郝　猛，李觀華，梅　錦，劉曉峰，陳雪禮

（九江市第一人民醫(yī)院/南昌大學(xué)附屬九江醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西九江332000）

·檢驗(yàn)與臨床·

中性粒細(xì)胞CD64的檢測(cè)在感染性疾病中的臨床診斷意義

郝猛，李觀華，梅錦，劉曉峰，陳雪禮

（九江市第一人民醫(yī)院/南昌大學(xué)附屬九江醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西九江332000）

目的探討應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)中性粒細(xì)胞CD64的檢測(cè)評(píng)價(jià)其在感染性疾病中的診斷意義。方法通過收集本院120例感染患者，對(duì)照組為24例健康體檢者的研究，測(cè)定中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、C-反應(yīng)蛋白及降鈣素原，并同時(shí)進(jìn)行細(xì)菌培養(yǎng)。根據(jù)白細(xì)胞分類，病原學(xué)及血清學(xué)檢查將患者分為細(xì)菌性感染（83例）和非細(xì)菌性感染（37例），再根據(jù)血培養(yǎng)陽(yáng)性又分為敗血癥組（29例）和局部感染組（54例）。通過計(jì)算各組中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)、中性粒細(xì)胞百分比（Neu%）、C反應(yīng)蛋白值（CRP）、降鈣素原（PCT）進(jìn)行比較，分析各組患者之間CD64指數(shù)的差異，并同時(shí)對(duì)Neu%、CRP和PCT的特異性和敏感性進(jìn)行分析。結(jié)果細(xì)菌感染組CD64指數(shù)明顯高于正常對(duì)照組（P＜0.05），細(xì)菌感染組CD64指數(shù)明顯高于非細(xì)菌感染組具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05），同時(shí)計(jì)算外周血CD64指數(shù)的敏感性和特異性都高于Neu%、CRP和PCT。結(jié)論外周血中性粒細(xì)胞CD64的檢測(cè)是診斷早期細(xì)菌性感染的敏感而又特異性的指標(biāo)，有助于臨床正確診斷細(xì)菌感染性疾病。

流式細(xì)胞術(shù)；CD64指數(shù)；中性粒細(xì)胞；細(xì)菌感染；C反應(yīng)蛋白；降鈣素原

細(xì)菌感染目前仍然是導(dǎo)致人類發(fā)病和死亡的主要病因之一，然而早期缺乏特異性的臨床表現(xiàn)，不能盡早得以診治，易引起膿毒癥而導(dǎo)致死亡。目前細(xì)菌培養(yǎng)仍然是診斷細(xì)菌感染的金標(biāo)準(zhǔn)，但其因檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)、培養(yǎng)陽(yáng)性率低、干擾因數(shù)多而不能廣泛用于臨床對(duì)細(xì)菌感染的快速診斷；通常比較常用的白細(xì)胞計(jì)數(shù)及其分類、紅細(xì)胞沉降率、血清C反應(yīng)蛋白和降鈣素原的測(cè)定等均又非特異性指標(biāo)且敏感性較低。CD64是lgG的Fc受體之一，細(xì)菌感染時(shí)，中性粒細(xì)胞的表達(dá)可顯著增加，一般情況下，機(jī)體感染或內(nèi)毒素入侵時(shí)CD64在刺激后4～6h即可升高［1］。近年來(lái)，多項(xiàng)研究發(fā)現(xiàn)中性粒細(xì)胞CD64的定量分析是早期診斷和鑒別細(xì)菌感染的可靠的敏感指標(biāo)［2］。通過對(duì)本院120例感染性患者采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其中性粒細(xì)胞CD64的定量分析，探討其在感染性疾病中的臨床診斷意義。

1　資料與方法

1.1研究對(duì)象選取2014年1月-2014年12月間我院收治入院的120例感染性患者：年齡21～80歲，平均年齡為50.6歲，男性66例，女性54例。其中敗血癥感染組（A組）29例，局部感染組（B組）54例，非細(xì)菌感染組（C組）37例，正常對(duì)照組（D組）24例。

1.2儀器與試劑Beckman Coulter FC500流式細(xì)胞儀；Siemens ADVIAR2120五分類血細(xì)胞分析儀；Beckman Coulter IMMAGE800全自動(dòng)特定蛋白儀；羅氏Cobas e601化學(xué)發(fā)光儀；PhoenixTM-100全自動(dòng)細(xì)菌鑒定/藥敏系統(tǒng)；試劑使用各儀器公司提供的配套試劑。

