陳　君

（湖北省襄陽市食品藥品檢驗(yàn)所，湖北 襄陽 441021）

復(fù)方麝香注射液內(nèi)毒素的方法研究

陳君

（湖北省襄陽市食品藥品檢驗(yàn)所，湖北 襄陽 441021）

目的 建立復(fù)方麝香注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法。方法 按中國藥典2010年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法進(jìn)行試驗(yàn)。結(jié)果 該注射液經(jīng)過30倍稀釋后，對鱟試劑測定細(xì)菌內(nèi)毒素?zé)o干擾。結(jié)論 復(fù)方麝香注射液可以采用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法（凝膠法）進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素的限量檢查。

復(fù)方麝香注射液；細(xì)菌內(nèi)毒素檢查；干擾試驗(yàn)

復(fù)方麝香注射液是由6味中草藥制成，有豁痰開竅，醒腦安神的功效，臨床上用于痰熱內(nèi)閉所致的腦卒中昏迷。目前該藥仍沿用家兔法檢測熱原，家兔法操作繁瑣、費(fèi)時(shí)、成本高、靈敏度低，很多人都在研究該藥的內(nèi)毒素方法，我們根據(jù)2010年版藥典二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法和熱原家兔法的要求［1］，對該藥檢測進(jìn)行了研究對比，結(jié)果表明，該藥是可以用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法代替家兔法檢測熱原的。

1　儀器與材料

1.1儀器：旋渦式混懸器（天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠，ZH-2型）；電熱恒溫水浴箱（江蘇金壇市中大儀器廠，420型）；無熱源移液器（上海求精生化試劑儀器有限公司）。

1.2材料：鱟試劑2批（湛江安度斯生物有限公司，靈敏度0.5 EU，批號1301241，批號1211241），細(xì)菌內(nèi)毒素檢測用水（湛江安度斯生物有限公司，規(guī)格2.0，批號1404030，規(guī)格5.0，批號1404240），細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品（湛江安度斯生物有限公司，規(guī)格10 EU/支，批號1301050）。熱源用家兔，經(jīng)預(yù)測全部合格，復(fù)方麝香注射液（安徽金太陽生化藥業(yè)有限公司，批號131201。）

2　方法與結(jié)果

2.1內(nèi)毒素限值的確定：藥品細(xì)菌內(nèi)毒素限值（L）一般按以下公式確定：L=K/M，注射劑K=5EU/（kg?h），復(fù)方麝香注射液的用法用量中一次最大注射量為20mL，人均體質(zhì)量按60 kg計(jì)算，L=15.15 EU/mL，以此計(jì)算出復(fù)方麝香注射液內(nèi)毒素的限值應(yīng)為15 EU/mL。

這里我們要提一下，以前有很多人在確立M的時(shí)候，帶入了家兔法的注射劑量，這個(gè)應(yīng)該是不對的，2010年版藥典明確規(guī)定了M為人用每千克體質(zhì)量每小時(shí)的最大供試品劑量，且指出人均體質(zhì)量按60 kg計(jì)算，注射時(shí)間不足1 h按1 h計(jì)算。復(fù)方麝香注射液說明書上的用法用量，靜脈滴注，一次10～20mL，人均體質(zhì)量按60 kg計(jì)算的話，M=0.33mL/（kg?h），而該藥現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定熱原檢查法劑量按家兔體質(zhì)量每1 kg注射0.5mL，很多人直接將這里的0.5mL當(dāng)做M帶入計(jì)算，會導(dǎo)致計(jì)算出的細(xì)菌內(nèi)毒素限值相差1.5倍。

2.2確定最大有效稀釋倍數(shù)：L能準(zhǔn)確確定后，MVD就很好計(jì)算了，我們此次試驗(yàn)用哦鱟試劑的標(biāo)示靈敏度為0.25 EU/mL，計(jì)算出MVD=cl/λ=30。

2.3鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)：2010年版藥典規(guī)定，當(dāng)使用了新批號的鱟試劑或?qū)嶒?yàn)條件發(fā)生了任何可能影響檢驗(yàn)結(jié)果的改變時(shí)，應(yīng)進(jìn)行鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)。將120 EU/支的細(xì)菌內(nèi)毒素國家標(biāo)準(zhǔn)品用細(xì)菌內(nèi)毒素檢測用水溶解后，依法制成2、1、0.5、0.25 λ 4個(gè)濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)復(fù)核，本次試驗(yàn)所用的0.5 EU/mL的鱟試劑標(biāo)示靈敏度為0.5 EU/mL。

2.4干擾試驗(yàn)

2.4.1預(yù)實(shí)驗(yàn)：將供試品溶液按梯度稀釋至不超過最大有效稀釋倍數(shù)的溶液，按鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)項(xiàng)下操作［1］，每個(gè)濃度平行做4支管。2批鱟試劑結(jié)果一致。見表1。

表1　凝膠法預(yù)試驗(yàn)

從表1可知，復(fù)方麝香注射液對鱟試劑有干擾，稀釋30倍以上可去除干擾。

2.4.2干擾試驗(yàn)［2］：按照中國藥典2010年版二部附錄XIE細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法項(xiàng)下干擾試驗(yàn)表1制備溶液A、B、C、D，按鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗(yàn)項(xiàng)下操作。其中供試品溶液為稀釋30倍的溶液。結(jié)果見表2。

表2　凝膠法干擾試驗(yàn)

當(dāng)復(fù)方麝香注射液稀釋30倍時(shí)，干擾試驗(yàn)通過。

2.5供試品用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法與家兔法檢測結(jié)果比較：供試品稀釋30倍，參照2010年版藥典二部附錄XIE細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法，用0.5 EU/支的鱟試劑檢驗(yàn)，結(jié)果為陰性。按照2010年版藥典二部附錄XID家兔法檢測，結(jié)果也為陰性，兩種方法結(jié)果完全一致。

3　討 論

復(fù)方麝香注射液為中成藥制劑，為臨床常用藥品，但是目前仍采用家兔法檢測熱原，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，成本高。本次試驗(yàn)，采用供試品30倍稀釋液，0.5 EU/mL的鱟試劑對樣品進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢測，結(jié)果與家兔法一致且無干擾。經(jīng)論證，復(fù)方麝香注射液可以用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法代替家兔熱原檢查法。

［1］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典二部［M］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄71-73.

［2］ 黃清泉，夏鎮(zhèn)明.藥品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查的試驗(yàn)設(shè)計(jì)［J］.中國藥學(xué)雜志，1997，32（2）：72.

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1671-8194（2015）10-0068-01