銀耳口服液中銀耳多糖測定及提高免疫試驗研究

吳熙，陳麗春

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350122；2.廈門中藥廠有限公司，福建廈門361100）

銀耳口服液中銀耳多糖測定及提高免疫試驗研究

吳熙1，陳麗春2

（1.福建中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，福建福州350122；2.廈門中藥廠有限公司，福建廈門361100）

目的測定銀耳口服液中銀耳多糖的含量，觀察銀耳口服液對醋酸潑尼松造模小鼠非特異性免疫功能的影響。方法①采用苯酚－濃硫酸法測定銀耳口服液銀耳多糖的含量。②選16～18g小鼠50只，按性別、體重依分層隨機(jī)分5組，每組10只，雌雄各半。除正常組外，其他4組小鼠用50mg／kg的醋酸潑尼松隔日給小鼠灌胃造模，造成小鼠免疫功能降低的模型。除模型組外，其他3組小鼠分別給30mL、15mL、7.5mL的銀耳口服液，正常組和模型組小鼠灌胃飲用水，每天1次，連續(xù)15 d。末次給藥后，次日小鼠稱體重，摘眼球放血處死，解剖取脾臟和胸腺稱重，計算臟器系數(shù)。另選18～22g小鼠50只，分組、造模、給藥同②。末次給藥后，次日小鼠腹腔注射5%（V／V）雞紅細(xì)胞懸液0.5mL，6 h后，頸椎脫臼處死小鼠，腹腔注射生理鹽水2mL，輕揉小鼠腹部后，剖開腹腔用吸管吸小鼠腹腔液，滴在干凈的載玻片上，涼干后染色，油鏡觀察并計算吞噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的百分率。結(jié)果①測得銀耳口服液中銀耳多糖含量為0.031%；②銀耳口服液15～30mL／kg可提高醋酸潑尼松造模小鼠免疫器官脾臟、胸腺的重量和吞噬細(xì)胞的吞噬功能，與模型組比較，P＜0.05或0.01。結(jié)論苯酚-濃硫酸法為測定銀耳口服液中銀耳多糖含量的有效方法，銀耳口服液具有提高非特異性免疫功能作用，為銀耳口服液的質(zhì)量和有效性提供實驗依據(jù)。

銀耳口服液；銀耳多糖；免疫器官；吞噬功能

銀耳口服液由人工栽培的銀耳（又稱白木耳）制成的口服液，為保證銀耳口服液的質(zhì)量和評價銀耳口服液提高免疫力的有效性，我們參照文獻(xiàn)［1］，對銀耳口服液的指標(biāo)性成分銀耳多糖進(jìn)行含量測定和銀耳口服液提高免疫力的試驗研究?，F(xiàn)將試驗結(jié)果報告如下：

1 實驗材料

1.1 藥品與試劑銀耳口服液（福建中醫(yī)藥大學(xué)藥理毒理實驗室制備，批號：20120902）；醋酸潑尼松（浙江仙琚制藥股份有限公司，生產(chǎn)批號：120336）；5%雞紅細(xì)胞懸液，實驗時配制；所需試劑均為分析純。

1.2 動物昆明小鼠，體重16～18g、18～22g，雌雄各半，購于上海斯萊克實驗動物有限責(zé)任公司，合格證號：2007000520335。

1.3 儀器752-型紫外分光光度計（上海分析儀器總廠）；RE-52型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）；電子天平ES-C-600（湘儀天平儀器有限公司）；生物顯微鏡（OLYMPUS BX-40）。

2 實驗方法與結(jié)果

2.1 銀耳口服液銀耳多糖的含量測定采用苯酚－濃硫酸法［1］

2.1.1 銀耳多糖提取與精制復(fù)水完全的銀耳子實體經(jīng)機(jī)械粉碎、超聲波處理后，在120℃水中浸提多糖物質(zhì)；離心收集上清液，在80℃濃縮至原體積的1／5，用三倍量95%乙醇醇析使含醇量達(dá)80%；離心收集沉淀，沉淀物依次用無水乙醇、無水乙醚洗滌，置干燥器中干燥，得多糖干品。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備精密稱取105℃干燥恒重的銀耳多糖干品50 mg，置100 mL容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，即得標(biāo)準(zhǔn)溶液；精密吸取對照品溶液0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL，分別置具塞試管中，依次加水至1.0 mL，再分別加入5%苯酚1.0 mL、濃硫酸5.0 mL顯色，搖勻，放置5 min；以1.0 mL蒸餾水作空白對照，于500nm波長處測定吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為：C＝0.0023+4.32A，r＝0.9993。