1.3方法入院采集患者EDTA-K2抗凝血1ml，取兩支流式專用試管每支試管分別加入100μl全血（EDTA-K2抗凝），溶血，再分別加入CD64FITC和同型對(duì)照10μl，混勻避光保存20min后，PBS洗滌2次，加入500μlPBS溶液，靜置15min后置于流式細(xì)胞儀，檢測(cè)并計(jì)算出中性粒細(xì)胞CD64指數(shù)（中性粒細(xì)胞CD64平均熒光強(qiáng)度與淋巴細(xì)胞CD64平均熒光強(qiáng)度的比值［3］）。Neu%、CRP、PCT和細(xì)菌培養(yǎng)按照檢測(cè)項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)作業(yè)流程（SOP）文件操作進(jìn)行檢測(cè)。通過繪制受試者工作特征曲線（ROC），確定Cutoff值，判斷敏感性和特異性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，組間兩兩比較采用單因素方差分析，CD64指數(shù)、Neu%、CRP與PCT采用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析所有假設(shè)檢驗(yàn)均以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1各組中外周血CD64指數(shù)、Neu%、CRP和PCT進(jìn)行比較細(xì)菌感染組中CD64指數(shù)較非細(xì)菌感染組和對(duì)照組均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05；而非細(xì)菌感染組較正常對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。細(xì)菌感染組中敗血癥組明顯高于局部感染組，且均明顯高于正常對(duì)照組（P＜0.05）。見表1、2。

2.2CD64指數(shù)、Neu%、CRP和PCT的ROC曲線分析以細(xì)菌感染組和正常對(duì)照組來(lái)制作CD64指數(shù)、Neu%、CRP與PCT診斷細(xì)菌感染的ROC曲線。見圖1。通過比較ROC曲線面積得出CD64指數(shù)、Neu%、CRP和PCT的面積分別為0.912、0.802、0.824和0.844。根據(jù)ROC曲線分別取得CD64指數(shù)、Neu%、CRP和PCT診斷細(xì)菌感染的Cutoff值為1.25、75%、0.8mg/dl和0.5ng/ml。根據(jù)取得的Cutoff值分別計(jì)算它們?cè)\斷細(xì)菌感染的敏感性和特異性。見表3。當(dāng)CD64指數(shù)取Cutoff值為1.25時(shí)，診斷敗血癥的敏感性為95.8%，特異性為92.2%。另外當(dāng)CD64指數(shù)和Neu%、CRP、PCT的聯(lián)合檢測(cè)時(shí)其診斷細(xì)菌感染的敏感性為91.5%，特異性為88.3%。

表1　細(xì)菌感染組、非細(xì)菌感染組CD64指數(shù)、Neu%、CRP及PCT與正常對(duì)照組比較±s）

表1　細(xì)菌感染組、非細(xì)菌感染組CD64指數(shù)、Neu%、CRP及PCT與正常對(duì)照組比較±s）

注：細(xì)菌組分別與非細(xì)菌組、對(duì)照組比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05；非細(xì)菌組與對(duì)照組比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＞0.05。細(xì)菌組包括敗血癥組和局部感染組。

組別nCD64指數(shù)Neu（%）CRP（mg/dl）PCT（ng/ml）細(xì)菌感染組非細(xì)菌感染組正常對(duì)照組83 37 24 4.57±2.15 1.23±0.54 1.07±0.33 71.80±13.90 60.43±18.25 58.09±9.14 6.11±2.04 0.62±0.34 0.41±0.21 4.93±2.94 0.35±0.21 0.28±0.20

表2　敗血癥組、局部細(xì)菌感染組CD64指數(shù)、Neu%、CRP及PCT與正常對(duì)照組比較±s）

表2　敗血癥組、局部細(xì)菌感染組CD64指數(shù)、Neu%、CRP及PCT與正常對(duì)照組比較±s）

注：敗血癥組分別與局部感染組、對(duì)照組比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05；局部感染組與對(duì)照組比較也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P＜0.05。

組別nCD64指數(shù)Neu（%）CRP（mg/dl）PCT（ng/ml）敗血癥組（A組）局部細(xì)菌感染組（B組）正常對(duì)照組（D組）29 54 24 5.97±2.67 3.85±1.24 1.07±0.33 73.86±14.12 67.58±11.92 67.58±11.92 7.85±3.04 2.93±1.59 0.41±0.21 6.24±3.56 2.25±1.53 0.28±0.20

圖1　CD64指數(shù)、Neu%、CRP、PCT ROC曲線

表3　ROC曲線得出CD64指數(shù)、Neu%、CRP和PCT診斷細(xì)菌性感染的敏感性和特異性（%）

3　討論

CD64是能識(shí)別免疫球蛋白、對(duì)IgG單體具有高親和力、介導(dǎo)體液免疫和細(xì)胞免疫對(duì)感染性疾病具有早期診斷價(jià)值的IgG Fc片段受體I（FcγR I）。CD64是相對(duì)分子質(zhì)量為72 000的跨膜糖蛋白，由位于1號(hào)染色體長(zhǎng)臂上的A、B、C 3個(gè)基因編碼，屬于免疫球蛋白超家族的成員。在外周血中主要分布于單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞及樹突細(xì)胞等抗原遞呈細(xì)胞表面，一般呈低水平表達(dá)［4］。當(dāng)機(jī)體發(fā)生感染或內(nèi)毒素入侵時(shí)，大量致炎細(xì)胞因子（γ干擾素和中性粒細(xì)胞集落刺激因子）釋放，中性粒細(xì)胞激活，CD64在干擾素和中性粒細(xì)胞集落刺激因子刺激下大量表達(dá)。CD64作為感染性疾病良好的診斷指標(biāo)，在臨床上具有廣泛的應(yīng)用前景。

