，u（V3）= 0.0146 mL，由體積引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度是：

2.1.3校準(zhǔn)過(guò)程引入的不確定度

2.1.3.1配制標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)證書(shū)，三唑酮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的濃度為（100.0 ± 0.08） μg·mL-1，其產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

將1 mL三唑酮標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)完全移入50 mL容量瓶中，用正己烷定容，配制成2.0 μg·mL-1的標(biāo)準(zhǔn)中間液，并將中間液配成表1中的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，在此過(guò)程中不確定度主要來(lái)源于移液管和容量瓶。

配制標(biāo)準(zhǔn)中間液引入的體積不確定度來(lái)源于50 mL容量瓶。50 mL容量瓶（A級(jí)單標(biāo)線）的容量允許誤差是±0.05 mL，取矩形分布，引入的不確定度為：u（V50） = 0.05/= 0.0289 mL。正己烷的熱膨脹系數(shù)為1.36×10-3℃-1，實(shí)驗(yàn)室的溫度差在3 ℃之間，則溫度引起的變化為±（50 × 3 × 1.36 × 10-3）= ±0.204 mL。按均勻分布，k=，則標(biāo)準(zhǔn)不確定度為0.204/= 0.118 mL。50 mL容量瓶引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度：

同上，配制系列標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積不確定度是由100、10 mL容量瓶和10、5、1 mL移液管產(chǎn)生的，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分別為0.002 43、0.002 62、0.002 62、0.002 92、0.004 68。

表1　系列標(biāo)準(zhǔn)溶液配制Table 1　The preparation for series of standard solution

計(jì)算系列標(biāo)準(zhǔn)溶液相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度時(shí)取最大值（表2），即為0.025 μg·mL-1標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度u12rel（C）= 0.007 67。因此，配制標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度為：

2.1.3.2標(biāo)準(zhǔn)工作曲線擬合引入的不確定度系列標(biāo)準(zhǔn)溶液在氣相色譜儀上重復(fù)測(cè)定2次，由工作站得擬合線性回歸方程 A= 245 635C - 595 （r = 0.9991），A 為溶液峰面積，C 為溶液濃度，r 為線性相關(guān)系數(shù)，如表3。

表2　系列標(biāo)準(zhǔn)溶液相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度Table 2　The related standard uncertainty of series of standard solution

表3　標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)Table 3　standard curve data

由標(biāo)準(zhǔn)工作曲線引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度［14］：

因此，校準(zhǔn)過(guò)程產(chǎn)生的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.1.4重復(fù)性測(cè)量引入的不確定度試樣重復(fù)測(cè)定10次（表4），三唑酮的平均含量為0.072 21 mg·kg-1，標(biāo)準(zhǔn)偏差本試驗(yàn)將2次樣品平行測(cè)定的平均值作為測(cè)量結(jié)果，因此重復(fù)性測(cè)量產(chǎn)生的不確定度為相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為：

2.1.5回收率引入的不確定度按A類評(píng)定［15］，回收率（表4）產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)不確定度和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度分別如下：

自由度為9，置信水平為 95%時(shí)，雙尾 t檢驗(yàn)的臨界值為2.262［14］，本試驗(yàn)t值為4.703，大于臨界值，說(shuō)明回收率與 100%有顯著性差異，因此結(jié)果R用來(lái)校正分析。

2.2合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度

合成相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度如下：

合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度最終為：

表4　橄欖中三唑酮含量重復(fù)測(cè)定的結(jié)果Table 4　The results of repeat measurement of triadimefon in olive

2.3擴(kuò)展不確定度

計(jì)算擴(kuò)展不確定度，取包含因子k = 2，則U = uc（X） ×k = 0.005 576 mg·kg-1，橄欖中三唑酮?dú)埩袅康臏y(cè)定結(jié)果表示為（0.072 21 ± 0.005 576） mg·kg-1，k = 2。

3　討論

蘇雪香等［16］對(duì)蔬菜滅線磷殘留量不確定度的評(píng)定表明，測(cè)量重復(fù)性和標(biāo)準(zhǔn)品稱量是影響不確定度的最大因素，并提出增加平行測(cè)定次數(shù)和選用高級(jí)別高分辨率天平的建議。丁進(jìn)鋒等［17］對(duì)大米粉中農(nóng)藥含量的不確定度進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)測(cè)定過(guò)程中不確定度主要是由標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制和樣品凈化后定容兩個(gè)步驟產(chǎn)生的，并認(rèn)為選用高精度儀器和簡(jiǎn)化處理方法可以降低不確定度。在本研究中，橄欖三唑酮?dú)埩袅康牟淮_定度主要來(lái)源于校準(zhǔn)過(guò)程、重復(fù)性測(cè)量和回收率，而稱量樣品和體積引入過(guò)程對(duì)整個(gè)不確定度影響較小。本研究結(jié)果與前人評(píng)定結(jié)果存在一定差異，是由于檢測(cè)儀器、測(cè)量方法和操作步驟等有所不同；同時(shí)在同一檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，由于操作人員的不同，檢測(cè)結(jié)果也會(huì)有所不同，因此實(shí)驗(yàn)室對(duì)測(cè)量結(jié)果進(jìn)行不確定度評(píng)定十分重要。

校準(zhǔn)過(guò)程主要是標(biāo)準(zhǔn)曲線擬合引入，重復(fù)性測(cè)量主要受人為操作影響。因此，在試驗(yàn)中如要減小不確定度，可以采取以下措施：（1）定期對(duì)氣相色譜儀進(jìn)行檢定，以提高日常檢測(cè)的準(zhǔn)確度；（2）在移液管和容量瓶的選擇上，選用精確度較高的玻璃儀器；（3）在人員方面，可定期進(jìn)行培訓(xùn)，不斷提高技術(shù)人員的操作能力。

［1］ 陳靜，楊韶松，金玉琪，唐旭兵，宋玉川. 氣相色譜法測(cè)定香料煙中三唑酮?dú)埩袅浚跩］. 理化檢驗(yàn)（化學(xué)分冊(cè)）， 2011，47（10）：1225—1226.