2.1.3 含量測定取銀耳口服液500 mL，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器內(nèi)濃縮體積至200 mL；濃縮液∶氯仿∶正丁醇（25∶5∶1）置分液漏斗內(nèi)振搖提取30 min，離心15 min，除去蛋白沉淀，取上清液；加95%乙醇使含醇量達(dá)80%，抽濾，60℃烘干，置100 mL量瓶中加水至刻度，作為供試液；取供試液1.0 mL置具塞試管中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備方法測定吸光度，3次均值A(chǔ)＝0.0713，由回歸方程計算出銀耳口服液中的銀耳多糖含量約0.031%

2.2 銀耳口服液對小鼠非特異性免疫的影響［2，3］

2.2.1 銀耳口服液對潑尼松造模小鼠免疫器官脾臟、胸腺指數(shù)的影響選體重16～18g昆明種小鼠50只，雌雄各半，按性別、體重分層隨機(jī)分為5組，每組10只，雌雄各半。實驗設(shè)：正常組、模型組、模型+銀耳口服液高、中、低（30 mL／kg、15 mL／kg、7.5 mL／kg）3個劑量組；小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，銀耳口服液中、低劑量用飲用水配成與高劑量等體積30 mL，均按體重0.3 mL／l0g灌胃；正常組和模型組小鼠灌服等體積飲用水。每天上午灌胃1次，連續(xù)15 d。同時除正常組外，其他各組小鼠1、 3、5、7、9、11、13、15日下午，灌服0.25%醋酸潑尼松溶液，按體0.2 mL／l0 g（50 mg／kg）造模。末次給藥后，小鼠禁食不禁水過夜，次日小鼠稱重后，摘眼球放血處死，解剖取脾臟和胸腺稱重，計算臟器指數(shù)。

脾和胸腺指數(shù)/（mg／g）＝脾或胸腺重量／體重。

結(jié)果見表l。

表1 銀耳口服液對醋酸潑尼松造模小鼠免疫器官脾、胸腺指數(shù)的影響（x±s）

2.2.2 銀耳口服液對醋酸潑尼松造模小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響選體重18～22 g昆明種小鼠50只，雌雄各半，按性別、體重分層隨機(jī)分為5組，每組10只，雌雄各半。實驗設(shè)：正常組、模型組、銀耳口服液高、中、低（30 mL／kg、15 mL／kg、7.5 mL／kg）3個劑量組。小鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)3 d后，銀耳口服液中、低劑量用飲用水配成與高劑量等體積30 mL，均按體重0.3 mL／l0g灌胃；正常組和模型組小鼠灌服等體積飲用水。每天上午灌胃1次，連續(xù)15 d。同時除正常組外，其他各組小鼠1、3、5、7、9、11、13、15日下午，灌服0.25%醋酸潑尼松溶液，按體0.1m2／10 g（50mg／kg）造模。末次給藥后，次日小鼠腹腔注射5%（V／V）雞紅細(xì)胞懸液0.5 mL，6 h后，頸椎脫臼處死小鼠，腹腔注射生理鹽水2 mL，輕揉小鼠腹部后，剖開腹腔用吸管吸小鼠腹腔液，滴在干凈的載玻片上，涼干后染色，油鏡觀察并計算吞噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞的百分率。結(jié)果見表2。

表2 銀耳口服液對醋酸潑尼松造模小鼠腹腔吞噬細(xì)胞吞噬影響（x±s）

2.2.3 統(tǒng)計學(xué)處理采用簡明統(tǒng)計學(xué)處理品V2.0，數(shù)據(jù)用x±s表示，組間差異比較用t檢驗。

3 討論

銀耳性平，味甘、淡，無毒，具有潤肺生津、滋陰養(yǎng)胃、益氣和血之功效，主要含多糖、甘露醇、氨基酸、維生素和微量元素等。現(xiàn)代研究證實：銀耳多糖具有提高人體免疫功能、延緩衰老等作用［4］。本試驗測定銀耳指標(biāo)性成分銀耳多糖的含量，同時證實該銀耳口服液具有提高非特異性免疫功能的作用，提高醋酸潑尼松造模小鼠免疫器官脾、胸腺指數(shù)和腹腔吞噬細(xì)胞吞噬功能，為銀耳口服液的質(zhì)量和有效性提供保證。該銀耳口服液有望成為提高免疫功能的保健品，值得進(jìn)一步完善研究及推廣應(yīng)用。

［1］呂玉光，楊麗敏.銀耳中多糖的含量測定［J］.黑龍江醫(yī)藥科學(xué)，1999，22（6）：32.

［2］張大方，金若敏.藥理與中藥藥理實驗［M］.3版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2013：89-91.

［3］李儀奎.中藥藥理實驗方法學(xué)［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1991：155-158.

［4］陳飛飛，蔡東聯(lián).銀耳多糖的主要生物學(xué)效應(yīng)研究進(jìn)展［J］.中西醫(yī)結(jié)合學(xué)報，2008，6（18）：862-863.

R914.4

A

1000-338X（2015）04-0046-02

2015－06－05

吳熙（1982—），男，助理實驗師，主要從事藥物制劑分析。