臨床對(duì)細(xì)菌性感染的診斷和鑒別診斷常用的檢測(cè)項(xiàng)目包括WBC計(jì)數(shù)或Neu%、CPP、PCT和紅細(xì)胞沉降率（ESR）等，但均缺乏明顯的特異性診斷依據(jù)且敏感性較低。通過檢測(cè)WBC計(jì)數(shù)和中性粒細(xì)胞百分?jǐn)?shù)（Neu%）可以對(duì)感染做出初步診斷，但WBC計(jì)數(shù)或Neu%增加并非一定由細(xì)菌感染引起，如運(yùn)動(dòng)、妊娠、分娩以及某些病理狀況如急性創(chuàng)傷、急性出血等，WBC計(jì)數(shù)也會(huì)增高，而在某些細(xì)菌感染如傷寒、副傷寒，WBC計(jì)數(shù)或Neu%反而會(huì)下降。血清CRP是臨床常用的炎性指標(biāo)之一，但是除細(xì)菌感染之外，急性創(chuàng)傷、腫瘤、心梗死、結(jié)締組織病等疾病的血液CRP濃度也會(huì)急劇升高，因此CRP在細(xì)菌感染診斷與鑒別診斷中的特異性也較差。血清降鈣素原（procalcitonin，PCT）是臨床常用的另一個(gè)炎性指標(biāo)，PCT作為診斷感染和敗血癥的指標(biāo)準(zhǔn)確性好于CRP，而且感染時(shí)比CRP升高更迅速，但近期分析表明PCT在診斷細(xì)菌性感染時(shí)敏感性和特異性只有中等診斷能力［5］。但它們聯(lián)合CD64檢測(cè)可以提高細(xì)菌性感染的診斷率。

隨著流式細(xì)胞儀的普及和應(yīng)用，外周血中性粒細(xì)胞CD64的表達(dá)在臨床診斷和治療細(xì)菌性感染中越來(lái)越多的得到應(yīng)用。CD64表達(dá)指數(shù)（CD64指數(shù)）即中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞表面CD64表達(dá)之比值；是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的檢測(cè)細(xì)菌性感染的一種簡(jiǎn)單而有效的檢測(cè)參數(shù)［3］。采用CD64指數(shù)來(lái)取代傳統(tǒng)的檢測(cè)中性粒細(xì)胞CD64表達(dá)，因?yàn)橹行粤＜?xì)胞CD64表達(dá)容易受到多種因素的影響，而CD64指數(shù)既可對(duì)CD64表達(dá)進(jìn)行量化，也可減少外源因素的影響。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌感染組CD64指數(shù)和明顯高于非細(xì)菌感染組和正常對(duì)照組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；這表明CD64指數(shù)可用于細(xì)菌性感染與非細(xì)菌性感染的鑒別診斷［6］。而通過ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)，CD64指數(shù)的ROC曲線下面積高于Neu%、CPP和PCT；CD64指數(shù)診斷細(xì)菌性感染的敏感性和特異度也高于Neu%、CPP和PCT。這表明CD64指數(shù)對(duì)細(xì)菌性感染的診斷效能要優(yōu)于Neu%、CPP和PCT。實(shí)驗(yàn)也表明CD64指數(shù)和Neu%、CRP和PCT的聯(lián)合檢測(cè)可提高診斷細(xì)菌感染的靈敏度和特異性。另外通過本實(shí)驗(yàn)敗血癥組對(duì)局部感染組和正常對(duì)照組CD64指數(shù)的比較都有明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＜0.05）；與文獻(xiàn)報(bào)道CD64可作為區(qū)分細(xì)菌感染和診斷敗血癥的有效指標(biāo)［7，8］相一致，也與Icardi等［9］的研究相符。CD64對(duì)診斷敗血癥和全身感染具有很高的敏感性和特異性，成年人和兒童敏感性達(dá)到90%以上，特異性為90%～100%［1］。而馮萍等［10］的研究還證實(shí)，CD64指數(shù)可判斷感染的嚴(yán)重程度；Livaditi［11］等學(xué)者研究也發(fā)現(xiàn)，中性粒細(xì)胞CD64的表達(dá)與細(xì)菌感染的嚴(yán)重程度和預(yù)后具有密切相關(guān)［12］。

綜上所述，外周血中性粒細(xì)胞CD64的檢測(cè)是診斷早期細(xì)菌性感染（尤其是敗血癥）的敏感而又特異性的指標(biāo)；有助于臨床正確診斷細(xì)菌性感染疾?。?3-16］。同時(shí)檢測(cè)CD64可以判斷細(xì)菌感染的嚴(yán)重程度。

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