［2］ 樓成杰，任瑩，陳麗. 氣相色譜-質(zhì)譜-負(fù)化學(xué)電離源法測(cè)定茶葉中氟樂(lè)靈、三唑酮和溴丙磷的殘留［J］. 檢驗(yàn)檢疫學(xué)刊，2012，22（5）： 29—32.

［3］ 王志飛，黎其萬(wàn)，王振軍，趙吉壽，佴注，劉宏程. 固相萃取-毛細(xì)管柱氣相色譜-質(zhì)譜測(cè)定土壤和蔬菜中三唑酮?dú)埩袅浚跩］.理化檢驗(yàn)（化學(xué)分冊(cè)）， 2009，45（2）： 175—177.

［4］ 沈哲峰，李勤奮. C-ECD測(cè)定秸稈堆肥中百菌清、三唑酮、氯氰菊酯及溴氰菊酯四種農(nóng)藥［J］. 中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)， 2009，25（6）：236—240.

［5］ Vincelli P. Simulations of fungicide runoff following applications for turfgrass disease control［J］. Plant Disease， 2004，88（4）：391—396.

［6］ 劉毅華，楊仁斌，郭正元. 三唑酮在油菜及土壤中的殘留動(dòng)態(tài)［J］. 農(nóng)藥， 2004，43（12）： 559—560， 562.

［7］ 李國(guó)，李義強(qiáng)，孫惠青，鄭曉，王新偉，徐金麗. 三唑酮及其代謝物在水稻中殘留規(guī)律研究［J］. 山東農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2008（4）：84—87.

［8］ 劉臣輝，龔薦，馬飛. 粉銹寧在黃瓜中的消解與殘留［J］. 農(nóng)業(yè)環(huán)境保護(hù)， 1993，12（4）： 155—157，149.

［9］ 牛紅紅，王巖，逯忠斌，張浩. 三唑酮在甘藍(lán)及土壤中的殘留動(dòng)態(tài)研究［J］. 吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)， 2005，27（2）： 209—211.

［10］ 馮力，劉勇利，蔡文君，賈蘭珍，程英爽. 測(cè)量不確定度評(píng)定在分析檢測(cè)中的應(yīng)用［J］. 河北化工， 2006（2）： 51—53.

［11］ 中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì). CNAS-CL01 檢測(cè)和校準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室能力認(rèn)可準(zhǔn)則（ISO/IEC 17025： 2005）［S］. 北京： 中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社， 2006： 19.

［12］ 中華人民共和國(guó)農(nóng)業(yè)部. 蔬菜和水果中有機(jī)磷、有機(jī)氯、擬除蟲(chóng)菊酯和氨基甲酸酯類農(nóng)藥多殘留測(cè)定［S］. 北京： 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社， 2008.

［13］ 張立東，劉同英，錢(qián)家亮. 氣相色譜-質(zhì)譜儀測(cè)定蔬菜中敵敵畏殘留量的不確定度評(píng)定［J］. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2010（6）：490—492.

［14］ 賴添財(cái)，蔡恩興. GC-MS內(nèi)標(biāo)法測(cè)定蘋(píng)果中噠螨靈殘留量不確定度的評(píng)定［J］. 山西農(nóng)業(yè)科學(xué)， 2013，41（9）： 959—962.

［15］ 歐舒穎，蔡恩興，林旭梅，賴添財(cái). 氣質(zhì)聯(lián)用測(cè)定甘藍(lán)中氟蟲(chóng)腈殘留的不確定度評(píng)定［J］. 福建農(nóng)業(yè)科技， 2014（6）： 1—4.

［16］ 蘇雪香，陳章捷，張艷燕，陳金鳳，鐘堅(jiān)海. 氣相色譜法測(cè)定蔬菜中滅線磷殘留量的不確定度評(píng)定［J］. 現(xiàn)代測(cè)量與實(shí)驗(yàn)室管理， 2014（3）： 26—28.

［17］ 丁進(jìn)鋒，趙鳳敏，曹有福，劉威. 氣相色譜測(cè)定大米粉中 O，P'-DDT不確定度分析［J］. 食品與機(jī)械， 2013，29（5）：80—83，137.

Uncertainty Evaluation of the Residues of Triadimefon in Olive by Gas Chromatography

HU Yu-xian， CAI En-xing
（Zhangzhou Agricultural Test and Inspection Centre， Zhangzhou 363000， Fujian China）

Uncertainty evaluation for the residues of triadimefon in olive by gas chromatography was introduced. The results showed that the calibration process， measurement repeatability and recovery were the main sources of uncertainty， and the expanded uncertainty was 0.005 576 mg·kg-1（k = 2） as the residues of triadimefon in olive was 0.072 21 mg·kg-1

gas chromatography； olive； triadimefon； uncertainty

10.3969/j.issn.1009-7791.2015.03.005

O652

A

1009-7791（2015）03-0204-05

2015-06-16

胡彧嫻，碩士，助理農(nóng)藝師，從事農(nóng)藥殘留檢測(cè)研究。E-mail： huyuxian163@163.com